Εφαρμογές κυτταρομετρίας ροής

∂º∞ƒªO°∏ Δ∏™ ∫ÀΔΔ∞ƒOª∂Δƒπ∞™ ƒO∏™ °π∞ ΔO¡ ∂§∂°ÃO Δ∏™ §∂πΔOÀƒ°π∫OΔ∏Δ∞™

Δø¡ §∂ªºO∫ÀΔΔ∞ƒø¡. ª∂§∂Δ∏ ™∂ À°π∏ ¶∞π¢π∞ ∫∞π ¶∞π¢π∞

ª∂ ∞ÀΔO∞¡O™∞ ƒ∂Àª∞Δπ∫∞ ¡O™∏ª∞Δ∞

ANNA™ Δ∞¶∞ƒ∫OÀμπO§O°OY

¢I¢AKTOPIKH ¢IATPIBH

Y¶OB§H£HKE ™THN IATPIKH ™XO§HTOY API™TOTE§EIOY ¶ANE¶I™THMIOY £E™™A§ONIKH™

API™TOTE§EIO ¶ANE¶I™THMIO £E™™A§ONIKH™

IATPIKH ™XO§H

TOMEA™ À°∂π∞™ ΔOY ¶∞π¢πOÀ

A′ ¶∞π¢π∞ΔPIKH K§INIKH ∞.¶.£.

¢IEY£YNTƒπ∞: ∏ KA£H°HTƒπ∞ º§. ∫∞¡∞∫OY¢∏-Δ™∞∫∞§π¢OY

¶ANE¶. ETO™ 2005-2006 AÚÈıÌ. 1924

£E™™A§ONIKH 2005

H TPIME§H™ ™YMBOY§EYTIKH E¶ITPO¶H

º§øƒ∂¡Δπ∞ ∫∞¡∞∫OÀ¢∏-Δ™∞∫∞§π¢OÀ, ∫∞£∏°∏Δƒπ∞

Ã∞´¢ø Δ™∞¡Δ∞§∏, ANA¶§. K∞£∏°∏Δƒπ∞

ª∞ƒπ∞ ¡Δ∞OÀ¡Δ∞∫∏, ∂¶π∫. ∫∞£∏°∏Δƒπ∞

H E¶TAME§H™ E•ETA™TIKH E¶ITPO¶H

º§øƒ∂¡Δπ∞ ∫∞¡∞∫OÀ¢∏-Δ™∞∫∞§π¢OÀ, ∫∞£∏°∏Δƒπ∞

Ã∞´¢ø Δ™∞¡Δ∞§∏, ANA¶§. K∞£∏°∏Δƒπ∞

ª∞ƒπ∞ ¡Δ∞OÀ¡Δ∞∫∏, ∂¶π∫. ∫∞£∏°∏Δƒπ∞

πø∞¡¡∏™ Δ™πOÀƒ∏™, K∞£∏°∏Δ∏™

∞§∂•∞¡¢ƒO™ ∫øΔ™∏™, K∞£∏°∏Δ∏™

¡π∫O§AO™ ª∞§π™πOμ∞™, ∞¡∞¶§. ∫∞£∏°∏Δ∏™

¡Oƒª∞ μ∞μ∞Δ™∏-Ãƒπ™Δ∞∫∏, K∞£∏°∏Δƒπ∞

«�H �γκρισις τ�ς Διδακτ�ρικ�ς Διατρι��ς �π� τ�ς �Iατρικ�ς Σ��λ�ς τ�� Aριστ�τελε��υΠανεπιστημ��υ Θεσσαλ�ν�κης, δ!ν �π�δηλ�" #π�δ��$ν τ%ν γνωμ%ν τ�� συγγρα'!ως».

(N�μ�ς 5343/32, �ρθρ. 202 § 2 κα ν. 1268/82, �ρθρ. 50 § 8)

API™TOTE§EIO ¶ANE¶I™THMIO £E™™A§ONIKH™

IATPIKH ™XO§H

¶POE¢PO™ TH™ ™XO§H™

IøANNH™ N. M¶ONTH™

A¡¡∞™ Δ∞¶∞ƒ∫OY — ¢I¢AKTOPIKH ¢IATPIBH

™ÙÔÓ Ú›ÁÎÈ·Î·È ÛÙÔÓ ·ÁÎ·Ï›ÙÛ·

¶ E ƒ π ∂ Ã O ª ∂ ¡ ∞

™À¡Δª∏™∂π™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

¶ƒO§O°O™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

A. °∂¡π∫O ª∂ƒO™

1. §∂ªºO∫ÀΔΔ∞ƒ∞ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

μ Î‡ÙÙ·Ú· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

Δ Î‡ÙÙ·Ú· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

∞Ó·ÁÓÒÚÈÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ·fi Ù· Δ-Î‡ÙÙ·Ú· Î·È ÂÓÂÚÁÔÔ›Ë-

Û‹ ÙÔ˘˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28

∞¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ·

in vitro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

¢Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36

∫˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ Î‡ÎÏÔ˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38

ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40

∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿ÁÔ˘Ó

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42

2. ∫ÀΔΔ∞ƒOª∂Δƒπ∞ ƒO∏™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46

πÛÙÔÚÈÎ‹ ·Ó·‰ÚÔÌ‹ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46

¶ÏÂÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49

∂Ê·ÚÌÔÁ¤˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51

∞Ú¯¤˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53

·. ™‡ÛÙËÌ· ÚÔ‹˜ ˘ÁÚÒÓ (˘‰ÚÔ‰˘Ó·ÌÈÎfi Û‡ÛÙËÌ·) . . . . . . . . . . . . . . . 53

‚. OÙÈÎfi Û‡ÛÙËÌ· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54

ºıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ‹ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59

Á. ∏ÏÂÎÙÚÔÓÈÎfi Û‡ÛÙËÌ· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62

∞ÂÈÎfiÓÈÛË ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62

∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ıÂÙÈÎfiÙËÙ·˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65

∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎfi˜ ¢È·¯ˆÚÈÛÌfi˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

7

3. ª∂§∂Δ∏ ΔOÀ ∫ÀΔΔ∞ƒπ∫OÀ ∫À∫§OÀ ∫∞π ª∂Δƒ∏™∏ ΔOÀ ∫ÀΔΔ∞ƒπ∫OÀ DNA (¶O™OΔπ∫∏ DNA ∞¡∞§À™∏) ª∂ ∫ÀΔΔ∞ƒOª∂Δƒπ∞ ƒO∏™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69

4. μ§∞™ΔO°∂¡∂Δπ∫∏ ∞¶∞¡Δ∏™∏ Δø¡ §∂ªºO∫ÀΔΔ∞ƒø¡ ™Δ∞ ƒ∂Àª∞Δπ∫∞ ¡O™∏ª∞Δ∞ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 74

B. EI¢π∫O ª∂ƒO™

À§π∫O-ª∂£O¢Oπ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79

À§π∫O . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79

ª∂£O¢Oπ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83

1. ™˘ÏÏÔÁ‹ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·È ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ . . . . . . . . . . . . . . 83

2. ∂ÍÔÏÈÛÌfi˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84

π. °È· ÙËÓ ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84

·. ∂˘ı˘ÁÚ¿ÌÌÈÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER (LASER alignment) . . 84

‚. ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ Â˘·ÈÛıËÛ›·˜ ÙˆÓ ÊˆÙÔÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÙÒÓ . . . 85

Á. ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ¯ÚˆÌ·ÙÈÎ‹˜ ·ÓÙÈÛÙ¿ıÌÈÛË˜ (Colour Compen-sation) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85

II. °È· ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86

3. ∞ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86

π. °È· ÙËÓ ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86

ªÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· (MoAbs) ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤Ó· ÌÂ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86

¢È·Ï‡Ì·Ù· ÚÔ·Ú·ÛÎÂ˘‹˜ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88

·. °È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· Î·È ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi . . . . . . . . . . . . . . . 88

‚. °È· ÙÔÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌ-ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÊÂÓfi˜ ÌÂ ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÌÂ ÙËÓ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË BrdU ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÂÎ-ÊÚ¿ÛË˜ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ fiˆ˜ ÙÔ Ki-67 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89

Á. °È· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . 91

ππ. °È· ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›-

Ì·ÙÔ˜ ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92

8

4. ∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ . . . . . . 94

∞ÔÌfiÓˆÛË ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ . . . . . . . . . . . . . . 94

∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ‰ÈÛÎ›· ÌÂÙ¿ ·fi ‰È¤ÁÂÚÛË ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96

ŒÏÂÁ¯Ô˜ ‚ÈˆÛÈÌfiÙËÙ·˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96

5. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ . . . . . . . . . . . . . . . 98

∂ÈÏÔÁ‹ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 98

¢Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 98

¶ÔÈÔÙÈÎfi˜ ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99

¶ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÁÈ· Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË . . . 101

·. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈ-ÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101

‚. ¶ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ . . . . . . . . . . . . 102

Á. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·-ÛÌÔ‡ Ki-67 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107

‰. ∂Ó‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108

μπO™Δ∞Δπ™Δπ∫∏ ∞¡∞§À™∏ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113

∞¶OΔ∂§∂™ª∞Δ∞ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115

1. ÀÁÈ‹ ·È‰È¿ – Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ (ÔÌ¿‰· ∞) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 116

·1) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈ-

ÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 116

·2) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ . . . . . 120

‚1) ∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 124


Ù¿ÚˆÓ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127

Á) ∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿ÁÔ˘Ó

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛ‹ ÙÔ˘˜ . . . . . . . . . . . . . . . . 129

2. ∞ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ÓÂ·ÓÈÎ‹ È‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· -¡π∞ (ÔÌ¿‰· μ) . . . . 131

·1) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈ-

ÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ Î·È ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· . . . . . . . . . 131

9

·2) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂ-

Ú·Â›· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 133

‚1) ∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ Î·È ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡

·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67, ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· . . . . . 138


Ù¿ÚˆÓ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ Î·È ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈ-

ÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË

ıÂÚ·Â›· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139

Á1) ∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿-

ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÚÈÓ ÙË

ıÂÚ·Â›· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 141

Á2) ∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿-

ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÌÂÙ¿ ÙË

ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142

3. ™‡ÁÎÚÈÛË ÙˆÓ Â˘ÚËÌ¿ÙˆÓ ˆ˜ ÚÔ˜ ÙË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ Î·È ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜ 144

™À∑∏Δ∏™∏ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 149

¶∂ƒπ§∏æ∏ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155

ABSTRACT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159

∞¡∞ºOƒ∞ ™∂ π™ΔO™∂§π¢∂™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 163

μπμ§πO°ƒ∞ºπ∞ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 165

10

™ À ¡ Δ ª ∏ ™ ∂ π ™

[3H]-TdR ƒ·‰ÈÂÓÂÚÁfi˜ ı˘ÌÈ‰›ÓË

(Tritiated thymidine)

BrdU μÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË

(BrÔmodeoxyuridine)

IL-2 πÓÙÂÚÏÂ˘Î›ÓË-2





IFN-Á πÓÙÂÚÊÂÚfiÓË-Á

¡π∞ ¡Â·ÓÈÎ‹ π‰ÈÔ·ı‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰·

ƒ∞ ƒÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰·

CDs ∞ÓÙÈÁfiÓ· ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË˜

(Clusters of Differentiation)

NK cells º˘ÛÈÎ¿ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÙfiÓ· Î‡ÙÙ·Ú·

(natural killer cells)

BcR ÀÔ‰Ô¯¤·˜ μ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘

(B cell antigen receptor complex)

ΔcR ÀÔ‰Ô¯¤·˜ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘

(Δ cell Receptor)

MHC ªÂ›˙ÔÓ ™‡ÛÙËÌ· πÛÙÔÛ˘Ì‚·ÙfiÙËÙ·˜

(Major Histicompatibility Complex)

HLA ∞ÓÙÈÁfiÓ· πÛÙÔÛ˘Ì‚·ÙfiÙËÙÔ˜

(Human histocompatibility Leukocyte Antigen molecules)

