Ο Ρόλος της Κυτταρομετρίας Ροής

Γιώργος ΡασιδάκηςΛέκτορας Παθολογικής Ανατομικής

Σύγχρονο αιμοπαθολογοανατομικό εργαστήριο

Μορφολογία

Ιστοχημεία

Ανοσοϊστοχημεία

In situ υβριδισμός

Κυτταρομετρία ροής

Κυτταρογενετική

Μοριακή διαγνωστική(PCR, Southern, RT-PCR,

Real Time PCR κτλ.)

Κλασσική κυτταρογενετική

FISH

Η κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιεί την αρχή της υδροδυναμικής εστίασης των κυττάρων.

Το δείγμα ενίεται σε ειδικό διαμέρισμα όπου υδροδυναμικά η ροή στενεύει σε διάμετρο αναγκάζοντας το κύτταρο να διέλθει ένα-ένα από οπή πριν συναντήσει τη δέσμη laser.

Η δέσμη σκεδάζεται και εκπέμπονται φωτόνια σε φάσμα μοναδικό ως προς το χρησιμοποιούμενο φθοριόχρωμα.

Different cell populations of bone marrow aspirate

Αξιολόγηση γραφήματοςκυτταρομετρίας ροής

Αντ

ίσω

μα

Α

Αντίσωμα Β

Α- Α+

Β- Β-Α- Α+

Β+ Β+

Διαγνωστική κυτταρομετρία ροής

ΥΛΙΚΟ

Αναρρόφηση μυελού

Περιφερικό αίμα

FNA

Λεμφαδενικός

ιστός

Κλινικές εφαρμογές κυτταρομετρίας ροής

• Διάγνωση και υπο-τυποποίηση αιματολογικών κακοηθειών (π.χ. λευχαιμιών)

• Παρακολούθηση υπολειπόμενης νόσου• Μέτρηση λεμφοκυτταρικών πληθυσμών σε

ανοσοανεπάρκειες (π.χ. HIV)• Ανάλυση λειτουργικότητας ή ενεργοποίησης

λεμφοκυττάρων (π.χ. CD11b/CD18, CD154)• Μέτρηση CD34+ κυττάρων μετά από BMT• Ανάλυση πλοειδικότητας DNA• Ανίχνευση εμβρυϊκών κυττάρων στο μητρικό αίμα

Ερευνητικές εφαρμογές κυτταρομετρίας ροής

• Ανίχνευση έκφρασης/συνέκφρασης αντιγόνων σε κυτταρικές σειρές, μοντέλα πειραματοζώων κ.τ.λ.

• Ανάλυση φάσεων κυτταρικού κύκλου (π.χ. PI ή BrdU assay) και απόπτωσης (π.χ. Annexin V binding) in vitro

• Διαχωρισμός κυτταρικών πληθυσμών (cell sorting)• Μελέτες αρχέγονων κυττάρων (stem cells)• …και πολλές άλλες…

LYMPHOMA PANEL

CD45 Human Leukocytes

CD3 Pan T Lymphocytes

CD5 Pan T Lymphocytes

CD7 Pan T Lymphocytes

CD4 T-helper Lymphocytes

CD8 T-suppressor/cytotoxic Lymphocytes

CD10 B-cells

CD19 Pan B-cells

CD20 Mature B-cells

FMC7 Activated B-cells

CD23 Activated B-cells

CD38 Plasma cells, activated T-cells

CD103 T and B Lymphocytes

CD11c T and B cells, NK cells, monocytes

CD25 Activated B-cells

CD22 B-cells

Kappa Light chains

Lambda Light chains

LEUKEMIA PANEL

CD45 Human Leukocytes

CD5 Pan T Lymphocytes

CD10 B Lymphocytes

CD19 Pan B Lymphocytes

CD20 Mature B Lymphocytes

HLA-DR (I3) Activated T and B Lymphocytes

CD34 Progenitor Cell

CD117 Progenitor Cell

CD15 Monocytes/Granulocytes

CD33 Myelocyte/Monocyte

CD56 Natural Killer Cells

CD14 Monocyte

CD13 Myelocyte/Monocyte

CD64 Monocytes

cMPO Myeloperoxidase

c79a B Cells

C3 Cytoplasmic CD3 T Cells

cTDT Immature Lymphocytes/thymocytes

PLASMA CELL PANEL

CD138 Plasma cells

CD38 Plasma cells, Activated T-cells

CD56 Natural Killer Cells

CD45 Human Leukocytes

cKappa Cytoplasmic light chain

cLambda Cytoplasmic light chain

ΟΞΕΙΑ ΛΕΜΦΟΒΛΑΣΤΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ

Λέμφωμα-λευχαιμία από κύτταρα-βλάστες Τ- ή Β- κυτταρικής προέλευσης που πρωτοπαθώς προσβάλλει

το περιφερικό αίμα και μυελό των οστών (λευχαιμία) ή

λεμφαδένες και εξωλεμφαδενικές εντοπίσεις(λέμφωμα) (<25% διήθηση μυελού)

ΛεμφοβλαστικήΛευχαιμία/λέμφωμα

75% Β-κύτταρα

25% Τ-κύτταρα

ενηλίκωνπαιδιών85% Β-κύτταρα

15% Τ-κύτταρα

Childhood B-ALL

GATE: Blasts Bright expression of CD10 and CD19

Τ – ΟΞΕΙΑ ΛΕΜΦΟΒΛΑΣΤΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ

Τ – ΟΞΕΙΑ ΛΕΜΦΟΒΛΑΣΤΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ

TDT+, CD19- CD3+

Περιφερικό αίμα

The t(14;19)(q32;q13)-positive CLL

The t(14;19)(q32;q13)-positive B-CLL

The t(14;19)(q32;q13)-positive small B-cell leukaemia

ΗΠΑΤΟΣΠΛΗΝΙΚΟ Τ- ΛΕΜΦΩΜΑ

CD4+CD56+ BT: The classical entity

Clinical presentation: Skin or LN presentation, with rapid BM/PB dissemination

Morphology: lymphoid (+/- blastoid), large cell, DC2-like

Immunophenotype: CD4+, CD43+, CD56+, DR+