CD4+ Δ ‚ÔËıËÙÈÎfi Î‡ÙÙ·ÚÔ

11

CD8+ Δ Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎfi/Î·Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎfi Î‡ÙÙ·ÚÔ

TH1 Δ ‚ÔËıËÙÈÎfi Î‡ÙÙ·ÚÔ Ù‡Ô˘ 1

TH2 Δ ‚ÔËıËÙÈÎfi Î‡ÙÙ·ÚÔ Ù‡Ô˘ 2

Tc ∫˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎ¿ Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

Ts K·Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎ¿ Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

CTLs ∫˘ÙÙ·ÚÔÏ˘ÙÈÎ¿ Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

PTKs ºˆÛÊÔÙ˘ÚÔÛÈÓÈÎ¤˜ ÎÈÓ¿ÛÂ˜

(phosphotyrosine kinases)

CDKs ∫˘ÎÏÈÓÔÂÍ·ÚÙÒÌÂÓÂ˜ ÎÈÓ¿ÛÂ˜

(Cyclins-dependent kinases)

ƒ∏∞ º˘ÙÔ·ÈÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË

(phytohemagglutinin)

Con A ∫ÔÓÎ·Ó·‚·Ï›ÓË ∞

(concanavalin ∞)

PWM ªÈÙÔÁfiÓÔ ÙË˜ Phytolacca americana (pokeweed mitogen)

LPS §ÈÔÔÏ˘Û·Î¯·Ú›ÙË˜ ÙÔ˘ ÙÔÈ¯ÒÌ·ÙÔ˜

ÙˆÓ Gram (-) ‚·ÎÙËÚ›ˆÓ

FC ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

(Flow Cytometry)

LASER ∂ÓÈÛ¯˘Ù‹˜ ÊˆÙfi˜ ÁÈ· ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›· ÂÍ·Ó·ÁÎ·ÛÌ¤ÓË˜ ÂÎÔÌ‹˜

(Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation)

PD ºˆÙÔ‰›Ô‰Ô˜

PMT ºˆÙÔÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÙ‹˜

(Photomultiplier)

FSC, FALS ¶ÚfiÛıÈ· ‹ Â˘ı‡ÁÚ·ÌÌË ÛÎÂ‰·˙fiÌÂÓË ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·

(Forward Scatter, Forward Angle Light Scatter)

SSC ¶Ï¿ÁÈÔ˜ ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜

(Side Scatter)

ƒπ Iˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ

(Propidiun Iodide)

FITC πÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË

(Fluorescein Isothiocyanate)

12

ƒ∂ º˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË

(Phycoerytrine)

DI DÂ›ÎÙË˜ DNA

(DNA index)

MFI ª¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

(Mean Fluorescence Intensity)

RMFI ™¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

(Relative Mean Fluorescence Intensity)

13

¶ ƒ O § O ° O ™

O ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÔÚÂ› Ó· Á›ÓÂÈ

ÌÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ ÌÂıfi‰Ô˘˜. ªÈ· ¿ÌÂÛË Ì¤ıÔ‰Ô˜ Â›Ó·È Ë ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔ-

ÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ÌÂÙ·ÌfiÚÊˆÛË˜ ÌÂÙ¿ ·fi Â›‰Ú·ÛË (in vitro) ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ Ô˘ÛÈÒÓ

ÁÓˆÛÙÒÓ ˆ˜ ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ Ô˘ Â¿ÁÔ˘Ó ÙË ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹ ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÚÔÎ·-

ÏÒÓÙ·˜ Û‡ÓıÂÛË ÙÔ˘ DNA Î·È ‚Ï·ÛÙÔÁ¤ÓÂÛË. ªÈ· ¤ÌÌÂÛË Ì¤ıÔ‰Ô˜ Â›Ó·È Ë

Ì¤ÙÚËÛË ÚÔ˚fiÓÙˆÓ ÙˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ Ï¿ÛÌ· (¯. oÚÈÛÌ¤ÓˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔ-

ÎÈÓÒÓ), ÙˆÓ ÔÔ›ˆÓ Ù· Â›Â‰· ·˘Í¿ÓÔ˘Ó fiÙ·Ó Ù· Î‡ÙÙ·Ú· ·˘Ù¿ ÂÓÂÚÁÔ-

ÔÈÔ‡ÓÙ·È ·fi Î¿ÔÈÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ.

∏ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ÌÂÙ·ÌfiÚÊˆÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‚Ú›ÛÎÂÈ ÂÊ·Ú-

ÌÔÁ‹ ÛÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ·ÓÔÛ›·˜ ÛÂ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ·ÓÔÛÔ·ÓÂ¿Ú-

ÎÂÈÂ˜, Û‡Ó‰ÚÔÌÔ AIDS ‹ ¿ÏÏÂ˜ ÈÔÁÂÓÂ›˜ ÏÔÈÌÒÍÂÈ˜, ·˘ÙÔ¿ÓÔÛ· ÓÔÛ‹Ì·Ù·

Î·È Î·ÎÔ‹ıË ÓÔÛ‹Ì·Ù·. ª¤¯ÚÈ ÚfiÛÊ·Ù·, Ë ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ·¿ÓÙËÛË˜ ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈÂ˜ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Á›ÓÔÓÙ·Ó Â›-

ÙÂ ÌÂ ÙË Ì¤ÙÚËÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ ‚Ï·ÛÙÒÓ ‰ËÏ. Á›ÓÔÓÙ·Ó ÌÔÚÊÔÏÔÁÈÎ‹

ÂÎÙ›ÌËÛË ÌÂ ·Ú·Ù‹ÚËÛË ÛÙÔ ÔÙÈÎfi ÌÈÎÚÔÛÎfiÈÔ (˘ÔÎÂÈÌÂÓÈÎ‹ ÂÎÙ›ÌË-

ÛË), Â›ÙÂ ÌÂ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ÌÂ ÙË Ì¤ÙÚËÛË ÙË˜ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜

Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ [3H]-TdR ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ DNA ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ (ÎÏ·ÛÛÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È Â˘Ú¤ˆ˜). ∏ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ·˘Ù‹

ÚÔ¸Ôı¤ÙÂÈ Î·Ù¿ÏÏËÏË ÂÚÁ·ÛÙËÚÈ·Î‹ ˘Ô‰ÔÌ‹ ÁÈ· ÙË ¯Ú‹ÛË Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙfi-

ˆÓ fiˆ˜ Ë [3H]-TdR Î·È ÂÈÏ¤ÔÓ Î·Ù¿ÏÏËÏÔ ÂÍÔÏÈÛÌfi ÁÈ· ÙË Ì¤ÙÚËÛË

ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ Î·È Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· Á-Î¿ÌÂÚ·. °È· ÙÔ˘˜ Ïfi-

ÁÔ˘˜ ·˘ÙÔ‡˜ Ù· ÙÂÏÂ˘Ù·›· ¯ÚfiÓÈ· Á›ÓÂÙ·È ÚÔÛ¿ıÂÈ· Ó· ‚ÚÂıÂ› ÂÓ·ÏÏ·-

ÎÙÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¯ˆÚ›˜

ÙË ¯Ú‹ÛË Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡. ™ÙË ‚È‚ÏÈÔÁÚ·Ê›· ¿Ú¯ÈÛÂ Ó· ·Ó·Ê·›ÓÂÙ·È Ë

¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ ˆ˜ ÂÓ·ÏÏ·ÎÙÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÂÎÙ›ÌË-

ÛË˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.1,2

∏ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÂÙ·È ·fi ·˘ÙÔÌ·ÙÈÛÌfi, Ù·¯‡ÙËÙ·

(·Ó¿Ï˘ÛË 1000 Î‡ÙÙ·ÚˆÓ/sec) Î·È ·ÎÚ›‚ÂÈ·. To ÏÂÔÓ¤ÎÙËÌ· ÙË˜ ÔÏ˘·-

15

Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ Ô˘ ÚÔÛÊ¤ÚÂÈ Ë Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ‰›ÓÂÈ ÙÈ˜ ÂÍ‹˜

‰˘Ó·ÙfiÙËÙÂ˜:

1. ΔÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

(CD25, CD28, CD40L, CD69, CD71, HLA-DR).3

2. ΔoÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ Ô-

ÛÔÙÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ DNA (‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË), ÌÂ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ Ô-

ÛÔÛÙÔ‡ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ (BrdU) Î·È ÌÂ ÚÔÛ-

‰ÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÔÏÏ·Ï·-

ÛÈ·ÛÌÔ‡ (PCNA, Ki-67).2,4-6 EÈ‰ÈÎfiÙÂÚ·, ÌÂ ÙËÓ ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘-

ÛË ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÙ·È ÙÔ ÔÏÈÎfi ÔÛfi ÙÔ˘ DNA ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡

(ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ DNA ÌÂÙ¿ ·fi Û‹Ì·ÓÛ‹ ÙÔ˘ ÌÂ ÂÈ‰È-

Î¿ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· ¯. PI-propidium iodide) Î·ıÒ˜ Î·È ÙÔ ÔÛÔÛÙfi

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Î¿ıÂ Ê¿ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘

(·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘). ªÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡

ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ BrdU Ô˘ Â›Ó·È ¤Ó· ·Ó¿ÏÔÁÔ ÙË˜ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ Î·È ÙÔ˘

ÔÛÔÛÙÔ‡ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡

(PCNA, Ki-67) Á›ÓÂÙ·È ¤ÌÌÂÛË ÂÎÙ›ÌËÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Ô˘ ‚Ú›ÛÎoÓÙ·È ÛÙË Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡.

3. ΔËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÙË˜ ·Ú·ÁˆÁ‹˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ÌÂÛÔÏ·‚ËÙÈÎÒÓ Ô˘ÛÈÒÓ

Ô˘ Â›Ó·È ÛËÌ·ÓÙÈÎ¤˜ ÁÈ· ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜

·ÓÔÛ›·˜, fiˆ˜ Â›Ó·È ÔÈ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ (πL-2, IFN-Á Î·È IL-4, IL-5, IL-

6).7-9

™ÎÔfi˜ ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ ‹Ù·Ó Ë ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ÌÂÙ·ÌfiÚ-

ÊˆÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·, ˘fi ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘,

ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ ·ÓÙ› ÙË˜ Û˘Ì‚·ÙÈÎ‹˜ Ú·‰ÈÔ·ÓÔÛÔÏÔ-

ÁÈÎ‹˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÛÂ ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ Î·È ÛÂ ·È‰È¿ ÌÂ ·˘ÙÔ¿ÓÔÛ· ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔ-

Û‹Ì·Ù· Î·È ÂÈ‰ÈÎfiÙÂÚ· ÌÂ ÂÓÂÚÁfi ¡Â·ÓÈÎ‹ π‰ÈÔ·ı‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞). H

ÂÈÏÔÁ‹ ÙË˜ 2Ë˜ ÔÌ¿‰·˜ ¤ÁÈÓÂ ÌÂ ‚¿ÛË ÙË ÁÓÒÛË fiÙÈ ÛÙË ƒÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ∞Ú-

ıÚ›ÙÈ‰· (ƒ∞) ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÂÓÒ Ù· ‰Â‰ÔÌ¤Ó· ÁÈ· ¿ÏÏ· ·˘ÙÔ¿ÓÔÛ·

ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÙfiÛÔ ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ fiÛÔ Î·È ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ Â›Ó·È ÔÏ‡

ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤Ó· ¤ˆ˜ ·Ó‡·ÚÎÙ·.

H fiÏË ÌÂÏ¤ÙË ¯ˆÚ›ÛıËÎÂ ÛÂ ‰‡Ô Ì¤ÚË:

A. ™ÙÔ ÁÂÓÈÎfi, ÙÔ ÔÔ›Ô ·Ó·Ê¤ÚÂÙ·È: 1) ÛÙ· ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ Î·È ÙÈ˜

ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›Â˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· – ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË – ·Ó¿-

Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘), 2) ÛÙÈ˜ ·Ú¯¤˜ Ô˘ ‰È¤Ô˘Ó ÙËÓ ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

ÙÚ›· ƒÔ‹˜, 3) ÛÙËÓ ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

16

Î·È 4) ÛÙ· ‚È‚ÏÈÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ‰Â‰ÔÌ¤Ó· Û¯ÂÙÈÎ¿ ÌÂ ÙË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙ· ·˘ÙÔ¿ÓÔÛ· ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· Î·È ÂÈ‰ÈÎfiÙÂÚ· ÛÙË

ƒÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· Î·È ÛÙË ¡Â·ÓÈÎ‹ π‰ÈÔ·ı‹ ∞ıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞) Ô˘ Â›-

Ó·È ÙÔ Û˘¯ÓfiÙÂÚÔ ÚÂ˘Ì·ÙÈÎfi ÓfiÛËÌ· ÛÙ· ·È‰È¿ Î·È ÙÔ ÔÔ›Ô ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹-

ıËÎÂ ÁÈ· ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘.

μ. ™ÙÔ ÂÈ‰ÈÎfi, ÙÔ ÔÔ›Ô ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÂÈ ÙËÓ ÂÚÈÁÚ·Ê‹ ÙÔ˘ ˘ÏÈÎÔ‡ Î·È

ÙˆÓ ÙÂ¯ÓÈÎÒÓ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó, Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· (·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù·) ÙË˜

ÌÂÏ¤ÙË˜, ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË/Û˘˙‹ÙËÛË ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ, ÙË ‚È‚ÏÈÔÁÚ·Ê›· Ô˘

¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ Î·È Ù¤ÏÔ˜ ÙËÓ ÂÚ›ÏË„Ë ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜.

∞fi ÙË ı¤ÛË ·˘Ù‹ ı· ‹ıÂÏ· Ó· Â˘¯·ÚÈÛÙ‹Ûˆ ıÂÚÌ¿ ÙËÓ Î˘Ú›ˆ˜ ÂÈ-

‚Ï¤Ô˘Û· ÙË˜ ‰È·ÙÚÈ‚‹˜ ·˘Ù‹˜, ∫·ıËÁ‹ÙÚÈ· ¶·È‰È·ÙÚÈÎ‹˜/∞ÓÔÛÔÏÔÁ›·˜

Î·È ¢ÈÂ˘ı‡ÓÙÚÈ· ÙË˜ ∞′ ¶·È‰È·ÙÚÈÎ‹˜ ∫ÏÈÓÈÎ‹˜ ∞¶£ Î. ºÏˆÚÂÓÙ›· ∫·Ó·-

ÎÔ‡‰Ë-ΔÛ·Î·Ï›‰Ô˘, ÁÈ· ÙË Û˘ÓÂ¯‹ Â›‚ÏÂ„Ë Î·È ÔÏ‡ÙÈÌË Î·ıÔ‰‹ÁËÛ‹ ÙË˜

Î·Ù¿ ÙË ‰ÈÂÍ·ÁˆÁ‹ Î·È Û˘ÁÁÚ·Ê‹ ·˘Ù‹˜ ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜, Î·ıÒ˜ Î·È Ù· ¿ÏÏ·

‰‡Ô ÂÈ‚Ï¤ÔÓÙ· Ì¤ÏË ÙË˜ ÙÚÈÌÂÏÔ‡˜ ÂÈÙÚÔ‹˜ ÙËÓ Î. Ã¿È‰ˆ ΔÛ¿ÓÙ·ÏË

∞Ó·ÏËÚÒÙÚÈ· ∫·ıËÁ‹ÙÚÈ· ÙÔ˘ ΔÔÌ¤· ÀÁÂ›·˜ ÙÔ˘ ¶·È‰ÈÔ‡ ÁÈ· ÙËÓ ÔÏ‡-

ÙÈÌË ÂÎ·›‰Â˘ÛË Ô˘ ÌÔ˘ ÚÔÛ¤ÊÂÚÂ ÛÙË ÌÔÚÊÔÏÔÁ›· ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·È ÁÈ· ÙÈ˜ ¿ÏÏÂ˜ Û˘Ì‚Ô˘Ï¤˜ Î·È ·Ú·ÙËÚ‹ÛÂÈ˜

ÙË˜ Î·È ÙËÓ Î. ª·Ú›· ¡Ù·Ô˘ÓÙ¿ÎË ∂›ÎÔ˘ÚË ∫·ıËÁ‹ÙÚÈ· ÙÔ˘ ΔÔÌ¤· μÈÔ-

ÏÔÁÈÎÒÓ ∂ÈÛÙËÌÒÓ Î·È ¶ÚÔÏËÙÈÎ‹˜ π·ÙÚÈÎ‹˜ ÁÈ· ÙËÓ ÂÈÎÔ‰ÔÌËÙÈÎ‹ Î·-

ıÔ‰‹ÁËÛ‹ ÙË˜ ÛÂ ÙÂ¯ÓÈÎ¤˜ ÏÂÙÔÌ¤ÚÂÈÂ˜ ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜. ∂›ÛË˜ ı· ‹ıÂÏ· Ó·

Â˘¯·ÚÈÛÙ‹Ûˆ ıÂÚÌ¿ ÙË Û˘Ó¿‰ÂÏÊÔ ‚ÈÔÏfiÁÔ ÙÔ˘ ∞ÓÔÛÔÏÔÁÈÎÔ‡ ∂ÚÁ·ÛÙËÚ›-

Ô˘ ÙË˜ ∞′ ¶·È‰È·ÙÚÈÎ‹˜ ∫ÏÈÓÈÎ‹˜ Î. μ›ÎË Δ˙ÈÌÔ‡ÏË ÁÈ· ÙËÓ ÔÏ‡ÙÈÌË Û˘ÓÂÚ-

Á·Û›· ÙË˜ Û’ fiÏ· Ù· Â›Â‰· ‰ÈÂÍ·ÁˆÁ‹˜ ÙË˜ ‰È·ÙÚÈ‚‹˜ ·˘Ù‹˜. £ÂÚÌ¤˜ Â˘-

¯·ÚÈÛÙ›Â˜ ÂÎÊÚ¿˙ˆ Î·È ÛÙÈ˜ ÙÂ¯ÓÔÏfiÁÔ˘˜ ÙÔ˘ ∞ÓÔÛÔÏÔÁÈÎÔ‡ Î·È ∞ÈÌ·ÙÔÏÔ-

ÁÈÎÔ‡ ∂ÚÁ·ÛÙËÚ›Ô˘ ÙË˜ ∞′ ¶·È‰È·ÙÚÈÎ‹˜ ∫ÏÈÓÈÎ‹˜ Î. OÏ˘Ì›· ∫Ô„·¯Â›ÏË,

∂‡· ÃÚÔÓÔÔ‡ÏÔ˘ Î·È ª¿Á‰· ∫ˆÙÔ‡Ï· ÁÈ· ÙË ‚Ô‹ıÂÈ¿ ÙÔ˘˜ ÛÙË Û˘ÏÏÔÁ‹

ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ·›Ì·ÙÔ˜ ·fi ÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ Î·È Ù· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿/Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜.

£· ‹Ù·Ó ·Ú¿ÏÂÈ„Ë ·Ó ‰ÂÓ Â˘¯·ÚÈÛÙÔ‡Û· ıÂÚÌ¿ Î·È ÙÔ Û‡ÏÏÔÁÔ º›-

ÏˆÓ ÙˆÓ ¶·È‰ÈÒÓ ÌÂ ÃÚfiÓÈÂ˜ ƒÂ˘Ì·ÙÔ¿ıÂÈÂ˜ ÁÈ· ÙËÓ Î¿Ï˘„Ë ÙÔ˘ ÎfiÛÙÔ˘˜

ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙËÚ›ˆÓ (BrdU Flow kit ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ‚Úˆ-

ÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ Î·È ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· Ki-67 FITC) Ô˘ ‹Ù·Ó

··Ú·›ÙËÙ· ÁÈ· ÙË ‰ÈÂÎÂÚ·›ˆÛË ÙË˜ ‰È·ÙÚÈ‚‹˜ ·˘Ù‹˜ Î·È Ô˘ ‰ÂÓ ‹Ù·Ó ‰˘-

Ó·Ùfi Ó· Î·Ï˘ÊıÔ‡Ó ·fi ¿ÏÏÔÓ ÊÔÚ¤·.

17

∞. °∂¡π∫O ª∂ƒO™

19

1 . § ∂ ª º O ∫ À Δ Δ ∞ ƒ ∞

Δ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ÛÙÔÓ Ì˘ÂÏfi ÙˆÓ ÔÛÙÒÓ ·fi ÙÔ ÔÏ˘‰‡-

Ó·ÌÔ ·Ú¯¤ÁÔÓÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ (pluripotent hematopoietic stem cell) Î·È ·ÔÙÂ-

ÏÔ‡Ó ÙÔ 20-30% ÙˆÓ ÂÌ‡ÚËÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÛÙÔ˘˜

ÂÓ‹ÏÈÎÂ˜. ªÂ ‚¿ÛË ÙÔ Ì¤ÁÂıfi˜ ÙÔ˘˜ ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ÛÂ ‰‡Ô Î·ÙËÁÔÚ›Â˜, ÛÙ·

ÌÈÎÚ¿ Î·È ÛÙ· ÌÂÁ¿Ï· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·. ∞Ó Î·È ¤¯Ô˘Ó ÙËÓ ›‰È· ÂÚ›Ô˘ ÌÔÚ-

ÊÔÏÔÁ›· ‰È·ÊÔÚÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÔ˘˜ ˘ÔÏËı˘ÛÌÔ‡˜ ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ·

ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ ÚˆÙÂ˚ÓÈÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ‹ Î·È ÛÙÔ

Î˘ÙÙ·ÚfiÏ·ÛÌ¿ ÙÔ˘˜ (Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ› ‰Â›ÎÙÂ˜). ∏ ·Ó·Î¿Ï˘„Ë ÙˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈ-

ÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Ô‰‹ÁËÛÂ ÛÙËÓ Ù·˘ÙÔÔ›ËÛË ·˘ÙÒÓ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ‰ÂÈ-

ÎÙÒÓ (Clusters of Differentiation ‹ CDs), Ô˘ Î·ıÔÚ›˙Ô˘Ó ÙÔ ÛÙ¿‰ÈÔ ‰È·-

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Προ-Βκύτταρο

ΠρώιμοΒ-κύτταρο

ΕνεργοποιημένοΒ-κύτταρο

Πλασματο-κύτταρο

Β-κύτταρομνήμης

ΏριμοβοηθητικόΤ-κύτταρο

ΕνεργοποιημένοβοηθητικόΤ-κύτταρο

ΒοηθητικόΤ-κύτταρομνήμης

Κυτταροτοξικό/κατασταλτικόΤ-κύτταρομνήμης

Ενεργοποιημένοκυτταροτοξικό/κατασταλτικόΤ-κύτταρο

Ώριμοκυτταροτοξικό/κατασταλτικόΤ-κύτταρο

Κοινόθυμοκύτταρο

Πρώιμοθυμοκύτταρο

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ÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜. ¶·Ú¿ÁÔÓÙ·È Î·È ˆÚÈÌ¿˙Ô˘Ó ÛÙÔÓ Ì˘ÂÏfi ÙˆÓ ÔÛÙÒÓ Î·È Ë

Î‡ÚÈ· ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›· ÙÔ˘˜ Â›Ó·È Ë ·Ú·ÁˆÁ‹ ·ÓÔÛÔÛÊ·ÈÚÈÓÒÓ. ΔÔ Î‡ÚÈÔ ÙÌ‹-

Ì· ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎÔ‡ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙˆÓ μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (B cell antigen receptor

complex ‹ BcR) Â›Ó·È ÙÔ ÂÍˆÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎfi ÙÌ‹Ì· ÙË˜ ·ÓÔÛÔÛÊ·ÈÚ›ÓË˜ Ô˘

Â›Ó·È Î·ıËÏˆÌ¤ÓË ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ¿ ÙÔ˘˜ (slg). H Û‡Ó‰ÂÛË ÙˆÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÌÂ

ÙÔ ÂÍˆÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎfi ·˘Ùfi ÙÌ‹Ì· ÙÔ˘ ·ÓÔÛÔÛÊ·ÈÚÈÓÈÎÔ‡ ˘Ô‰Ô¯¤· ÚÔÎ·ÏÂ›

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Ô‰ËÁÂ› ÛÙË ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÛÂ

‰Ú·ÛÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú·, Ù· Ï·ÛÌ·ÙÔÎ‡ÙÙ·Ú·, Ù· ÔÔ›· ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î·È ÂÎÎÚ›-

ÓÔ˘Ó ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·, ‰ËÏ·‰‹ ÂÈ‰ÈÎ¤˜ ÁÈ· ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ ·˘Ùfi ·ÓÔÛÔÛÊ·ÈÚ›ÓÂ˜

fiÏˆÓ ÙˆÓ Ù¿ÍÂˆÓ (IgG, IgA, IgM, IgD Î·È IgE).13

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T· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÙÔ 70-80% ÙÔ˘ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘-

ÛÌÔ‡.12 ¶ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È fiˆ˜ Î·È Ù· μ Î‡ÙÙ·Ú· ·fi Ù· ÔÏ˘‰‡Ó·Ì· ·Ú¯¤ÁÔ-

Ó· Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ Ì˘ÂÏÔ‡ ÙˆÓ ÔÛÙÒÓ Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÌÂÙ·Ó·ÛÙÂ‡Ô˘Ó ÛÙÔÓ

ı‡ÌÔ fiÔ˘ Î·È ˆÚÈÌ¿˙Ô˘Ó. ¢ÂÓ ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ·fi Ù· μ Î‡ÙÙ·Ú· ÌÔÚÊÔÏÔÁÈ-

Î¿ ·ÏÏ¿ «ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎ¿» ‰ÈfiÙÈ ÏfiÁˆ ÙË˜ ÌÂÁ¿ÏË˜ ¯ËÌÈÎ‹˜ ÙÔ˘˜ Û˘ÁÁ¤ÓÂÈ·˜

ÚÔ˜ Ù· ÂÚ˘ıÚÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÚÔ‚¿ÙÔ˘ Û¯ËÌ·Ù›˙Ô˘Ó ÚÔ˙¤ÙÂ˜ ÌÂ ·˘Ù¿ Ì¤Ûˆ

ÙÔ˘ CD2 ÌÔÚ›Ô˘ ÙÔ˘˜ Ô˘ Â›Ó·È ÙÔ ÚÒÙÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ÌfiÚÈÔ (ÂÈ‰ÈÎ‹ Úˆ-

ÙÂ˝ÓË) Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È ÛÙ· Δ Î‡ÙÙ·Ú·.14 ∏ ‰È·‰ÈÎ·Û›· ÙË˜ ˆÚ›Ì·ÓÛË˜ ÙˆÓ

Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ı‡ÌÔ ·‰¤Ó· ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÂÈ Î·È ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁÔÓÈ-

ÎÔ‡ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙÔ˘˜ (Δ cell Receptor, TcR). O ΔcR Â›Ó·È ¤Ó· ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi

ÌfiÚÈÔ (ÂÙÂÚÔ‰ÈÌÂÚ‹˜ ÁÏ˘ÎÔÚˆÙÂ˝ÓË) Ô˘ ‰ÔÌÈÎ¿ Î·È ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎ¿ ÌÔÈ¿˙ÂÈ

ÌÂ ÙÈ˜ ·ÓÔÛÔÛÊ·ÈÚ›ÓÂ˜ Î·È Ì·˙› ÌÂ Ù· ·ÓÙÈÁfiÓ· ÙÔ˘ ÌÂ›˙ÔÓÔ˜ Û˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜

ÈÛÙÔÛ˘Ì‚·ÙfiÙËÙ·˜ (MHC) ·Ó‹ÎÂÈ ÛÙË ÌÂÁ¿ÏË ÔÈÎÔÁ¤ÓÂÈ· ÙˆÓ ·ÓÔÛÔÛÊ·È-

ÚÈÓÒÓ (immunoglobulin surergene family).15,16 ∞ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ‰‡Ô ÔÏ˘-

ÂÙÈ‰ÈÎ¤˜ ·Ï˘Û›‰Â˜ · Î·È ‚ Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ÛÙ·ıÂÚ‹ (C) Î·È ÌÂÙ·‚ÏËÙ‹ (V) Â-

ÚÈÔ¯‹. Δ· ·ÌÈÓÔÙÂÏÈÎ¿ ¿ÎÚ· ÙˆÓ ‰‡Ô ·Ï˘Û›‰ˆÓ ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÙËÓ ÌÂÙ·‚ÏËÙ‹

ÂÚÈÔ¯‹ ÙÔ˘ ÌÔÚ›Ô˘ Ô˘ Â›Ó·È Ë ı¤ÛË Û‡Ó‰ÂÛË˜ ÌÂ ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÂÓÒ Ù· Î·Ú-

‚ÔÍ˘ÙÂÏÈÎ¿ ¿ÎÚ· ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÙËÓ ÛÙ·ıÂÚ‹ ÂÚÈÔ¯‹ ÙÔ˘ ÌÔÚ›Ô˘, ¯ÚËÛÈÌÂ‡-

Ô˘Ó ÁÈ· ÙËÓ Û‡Ó‰ÂÛ‹ ÙÔ˘ ÌÂ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË Î·È Û˘ÌÌÂÙ¤¯Ô˘Ó ÛÙËÓ

¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ‰Ú·ÛÙÈÎ‹˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘. °È· Ó· ÂÎÊÚ·ÛÙÂ› Ô TcR

ÛÙËÓ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Â›Ó·È ··Ú·›ÙËÙË Ë ÌË ÔÌÔÈÔÔÏÈÎ‹ Û‡Ó‰Â-

Û‹ ÙÔ˘ ÌÂ ¤Ó· Û‡ÌÏÂÁÌ· ÙÚÈÒÓ ÙÔ˘Ï¿¯ÈÛÙÔÓ ‰È·ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎÒÓ ÔÏ˘ÂÙÈ-

25

‰›ˆÓ Ô˘ ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÙÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ÌfiÚÈÔ CD3. To CD3, Ô˘ Â›Ó·È ÂÈ‰ÈÎfi

ÁÈ· Ù· Δ Î‡ÙÙ·Ú·, ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ÙÚ›· ÔÏ˘ÂÙ›‰È· ÁÓˆÛÙ¿ ˆ˜ Á, ‰ Î·È

Â. Δ· ÔÏ˘ÂÙ›‰È· ÙÔ˘ TcR Î·È ÙÔ˘ CD3 Û˘Ó‰¤ÔÓÙ·È Â›ÛË˜ Î·È ÌÂ ¤Ó·

¿ÏÏÔ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi Î·Ù¿ ÙÔ ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚÔ ÙÌ‹Ì· ÙÔ˘ ÚˆÙÂ˚ÓÈÎfi ÌfiÚÈÔ, Ô˘

·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ‰‡Ô ˙-·Ï˘Û›‰Â˜ Î·È fiÏ· Ì·˙› (TcR, CD3, ˙ ÂÙÈ‰ÈÎ¤˜

·Ï˘Û›‰Â˜) ‰ËÌÈÔ˘ÚÁÔ‡Ó ÙÔ Û‡ÌÏÂÁÌ· ÙÔ˘ TcR (TcR complex).12,16

ª¤Û· ÛÙÔ ı‡ÌÔ Ù· Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó Ï¤ÔÓ ÛÙË ÌÂÌ‚Ú¿ÓË

ÙÔ˘˜ ÙÔÓ TcR ˘Ê›ÛÙ·ÓÙ·È ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ÙË ‰È·‰ÈÎ·Û›· ÙË˜ ıÂÙÈÎ‹˜ Î·È ·ÚÓËÙÈ-

Î‹˜ ÂÈÏÔÁ‹˜ (positive and negative selection) ÂÍ·ÛÊ·Ï›˙ÔÓÙ·˜ ÙËÓ ÈÎ·Ófi-

ÙËÙ· Ó· ·Ó·ÁÓˆÚ›˙Ô˘Ó Ù· ·ÓÙÈÁfiÓ· Ô˘ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂ

«›‰È·» ‹ «Â·˘Ù¿» HLA-ÌfiÚÈ· (ÌÂ ‚¿ÛË ÙÔÓ MHC-ÂÚÈÔÚÈÛÌfi, MHC-re-

striction) Î·È Ó· Ù· Î·ıÈÛÙÔ‡Ó ·ÓÂÎÙÈÎ¿ ÛÙ· «Â·˘Ù¿» ·ÓÙÈÁfiÓ· (self tole-

rant).12,17

ªÂ ‚¿ÛË ÙË ‰ÔÌ‹ ÙÔ˘ TcR (·,‚ ‹ Á,‰ ·Ï˘Û›‰Â˜) ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ‰‡Ô Ù‡-

ÔÈ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‰È·Ê¤ÚÔ˘Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ˆ˜ ÚÔ˜ ÙÔÓ ÙÚfiÔ ·Ó·ÁÓÒÚÈ-

ÛË˜ ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ Î·È ˆ˜ ÚÔ˜ ÙË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎ‹ ‰Ú¿ÛË ÙÔ˘˜:

1. Δ· Á/‰ TcR (ΔcR1 Î‡ÙÙ·Ú·) Δ Î‡ÙÙ·Ú· (10%), Ô˘ ‰È·ÌÂÛÔÏ·‚Ô‡Ó ÁÈ·

ÙËÓ ÙÔÈÎ‹ ·ÓÔÛ›· ÛÙÔ˘˜ ‚ÏÂÓÓÔÁfiÓÔ˘˜, Î·È

2. Δ· ·/‚ TcR (TcR2 Î‡ÙÙ·Ú·) Δ Î‡ÙÙ·Ú· (90%) Ô˘ ‰ÚÔ‡Ó Î·È Ú˘ıÌ›-

˙Ô˘Ó ÙËÓ ·ÓÙÈÁÔÓÔÂÈ‰ÈÎ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÂÍ·ÚÙÒÌÂÓË ·ÓÔÛÈ·Î‹ ·¿ÓÙËÛË ÛÂ

ÏÂÌÊÈÎÔ‡˜ Î·È ÌË ÈÛÙÔ‡˜.

Δ· ·/‚ TcR T Î‡ÙÙ·Ú· Ù·ÍÈÓÔÌÔ‡ÓÙ·È ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ÛÂ ‰‡Ô Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡˜

˘ÔÏËı˘ÛÌÔ‡˜ ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ Û˘Ó˘Ô‰Ô¯¤ˆÓ CD4 Î·È CD8

ÌÔÚ›ˆÓ ÔÈ ÔÔ›ÔÈ ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÙÔ˘˜ ÈÔ ÛËÌ·ÓÙÈÎÔ‡˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎÔ‡˜ ˘ÔÏË-

ı˘ÛÌÔ‡˜ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.12,17

Δ· CD4+ Δ Î‡ÙÙ·Ú·, ‹ ‚ÔËıËÙÈÎ¿ Δ Î‡ÙÙ·Ú· (T ∏elper, T∏), Â›Ó·È

ÚˆÙÔÁÂÓÂ›˜ Ú˘ıÌÈÛÙ¤˜ ÙË˜ ·ÓÔÛÈ·Î‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜. ªÂÙ¿ ÙËÓ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎ‹

‰È¤ÁÂÚÛË ÂÓÂÚÁÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Î·È ÂÍÂÏ›ÛÛÔÓÙ·È ÛÂ ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó

ÌÈÎÚ¿ ‚ÈÔ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ ÌfiÚÈ·, ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜, ÔÈ ÔÔ›Â˜ Ú˘ıÌ›˙Ô˘Ó ÙÔÓ ÔÏ-

Ï·Ï·ÛÈ·ÛÌfi, ÙË ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË Î·È ÙÈ˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›Â˜ ÙfiÛÔ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Ô˘ ÙÈ˜ ·Ú¿ÁÔ˘Ó (·˘ÙÔÎÚÈÓ‹˜ ‰Ú¿ÛË) fiÛÔ Î·È ·Ú·ÎÂ›ÌÂÓˆÓ (·Ú·ÎÚÈ-

Ó‹˜) ‹ ·ÔÌ·ÎÚ˘ÛÌ¤ÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÂÓ‰ÔÎÚÈÓ‹˜ ‰Ú¿ÛË). ªÂ ÙÔÓ ÙÚfiÔ ·˘-

ÙfiÓ ·ÊÂÓfi˜ ÚÔ¿ÁÂÙ·È Ô ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi˜ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘

ÂÓÂÚÁÔÔÈÂ›Ù·È Î·È ÂÓÈÛ¯‡ÂÙ·È Ë ÌÈÎÚÔ‚ÈÔÎÙfiÓÔ˜ ‰Ú¿ÛË ÙˆÓ ÌÔÓÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Î·È Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ. ∂›ÛË˜ Ù· ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ‚ÔËıÔ‡Ó ¿ÌÂÛ· ÛÙË ‰È·-

ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙˆÓ μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Ï·ÛÌ·ÙÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ·ÓÙÈÛÒ-

Ì·Ù·. Δ· ÒÚÈÌ· ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ ‚ÔËıËÙÈÎ¿ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ‚¿ÛÂÈ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ

26

Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ÛÂ ‰‡Ô Ù‡Ô˘˜: Ù· Ù‡Ô˘ TH1 (Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜

Ù‡Ô˘ 1) Ô˘ ‰È·‰Ú·Ì·Ù›˙Ô˘Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎfi ÚfiÏÔ ÛÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ Ì·-

ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ Î·È ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ·ÓÔÛ›· Î·È ÛÙ· Ù‡Ô˘ TH2 (Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜

Ù‡Ô˘ 2) Ô˘ ‰È·‰Ú·Ì·Ù›˙Ô˘Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎfi ÚfiÏÔ ÛÙË ¯˘ÌÈÎ‹ ·ÓÔÛ›· Î·È ÛÙËÓ

ÂÎ‰‹ÏˆÛË ·ÏÏÂÚÁÈÎÒÓ ÓÔÛËÌ¿ÙˆÓ.19,20 OÈ ‰‡Ô Ù‡ÔÈ ÙˆÓ ‚ÔËıËÙÈÎÒÓ Δ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ¤Ó· ÎÔÈÓfi Úfi‰ÚÔÌÔ Î‡ÙÙ·Úo (ΔH0) Ô˘ ¤¯ÂÈ

ÙËÓ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· Ó· ÂÎÎÚ›ÓÂÈ Î·È ÙÔ˘˜ ‰‡Ô Ù‡Ô˘˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ.

Δ· CD8+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ·ÔÙÂÏÔ‡Ó Ù· Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎ¿/Î·Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎ¿ Δ-

Î‡ÙÙ·Ú· (Cytotoxic T cells, CTLs). A·ÓÙÔ‡Ó ÛÙÔ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎfi ÂÚ¤ıÈÛÌ· Î·-

Ù·ÛÙÚ¤ÊÔÓÙ·˜ ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ Ô˘ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ. OÚÈÛÌ¤Ó· ·fi ·˘-

Ù¿ ¤¯Ô˘Ó ÙËÓ È‰ÈfiÙËÙ· Ó· Î·Ù·ÛÙ¤ÏÏÔ˘Ó ‰È¿ÊÔÚÂ˜ ˘¤ÚÌÂÙÚÂ˜ ·ÓÔÛÈ·Î¤˜

·ÓÙÈ‰Ú¿ÛÂÈ˜ (suppressor T cells, Ts). ∞ÔÙÂÏÔ‡Ó ‚·ÛÈÎfi ·Ì˘ÓÙÈÎfi ÌË¯·ÓÈ-

ÛÌfi ¤Ó·ÓÙÈ ÙˆÓ ÈÒÓ Î·È ¿ÏÏˆÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ ·ıÔÁfiÓˆÓ fiˆ˜ Ù· Ì˘ÎÔ-

‚·ÎÙËÚ›‰È·, ‰È·‰Ú·Ì·Ù›˙Ô˘Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎfi ÚfiÏÔ ÛÙËÓ ·fiÚÚÈ„Ë ·ÏÏÔÌÔÛ¯Â‡-

Ì·ÙÔ˜ Î·È ÛÙËÓ ·ÓÔÛÔÂÈÙ‹ÚËÛË ¤Ó·ÓÙÈ Î·ÎÔ‹ıˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (immune

surveillance). ∏ ·Ó¿Ù˘ÍË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ˘ÙÈÎ‹˜ ‰Ú¿ÛË˜ ÙÔ˘˜ Â›Ó·È ·ÔÙ¤ÏÂ-

ÛÌ· Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ‡ ÙË˜ ·Ó·ÁÓÒÚÈÛË˜ ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ Ô˘ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÙ·È ÛÂ

Û‡Ó‰ÂÛË ÌÂ Ù· MCH-ÌfiÚÈ· Ù¿ÍË˜ π Î·È ÙË˜ Â›‰Ú·ÛË˜ ÙË˜ IL-2 Î·È ¯·Ú·-

ÎÙËÚ›˙ÂÙ·È ·fi ÙËÓ ÂÌÊ¿ÓÈÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÒÓ ÎÔÎÎ›ˆÓ Ô˘ ÂÚÈ¤-

¯Ô˘Ó ÂÚÊÔÚ›ÓË ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ˘Û›ÓË (perforin ‹ cytolysin) Î·È ÚˆÙÂÔÏ˘ÙÈÎ¿

¤Ó˙˘Ì· (ÚˆÙÂ¿ÛÂ˜ ÙË˜ ÛÂÚ›ÓË˜, granzymes). ∞fi ÙÔ˘˜ fiÚÔ˘˜ Ô˘ Û¯ËÌ·-

Ù›˙ÂÈ Ë ÂÚÊÔÚ›ÓË ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ ÛÙfi¯Ô˘ ÂÈÛ¤Ú¯ÔÓÙ·È Ù· ¤Ó-

˙˘Ì· ÙˆÓ ÎÔÎÎ›ˆÓ Î·È ‰ÈÂÁÂ›ÚÔ˘Ó ÙÔÓ ÌË¯·ÓÈÛÌfi ÙË˜ ·fiÙˆÛË˜ Î·È ÙÔÓ

ı¿Ó·ÙÔ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

ŒÓ·˜ ÌÈÎÚfi˜ ·ÚÈıÌfi˜ ÙfiÛÔ ÙˆÓ ‚ÔËıËÙÈÎÒÓ, fiÛÔ Î·È ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔ-

ÍÈÎÒÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ÙËÓ ·Ó·ÁÓÒÚÈÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ Î·È ÙË˜ ‰È·ÊÔÚÔ-

Ô›ËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÛÂ ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· ‰ÂÓ Âı·›ÓÔ˘Ó ÛÂ Û‡ÓÙÔÌÔ ¯ÚÔÓÈÎfi ‰È¿-

ÛÙËÌ· ·ÏÏ¿ ·Ú·Ì¤ÓÔ˘Ó ÛÙÔÓ ÔÚÁ·ÓÈÛÌfi ÁÈ· 20-30 ¯ÚfiÓÈ· Î·È fiÙ·Ó ¤Ï-

ıÔ˘Ó Í·Ó¿ ÛÂ Â·Ê‹ ÌÂ ÙÔ ›‰ÈÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È Ù·¯‡ÙÂÚ· Î·È

·ÔÙÂÏÂÛÌ·ÙÈÎfiÙÂÚ· ·fi fiÙÈ Ù· ·Úı¤Ó· ÏÂÌÊÔÎ‡Ù·Ú·. Δ· Î‡ÙÙ·Ú· ·˘Ù¿

Ô˘ Â›Ó·È Ì·ÎÚfi‚È· ·ÔÙÂÏÔ‡Ó Ù· ÌÓËÌÔÓÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· (‹ Î‡ÙÙ·Ú· ÌÓ‹ÌË˜)

ÙÔ˘ ·ÓÔÛÈ·ÎÔ‡ Û˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜. Δ· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÈÛfiÙ˘Ô˘˜ ÙÔ˘ CD45

ÌÔÚ›Ô˘, Ô˘ Â›Ó·È ÁÓˆÛÙfi ˆ˜ ÙÔ ÎÔÈÓfi ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ (Leuco-

cyte Common Antigen, LCA). Δ· CD4+ Î·È Ù· CD8+ ·Úı¤Ó· (naïve) ÌË

ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔÓ ÈÛfiÙ˘Ô CD45RA ÛÂ ÔÛÔÛÙfi

50% Î·È 75% ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· ÂÓÒ Ù· ÌÓËÌÔÓÈÎ¿ (memory) Î‡ÙÙ·Ú· ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó

ÙÔÓ ÈÛfiÙ˘Ô CD45RO.

27

¶ÚfiÛÊ·Ù· ÙÔ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÔÓ ÂÛÙÈ¿˙ÂÙ·È ÛÙÔ ÚfiÏÔ ÙˆÓ Ú˘ıÌÈÛÙÈÎÒÓ Δ-Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ (T regulatory, Treg). ™Ù· Treg Î‡ÙÙ·Ú· ·Ó‹ÎÔ˘Ó Ù· CD4+CD25+

Î·È Ù· CD8+CD28- Ô˘ ‰ÚÔ‡Ó ·ÓÔÛÔÎ·Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎ¿, ·Ó·ÛÙ¤ÏÏÔÓÙ·˜ ÙË ÏÂÈ-

ÙÔ˘ÚÁ›· ÙˆÓ ·ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÈ·ÛÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ, ÂÏ·ÙÙÒÓÔÓÙ·˜ ÙËÓ ¤Î-

ÊÚ·ÛË ÙˆÓ Û˘Ó‰ÈÂÁÂÚÙÈÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ, ÙˆÓ ÌÔÚ›ˆÓ MHC Ù¿ÍË˜ π Î·È ππ Î·È

ÙˆÓ ·Ú·ÁfiÌÂÓˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ.21,22 Δ· ›‰È· ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜

fiˆ˜ Ë IL-10 Î·È Ô ‚-TGF (·Ú¿ÁÔÓÙ·˜ ·‡ÍËÛË˜ ÙˆÓ fiÁÎˆÓ, transforming

growth factor) Ô˘ ·Ó·ÛÙ¤ÏÏÔ˘Ó ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi ÙˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

∞Ó·ÁÓÒÚÈÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ·fi Ù· Δ-Î‡ÙÙ·Ú· Î·È ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛ‹ ÙÔ˘˜

Δ· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ·Ó·ÁÓˆÚ›˙Ô˘Ó ·ÓÙÈÁÔÓÈÎ¿ ÂÙ›‰È· ÌfiÓÔ fiÙ·Ó ·˘Ù¿ ·-

ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙˆÓ ·ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÈ·ÛÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ*

Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂ ÂÈ‰ÈÎ¿ HLA-ÌfiÚÈ· ÙÔ˘ ªÂ›˙ÔÓÔ˜ ™˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜ πÛÙÔÛ˘Ì‚·-

ÙfiÙËÙ·˜ (Major Histicompatibility Complex, MHC).23-25 ΔÔ Ê·ÈÓfiÌÂÓÔ ·˘-

Ùfi Â›Ó·È ÁÓˆÛÙfi ˆ˜ “MHC-ÂÚÈÔÚÈÛÌfi˜” (“MHC-restriction”, Peter Do-

herty Î·È Rolf Zingernagel ‚Ú·‚Â›Ô Nobel 1996). °È· ÙË Û‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ TcR

ÌÂ ÙÔ ‰ÈÌÔÚÈ·Îfi Û‡ÌÏÂÁÌ· ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘/ ªHC-ÌÔÚ›Ô˘ Â›Ó·È ··Ú·›ÙËÙË Ë

·ÚÔ˘Û›· Î·È Ë Û˘ÓÂÚÁÈÎ‹ ‰Ú¿ÛË ÙˆÓ Û˘Ó˘Ô‰Ô¯¤ˆÓ (co-receptors) CD4 ‹

CD8.

Δ· CD4+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ·Ó·ÁÓˆÚ›˙Ô˘Ó ·ÓÙÈÁÔÓÈÎ¿ ÂÙ›‰È· Ô˘ ÚÔ¤¯Ô-

ÓÙ·È ·fi Ê·ÁÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÛË, ÈÓÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÛË ‹ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÛË ÂÍˆÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ

·ıÔÁfiÓˆÓ ‹ ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ Î·È ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ·Ô‰fiÌËÛ‹ ÙÔ˘˜. Δ· ÂÙ›‰È·

Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÔ˘Ó ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È ÛÙ· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ·fi Ù· APCs ÌÂ ÙÔÓ ÙÚfi-

Ô Ô˘ ‹‰Ë ·Ó·Ê¤ÚıËÎÂ ·ÏÏ¿ ÌfiÓÔ ÛÂ Û‡Ó‰ÂÛË ÌÂ Ù· MCH Ù¿ÍË˜ ππ ÌfiÚÈ·

(ÂÍˆÁÂÓ‹˜ ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘). ∞ÓÙ›ıÂÙ· Ù· CD8+ T Î‡ÙÙ·Ú·

·Ó·ÁÓˆÚ›˙Ô˘Ó ·ÓÙÈÁÔÓÈÎ¿ ÂÙ›‰È· Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÂÓ‰ÔÁÂÓÒ˜ ·Ú·-

28

* ∞ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· (Antigen presenting cells ‹ APC)Δ· Ì·ÎÚÔÊ¿Á· ÙˆÓ ÈÛÙÒÓ, Ù· μ Î‡ÙÙ·Ú·, Ù· ‰ÂÓ‰ÚÈÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú·, Ù· Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ Langer-

hans ÙË˜ ÂÈ‰ÂÚÌ›‰·˜ Î·È Ù· ‰È·ÏÂÎfiÌÂÓ· ‰ÂÓ‰ÚÈÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· ÙˆÓ ÏÂÌÊÈÎÒÓ ÔÚÁ¿ÓˆÓ

·ÔÙÂÏÔ‡Ó Ù· Î˘ÚÈfiÙÂÚ· ·ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÈ·ÛÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú·.10

T· Ì·ÎÚÔÊ¿Á· ‰È·‰Ú·Ì·Ù›˙Ô˘Ó Î·ıÔÚÈÛÙÈÎfi ÚfiÏÔ ÛÂ fiÏÂ˜ ÙÈ˜ Ê¿ÛÂÈ˜ ÙË˜ ÂÈ‰ÈÎ‹˜ ·ÓÔÛÈ·-

Î‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜. º·ÁÔÎ˘ÙÙ·ÚÒÓÔ˘Ó ÙÔ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎfi ˘ÏÈÎfi, ÙÔ ÂÂÍÂÚÁ¿˙ÔÓÙ·È Î·È ÙÔ ·-

ÚÔ˘ÛÈ¿˙Ô˘Ó ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ¿ ÙÔ˘˜ ÛÂ ÌÔÚÊ‹ ·Ó·ÁÓˆÚ›ÛÈÌË ·fi Ù· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ‰ËÏ·‰‹ ÛÂ

Û‡Ó‰ÂÛË ÌÂ ¤Ó· MCH-ÌfiÚÈÔ Ù¿ÍË˜ π ‹ ππ.11,23

Δ· ‰ÂÓ‰ÚÈÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ¿ ÙÔ˘˜ ÌÂÁ¿ÏÔ ·ÚÈıÌfi MCH-ÌÔÚ›ˆÓ

Ù¿ÍË˜ ππ Î·È ˆ˜ ÂÎ ÙÔ‡ÙÔ˘, ‰È·‰Ú·Ì·Ù›˙Ô˘Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎfi ÚÔÏÔ ÛÙËÓ ·ÚÔ˘Û›·ÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfi-

ÓÔ˘ Î·È ÛÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

ÁfiÌÂÓÂ˜ ÚˆÙÂ˝ÓÂ˜, fiˆ˜ Â›Ó·È ÔÈ ÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ ÙˆÓ ÈÒÓ Î·È ÙˆÓ fiÁÎˆÓ (ÂÓ‰Ô-

ÁÂÓ‹˜ Ô‰fi˜ ÂÂÍÂÚÁ·Û›·˜ ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘) Î·È ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È ÛÙ· Δ Î‡ÙÙ·-

Ú· ·fi Ù· APCs ÌfiÓÔ ÛÂ Û‡Ó‰ÂÛË ÌÂ Ù· MCH Ù¿ÍË˜ π ÌfiÚÈ·.26-27

∏ ·ÚÔ˘Û›·ÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ Î·È Ë Û‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ Û˘ÌÏ¤ÁÌ·ÙÔ˜ ·ÓÙÈ-

ÁÔÓÈÎfi ÂÙ›‰ÈÔ/MHC-ÌfiÚÈÔ ÌÂ ÙÔÓ TcR ·ÔÙÂÏÂ› ÙÔ ·Ú¯ÈÎfi ÛÙ¿‰ÈÔ ÙË˜

·Ó·ÁÓÒÚÈÛË˜ ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘. ∞ÎÔÏÔ˘ıÂ› ÌÈ· ÛÂÈÚ¿ ‰È·‰Ô¯ÈÎÒÓ ‰ÈÂÚÁ·ÛÈÒÓ

Ô˘ Ô‰ËÁÔ‡Ó ÛÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È ÛÙË ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛ‹

ÙÔ˘ ÛÂ ‰Ú·ÛÙÈÎfi Î‡ÙÙ·ÚÔ (¶›Ó. 2). ™ÙÈ˜ ‰ÈÂÚÁ·Û›Â˜ ·˘Ù¤˜ ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÂÙ·È Ë

ÊˆÛÊoÚ˘Ï›ˆÛË ÙˆÓ Ù˘ÚÔÛÈÓÈÎÒÓ ÚÈ˙ÒÓ ‰È·ÊfiÚˆÓ ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎÒÓ Î·È Î˘ÙÙ·-

ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÒÓ ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ. OÈ ÊˆÛÔÚ˘ÏÈÒÛÂÈ˜ ·˘Ù¤˜ Î·Ù·Ï‡ÔÓÙ·È ·fi ¤Ó-

˙˘Ì· ÁÓˆÛÙ¿ ˆ˜ ÊˆÛÊÔÙ˘ÚÔÛÈÓÈÎ¤˜ ÎÈÓ¿ÛÂ˜ (phosphotyrosine kinases,

PTKs). ¢È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ‰‡Ô ÔÈÎÔÁ¤ÓÂÈÂ˜ PTKs: Ë Src-ÔÈÎÔÁ¤ÓÂÈ·, ÛÙËÓ ÔÔ›·

·Ó‹ÎÔ˘Ó ÔÈ PTKs Lck Î·È Fyn, Î·È Ë ÔÈÎÔÁ¤ÓÂÈ· ÙˆÓ ∑∞ƒ-70 (˙ associated

protein of 70 kD) Î·È Syk PTKs.12

∏ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ÌÂÙ·‚›‚·ÛË˜ ÙÔ˘ ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ ÁÈ· ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË Ì¤Ûˆ

ÙÔ˘ TcR Á›ÓÂÙ·È fiÙ·Ó Ë ÊˆÛÊÔÙ˘ÚÔÛÈÓÈÎ‹ ÎÈÓ¿ÛË CD45 (ÙÔ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·-

ÛÌ·ÙÈÎfi ÙË˜ Î˘Ú›ˆ˜ ¿ÎÚÔ) ·ÔÊˆÛÊÔÚ˘ÏÈÒÓÂÈ ÙËÓ Ù˘ÚÔÛÈÓÈÎ‹ ÎÈÓ¿ÛË

29

¶›Ó·Î·˜ 2. ™Ù¿‰È· ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘

™Δ∞¢π∞ ∂¡∂ƒ°O¶Oπ∏™∏™ ΔOÀ Δ ∫ÀΔΔ∞ƒOÀ

1. ¶·ÚÔ˘Û›·ÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ·fi ÙÔ ·ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÈ·ÛÙÈÎfi Î‡ÙÙ·ÚÔ ÛÙÔ Δ

Î‡ÙÙ·ÚÔ

2. ™‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ TcR ÌÂ ÙÔ Û‡ÌÏÂÁÌ· ·ÓÙÈÁÔÓÈÎfi ÂÙ›‰ÈÔ – MHC ÌfiÚÈÔ

3. ŒÓ·ÚÍË ÌÂÙ·‚›‚·ÛË˜ ÌÈ·˜ ÛÂÈÚ¿˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ ÌËÓ˘Ì¿ÙˆÓ ÌÂ ÙËÓ Ù˘ÚÔÛÈÓÈ-

Î‹ ÊˆÛÊÔÚ˘Ï›ˆÛË ‰È·ÊfiÚˆÓ ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎÒÓ Î·È Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÒÓ ÚˆÙÂ˚-

ÓÒÓ

4. À‰ÚfiÏ˘ÛË ÂÓfi˜ ÈÓÔÛÈÙÔÏÈÎÔ‡ ÊˆÛÊÔÏÈÈ‰›Ô˘ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜

5. ∞‡ÍËÛË ÙË˜ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÔ‡ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘

6. ∞‡ÍËÛË ÙË˜ ‰Ú·ÛÙÈÎfiÙËÙ·˜ ÙË˜ ÚˆÙÂ˚ÓÈÎ‹˜ ÎÈÓ¿ÛË˜ C

7. ™˘Ó‰È¤ÁÂÚÛË ÌÂ ÙË Û‡Ó‰ÂÛË CD28-CD80/CD86 Î·È ·Ú·ÁˆÁ‹ IL-2

8. ¢Ú¿ÛË ÙË˜ IL-2 ÛÙÔÓ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙË˜ ÌÂ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙËÓ ÔÏÔÎÏ‹ÚˆÛË ÙË˜ ÂÓÂÚ-

ÁÔÔ›ËÛË˜ Î·È ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ ÙË ÌÂÙ¿‚·ÛË ÙÔ˘ ˘Ú‹Ó·

ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË

9. ¢È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ CD4+ T Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ ÛÂ Δ∏1 ‹ Δ∏2 Ê·ÈÓfiÙ˘Ô ÌÂ ÙË ‰Ú¿ÛË

Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ, Û˘Ó‰ÈÂÁÂÚÙÈÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ Î·È ·Ú·ÎÂ›ÌÂÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (‚·ÛÂfi-

ÊÈÏ·, Ì·ÎÚÔÊ¿Á·, CD4-CD8- ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·)

10. §‹ÍË ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ Â›ÙÂ ÌÂ ·fiÙˆÛË ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â›ÙÂ ÌÂ ÌÂÙ¿Ùˆ-

ÛË ÛÙË Ê¿ÛË “ËÚÂÌ›·˜” Go

p59fyn Î·È ÙËÓ p56lck Ô˘ Â›Ó·È Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓË ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎ‹ “Ô˘-

Ú¿” ÙÔ˘ CD4 ‹ ÙÔ˘ CD8.28 ™ÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ·, Ë ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓË ÎÈÓ¿ÛË p56lck

ÊˆÛÊÔÚ˘ÏÈÒÓÂÈ ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎ¤˜ ·Ï˘Û›‰Â˜ ÙÔ˘ CD3, ÙÈ˜ ˙ ·Ï˘Û›‰Â˜

Î·È Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÂ˜ ·ÏÏËÏÔ˘¯›Â˜ ÙÔ˘ ÌÔÚ›Ô˘ TcR (˘ÔÏÏÂÈÌ·ÙÈÎ¤˜ Ù˘ÚÔÛ›-

ÓÂ˜) Ô˘ ·ÔÙÂÏÔ‡ÓÙ·È ·fi 16 ·ÌÈÓÔÍ¤· Î·È ·Ó‹ÎÔ˘Ó ÛÙÈ˜ ·ÏÏËÏÔ˘¯›Â˜

“ITAMs” (πmmunoreceptor Tyrosin-based Activation Motifs).12

∏ Ù˘ÚÔÛÈÓÈÎ‹ ÊˆÛÊÔÚ˘Ï›ˆÛË ÙˆÓ πΔ∞ª ·ÔÙÂÏÂ› ÙÔ ÚÒÙÔ Ê·ÈÓfiÌÂ-

ÓÔ ÙË˜ ‰È·‰ÈÎ·Û›·˜ ÌÂÙ·‚›‚·ÛË˜ ÙÔ˘ ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ Ì¤Ûˆ ÙÔ˘ TcR ÌÂ ¿ÌÂÛÔ

Â·ÎfiÏÔ˘ıÔ ÙË ÊˆÛÊÔÚ˘Ï›ˆÛË Î·È ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙË˜ ∑∞ƒ-70. OÈ ÊˆÛÊÔ-

Ú˘ÏÈˆÌ¤ÓÂ˜ πΔ∞ªs ÚÔÛÂÏÎ‡Ô˘Ó ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÌfiÚÈ· ÙË˜ ÌÂ-

Ù·‚›‚·ÛË˜ ÙÔ˘ ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ fiˆ˜ Ë ÎÈÓ¿ÛË ÙË˜ ÛÂÚ›ÓË˜ Î·È ÙË˜ ıÚÂÔÓ›ÓË˜

ZAP-70 (∂ÈÎ. 2). ªÂÙ¿ ·fi ·˘Ùfi, Ë ∑∞ƒ-70 Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È ÌfiÓÔ ÛÙ· Δ

Î·È ÛÙ· ¡∫ Î‡ÙÙ·Ú· ÂÌÊ·Ó›˙ÂÙ·È ÛÙÂÚÂ¿ Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓË ÌÂ ÙÔ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·-

ÛÌ·ÙÈÎfi ¿ÎÚÔ ÙË˜ ˙-·Ï˘Û›‰·˜. H ∑∞ƒ-70 ÎÈÓ¿ÛË ¤¯ÂÈ Û·Ó ˘fiÛÙÚˆÌ· ÙËÓ

PLCÁ1 (phospholipase C) Ë ÔÔ›· ÌÂ ÙË ÛÂÈÚ¿ ÙË˜ ‰È·Û¿ ÙËÓ ‰ÈÊˆÛÊÔÚÈ-

Î‹ ÊˆÛÊ·ÙÈ‰˘ÏÈÓÔÛÈÙfiÏË (ƒπƒ2 – ¤Ó· ·fi Ù· ÊˆÛÊÔÏÈ›‰È· ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜

ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜) ÛÂ ‰È·Î˘ÏÔÁÏ˘ÎÂÚfiÏË (DAG) Î·È ÙÚÈÊˆÛÊÔÚÈÎ‹ ÈÓÔÛÈÙfiÏË

(InsP3).12, 29-30 H InsP3 ÎÈÓËÙÔÔÈÂ› ÙÔ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈÔ ·Û‚¤ÛÙÈÔ (Î˘ÙÙ·ÚÔ-

Ï·ÛÌ·ÙÈÎfi ·Û‚ÂÛÙÈÔ) ·fi ÙÔ ÂÓ‰ÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎfi ‰›ÎÙ˘Ô (∂¢). ∏ ÂÏ¿ÙÙˆÛË

ÙË˜ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜ ÙÔ˘ Ca2+ ÛÙÔ ∂¢ Ô‰ËÁÂ› ÛÙÔ ¿ÓÔÈÁÌ· ÙˆÓ Î·Ó·ÏÈÒÓ

Ca2+ ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ (CRAC-channels: Ca2+ -release activated Ca2+ -

channels) ÌÂ Û˘Ó¤ÂÈ· ÙËÓ ÂÈÛÚÔ‹ Ca2+ Î·È ÙËÓ ·‡ÍËÛË ÙË˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·˜

Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘.31 ∞ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙË˜ ·‡ÍËÛË˜ ·˘Ù‹˜ ÙÔ˘ ÂÓ‰ÔÎ˘Ù-

Ù¿ÚÈÔ˘ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘ ·ÏÏ¿ Î·È ÙË˜ DAG Â›Ó·È Ë ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙË˜ ÚˆÙÂ˚ÓÈ-

Î‹˜ ÎÈÓ¿ÛË˜ C (PKC) Ô˘ Â›Ó·È ÌÈ· ÛÂÚÈÓÈÎ‹/ıÚÂÔÓÈÎ‹ ÊˆÛÊÔÎÈÓ¿ÛË. ∏

·˘ÍËÌ¤ÓË Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÔ‡ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘ ÌÔÚÂ› Ó·

Â¿ÁÂÈ Î·È ÙÔÓ Û¯ËÌ·ÙÈÛÌfi Û˘ÌÏÂÁÌ¿ÙˆÓ ÌÂ ÌÈ· Ú˘ıÌÈÛÙÈÎ‹ ÚˆÙÂ˝ÓË ÙËÓ

Î·ÏÌÔ‰Ô˘Ï›ÓË (Ca2+-calmodulin) Ô˘ ÌÂ ÙË ÛÂÈÚ¿ ÙÔ˘˜ Â¿ÁÔ˘Ó ÙËÓ ÂÓÂÚ-

ÁÔÔ›ËÛË ‰È·ÊfiÚˆÓ ÂÓ˙‡ÌˆÓ Î˘Ú›ˆ˜ ÊˆÛÊ·Ù·ÛÒÓ fiˆ˜ Ë Î·ÏÛÈÓÂ˘Ú›ÓË.12

∏ ÁÚ‹ÁÔÚË ÂÓÙfiÈÛË ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ ·˘ÙÒÓ ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË

Î·Ù¿ ÙËÓ ·ÚÔ˘Û›·ÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ Â›Ó·È Ô˘ÛÈ·ÛÙÈÎ‹ ÁÈ· ÙËÓ ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ

ÂÍ¤ÏÈÍË ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘. ª¤¯ÚÈ Û‹ÌÂÚ· ‰ÂÓ Â›Ó·È Ï‹-

Úˆ˜ ‰ÈÂ˘ÎÚÈÓÈÛÌ¤ÓÔÈ fiÏÔÈ ÔÈ ÌË¯·ÓÈÛÌÔ› ÌÂÙ·‚›‚·ÛË˜ ÙˆÓ ÌËÓ˘Ì¿ÙˆÓ Ô˘

ÌÂÛÔÏ·‚Ô‡Ó ÁÈ· ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È Ô‰ËÁÔ‡Ó ÛÙËÓ ¤Î-

ÎÚÈÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ fiˆ˜ Ë IL-2, Ô˘ Î·ÙÂ˘ı‡ÓÔ˘Ó ÙÈ˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›Â˜ ÙÔ˘ Δ

Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È Ô˘ ·Ú¿ÏÏËÏ· Ô‰ËÁÔ‡Ó ÛÙËÓ ·‡ÍËÛË ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ˘Ô‰Ô-

¯¤ˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Î·È ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ (ÌfiÚÈ· ‹ ·ÓÙÈÁfiÓ· ÂÓÂÚÁÔ-

Ô›ËÛË˜).

30

31

∂ÈÎfiÓ· 2. ªÂÙ·‚›‚·ÛË ÙÔ˘ ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ Ì¤Ûˆ ÙÔ˘ TcR. ∂ÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘

Yποδοχέας Τκυττάρου

ΤcR CD3

ITAM

CD4

CD3

CD28 CD154

ζ

ζ

γ

δ

ε

Vβ

Vα

Cβ

Cα

P

P

P

PP

p56Ick

p59fyn

ZAP-70

Yποδοχείςσυνδιεγερτικών

μορίων

Μεταγραφή γονιδίων

ΠυρήναςΚυτταρόπλασμα

Αντιγονο-παρουσιαστικό

κύτταρο

Μεταβίβαση μηνύματος μέσω του TcR

β2

α1

Vα

α3

α2

Vα

Cβ

α2

α1

Vα

CβCβ

β2

β1

Vα

Cβ

ζ ζ γ ε ε δ ζ ζ γ ε ε δ

Antigen Antigen

ZAP70

Lck

ZAP70

LckFyn

CbI

Fyn

CbICD8CD3CD3 CD3CD3

TCR TCR

Ενεργοποίηση

+CD4

CD3 CD3

+

∏ ‰È¤ÁÂÚÛË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Ì¤Ûˆ ÙÔ˘ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙÔ˘ Î·È ÌfiÓÔ ‰ÂÓ ·Ú-

ÎÂ› ÁÈ· ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ IL-2 Î·È ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛ‹ ÙÔ˘. °È· ÙËÓ ÙÂÏÂ˘Ù·›·,

Â›Ó·È ··Ú·›ÙËÙÔ Î·È ¤Ó· «‰Â‡ÙÂÚÔ Ì‹Ó˘Ì·», ÙÔ Û˘Ó‰ÈÂÁÂÚÙÈÎfi Ì‹Ó˘Ì·

(∂ÈÎ.3).32 ¶·Ú¿ÏÏËÏ· ÏÔÈfiÓ ÌÂ ÙË Û‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ Û˘ÌÏ¤ÁÌ·ÙÔ˜ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎfi

ÂÙ›‰ÈÔ - MHC ÌfiÚÈÔ ÌÂ ÙÔÓ ΔcR, ÙÔ Û˘Ó‰ÈÂÁÂÚÙÈÎfi ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ÌfiÚÈÔ

CD28 Ô˘ Â›Ó·È ÌÈ· ÁÏ˘ÎÔÚˆÙÂ˝ÓË ÙË˜ ÂÈÊ¿ÓÂÈ·˜ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÂÎ-

ÊÚ¿˙ÂÙ·È ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· fiÏˆÓ Û¯Â‰fiÓ ÙˆÓ CD4+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÛÙÔ

50% ÙˆÓ CD8+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ) Û˘Ó‰¤ÂÙ·È ÌÂ Ù· ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎ¿ ÌfiÚÈ· μ7.1

(CD80) Î·È B7.2 (CD86) ÙˆÓ Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ, ÙˆÓ ‰ÂÓ‰ÚÈÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È

ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ μ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.33 ∏ Û‡Ó‰ÂÛË ·˘Ù‹ ¤¯ÂÈ ˆ˜ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ·

ÙËÓ ÌÂÙ·‚›‚·ÛË ÙÔ˘ ‰Â‡ÙÂÚÔ˘ ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ Ô˘ Â›Ó·È ··Ú·›ÙËÙÔ ÁÈ· ÙËÓ ÂÎ-

‰‹ÏˆÛË ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ (∂ÈÎ. 4). ™‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ CD28

ÙˆÓ APCs ÌÂ ÙÔ μ7.2 ÂÓÂÚÁÔÔÈÂ› ÙÔ Δ Î‡ÙÙ·ÚÔ Î·È Â¿ÁÂÈ ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË

ÙÔ˘ CTLA-4, ÙÔ ÔÔ›Ô ·Ó Û˘Ó‰ÂıÂ› ÌÂ ÙÔ B7.1 ·Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›Ë-

ÛË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È Â¿ÁÂÈ ÙËÓ ·fiÙˆÛË. ∞Ô˘Û›· ÙÔ˘ ‰Â‡ÙÂÚÔ˘ (Û˘Ó-

‰ÈÂÁÂÚÙÈÎÔ‡) ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ ·Ó·ÁÓÒÚÈÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘, ¤¯ÂÈ Û·Ó

·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙÔ Δ Î‡ÙÙ·ÚÔ Ó· ÂÚÈ¤Ú¯ÂÙ·È ÛÂ ÌÈ· ·Ú·ÙÂÙ·Ì¤ÓË Î·Ù¿ÛÙ·ÛË

ÌË ‰ÈÂÁÂÚÛÈÌfiÙËÙ·˜ (·ÓÂÚÁ›·) ‰ËÏ·‰‹ ÛÂ ·ÓÈÎ·ÓfiÙËÙ· ·ÓÙ·fiÎÚÈÛË˜ ÛÙÔ

·ÓÙÈÁÔÓÈÎfi ÂÚ¤ıÈÛÌ· ‹ ÙÔÓ ÚÔÁÚ·ÌÌ·ÙÈÛÌ¤ÓÔ ı¿Ó·ÙÔ (·fiÙˆÛË).

32

∂ÈÎfiÓ· 3. ∞Ó·ÁÓÒÚÈÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ·fi Ù· CD4+ Î·È CD8+ T Î‡ÙÙ·Ú·.

APCCD4+

T Î‡ÙÙ·ÚÔCD8+CTL

HLAÙ¿ÍË ππ

∫‡ÙÙ·ÚÔÌÔÏ˘ÛÌ¤ÓÔ

·fi Èfi

CD4

TcR

CD3

CD3

TcR

CD28/B7

IL-1

IFN-Á

HLAÙ¿ÍË π

CD8

Ag

π˚ÎfiAg

· ‚

∞¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· in vitro

Δ· ÌÈÙÔÁfiÓ· Â›Ó·È ·Ú¿ÁÔÓÙÂ˜ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎ‹˜ ¯ËÌÈÎ‹˜ Û‡ÛÙ·ÛË˜ (Î˘-

Ú›ˆ˜ Ê˘ÙÈÎ‹˜ ÚÔ¤ÏÂ˘ÛË˜ ¯. ÏÂÎÙ›ÓÂ˜, ÔÏ˘Û·Î¯·Ú›ÙÂ˜), fiˆ˜ ÚÔ˚fiÓÙ· ‹

‰ÔÌÈÎ¿ Û˘ÛÙ·ÙÈÎ¿ ÌÈÎÚÔ‚›ˆÓ ‹ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· Î.·., ÔÈ ÔÔ›ÔÈ

ÌÔÚÔ‡Ó Ó· Â¿ÁÔ˘Ó ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ‰È·›ÚÂÛË ÙˆÓ Δ Î·È μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÂ-

Á¿ÏÔ ÔÛÔÛÙfi. ¢ÂÓ Â›Ó·È ÂÈ‰ÈÎÔ› ‰ÈÂÁ¤ÚÙÂ˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÎÏÒÓˆÓ fiˆ˜ Ù·

‰È¿ÊÔÚ· ·ÓÙÈÁfiÓ· ·ÏÏ¿ ÂÓÂÚÁÔÔÈÔ‡Ó ÌË ÂÈ‰ÈÎ¿ ÔÏÏÔ‡˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡˜

ÎÏÒÓÔ˘˜ Δ ‹ μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÔÏ˘ÎÏˆÓÈÎÔ› ‰ÈÂÁ¤ÚÙÂ˜).34 Δ· Î˘ÚÈfiÙÂÚ· ÌÈÙÔ-

ÁfiÓ· ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â›Ó·È Ë Ê˘ÙÔ·ÈÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË (phytohemagglutinin,

ƒ∏∞) Î·È Ë ÎÔÓÎ·Ó·‚·Ï›ÓË ∞ (concanavalin, Con A) ÂÓÒ ÙˆÓ μ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Â›Ó·È Ô ÏÈÔÔÏ˘Û·Î¯·Ú›ÙË˜ ÙÔ˘ ÙÔÈ¯ÒÌ·ÙÔ˜ ÙˆÓ Gram (-) ‚·ÎÙËÚ›ˆÓ

(LPS).35,36 Δ¤ÏÔ˜, ˘¿Ú¯Ô˘Ó Î·È ÌÈÙÔÁfiÓ· Ô˘ ÂÓÂÚÁÔÔÈÔ‡Ó ÂÍ›ÛÔ˘ Î·È

ÙÔ˘˜ ‰‡Ô ÏËı˘ÛÌÔ‡˜ fiˆ˜ ÙÔ ÌÈÙÔÁfiÓÔ ÙË˜ Phytolacca americana (poke-

weed mitogen, PWM). Δ· Î˘ÚÈfiÙÂÚ· ÁÓˆÛÙ¿ ÌÈÙÔÁfiÓ·, Ë ËÁ‹ ÚÔ¤ÏÂ˘Û‹˜

ÙÔ˘˜ Î·È Ë ÂÈ‰ÈÎfiÙËÙ¿ ÙÔ˘˜ ˆ˜ ÚÔ˜ ÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÏËı˘ÛÌfi Ô˘ ‰ÈÂÁÂ›-

ÚÔ˘Ó Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 3.

OÈ ÏÂÎÙ›ÓÂ˜ Ô˘ Â›Ó·È ÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓÂ˜ ÌÂ ˘‰·Ù¿ÓıÚ·ÎÂ˜

‰ÚÔ‡Ó ·Ó·ÁÓˆÚ›˙ÔÓÙ·˜ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ ÁÏ˘ÎÔÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÙˆÓ ÏÂÌ-

ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÌÔÚÂ› Ó· ÂÈ‰ÚÔ‡Ó ÛÂ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡˜ ˘ÔÏËı˘ÛÌÔ‡˜

ÙÔ˘˜ (fiˆ˜ ¯. Ë Con A Î·È Ë PHA ‰ÚÔ˘Ó ÛÂ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡˜ ˘ÔÏËı˘-

ÛÌÔ‡˜ ÙˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ). ΔÔ CD3 ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· ‰Ú· ÌfiÓÔ ÛÙ· Δ-

Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ Ê¤ÚÔ˘Ó ÙÔ Û‡ÌÏÂÁÌ· ÙÔ˘ TcR.

33

∂ÈÎfiÓ· 4. ∏ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÂÓfi˜ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Á›ÓÂÙ·È fiÙ·Ó ÙÔ ·ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÈ·ÛÙÈÎfiÎ‡ÙÙ·ÚÔ Ê¤ÚÂÈ ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ¿ ÙÔ˘ ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓÔ ÌÂ ÙÔ MHC ÌfiÚÈÔ (1)Î·È ¤Ó·Ó Û˘Ó‰ÈÂÁ¤ÚÙË (2).

¢ÈÏ‹ ‰È¤ÁÂÚÛË (·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ -

Û˘Ó‰ÈÂÁÂÚÙÈÎÔ‡ ÌÔÚ›Ô˘)

ªÔÓ‹ ‰È¤ÁÂÚÛË

ÌÂ ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ

ªÔÓ‹ ‰È¤ÁÂÚÛË ÌÂ ÙÔ

Û˘Ó‰ÈÂÁÂÚÙÈÎfi ÌÔÚÈÔ

∞ÓÙÈÁÔÓÔ·ÚÔ˘ÛÈ·ÛÙÈ

Îfi

Î‡ÙÙ·ÚÔ


Îfi

Î‡ÙÙ·ÚÔ


Îfi

Î‡ÙÙ·ÚÔ

∂ÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ ΔÔ Δ Î‡ÙÙ·ÚÔ ·‰Ú·ÓÂ› ·Ú¿ ÙË

Û‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ ΔcR ÌÂ ÙÔ

‰ÈÌÔÚÈ·Îfi Û‡ÌÏÂÁÌ·

(ª∏C-AÓÙÈÁfiÓÔ)

Δ-ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·ÚÔ Δ-ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·ÚÔ Δ-ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·ÚÔ

ª∏C CD4™˘Ó‰ÈÂÁ¤ÚÙË

YÔ‰Ô¯¤·

Δ-ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘

Ÿ¯È ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÛÙÔ Δ Î‡ÙÙ·ÚÔ

1 12 2

ªÂÙ¿ ÙË ‰È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· Û˘Ì‚·›ÓÔ˘Ó ÔÚÈ-

ÛÌ¤Ó· ‚ÈÔ¯ËÌÈÎ¿ ÁÂÁÔÓfiÙ· Ô˘ Û¯ÂÙ›˙ÔÓÙ·È Î˘Ú›ˆ˜ ÌÂ ÙËÓ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË, fiˆ˜

·‡ÍËÛË ÙË˜ Û‡ÓıÂÛË˜ ÙˆÓ ÊˆÛÊÔÏÈÈ‰›ˆÓ, ·‡ÍËÛË ÙË˜ ‰È·ÂÚ·ÙfiÙËÙ·˜ ÙË˜

ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÛÂ ‰ÈÛıÂÓ‹ Î·ÙÈfiÓÙ·, ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙË˜ ·‰ÂÓ˘ÏÈÎ‹˜ Î˘ÎÏ¿ÛË˜

Î·È Î·Ù¿ Û˘Ó¤ÂÈ· ·‡ÍËÛË ÙË˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·˜ Î˘ÎÏÈÎ‹˜ ÌÔÓÔÊˆÛÊÔÚÈÎ‹˜

·‰ÂÓÔÛ›ÓË˜ (cyclic adenosine monophosphate, c∞ªƒ). ™ÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ·ÎÔ-

ÏÔ˘ıÂ› Ë Û‡ÓıÂÛË ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ Î·È ÙˆÓ ÓÔ˘ÎÏÂ˚ÎÒÓ ÔÍ¤ˆÓ RNA Î·È DNA.

ŒÙÛÈ ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È Ë ¤ÎÊÚ·ÛË Ó¤ˆÓ ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ (ÂÈÊ·ÓÂÈ·Î¿

ÌfiÚÈ·), Ë ·Ú·ÁˆÁ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Î·È Ë ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ

ÎÏÒÓˆÓ Ô˘ ÛÙÔ Û‡ÓÔÏfi ÙÔ˘˜ Û˘ÓÈÛÙÔ‡Ó ÙËÓ ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Δ

‹ μ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘.

™ÙËÓ ÎÏÈÓÈÎ‹ Ú¿ÍË, Ë ·‡ÍËÛË ÙË˜ Û‡ÓıÂÛË˜ ÙÔ˘ DNA ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔ-

34

¶›Ó·Î·˜ 3. ªÈÙÔÁfiÓ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ªπΔO°O¡O ™À¡ΔOªO°ƒ∞ºπ∞ ¶∏°∏ ∂π¢π∫OΔ∏Δ∞

º˘ÙÔ·ÈÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË PHA Phaseolus T-Î‡ÙÙ·Ú·

(Phytohemagglutin) vulgaris

∫ÔÓÎ·Ó·‚·Ï›ÓË ∞ Con A Canavalia ensiforms Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

(Concanavalin A) (jack bean)

Anti-CD3 (MoAb) CD3 Hybridoma supernatant Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

§Â˘ÎÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË LA Phaseolus Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

(Leukogglutinin) vulgaris

§ÂÎÙ›ÓË Ê·Î‹˜ LL Lens culinaris Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

™˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË ÛfiÁÈ·˜ SBA Glycine max Δ-Î‡ÙÙ·Ú·

ªÈÙÔÁfiÓÔ Pokeweed PWM Phytolacca μ+T-Î‡ÙÙ·Ú·

americana

Staphylococcus protein A SpA, SAC Staphylococcus μ+T-Î‡ÙÙ·Ú·

aureus

§ÈÔÔÏ˘Û·Î¯·Ú›ÙÂ˜ LPS E. coli, μ-Î‡ÙÙ·Ú·

Salmonella

§ÈÔÚˆÙÂ˝ÓË LP E. coli μ-Î‡ÙÙ·Ú·

£ÂÈ˚Î‹ ‰ÂÍÙÚ¿ÓË DSx Leuconostoc μ-Î‡ÙÙ·Ú·

mesenteroides

º˘Ì·Ù›ÓË PPD Mycobacterium μ-Î‡ÙÙ·Ú·

tuberculosis

¢ÂÍÙÚ¿ÓË Dx Leuconostoc μ-Î‡ÙÙ·Ú·

mesenterÈoides

ÁfiÓˆÓ ‹ ÂÈ‰ÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È Ë Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ‰È·›ÚÂÛË Ô˘ Â·ÎÔÏÔ˘ıÂ› Â›-

Ó·È Ù· ÈÔ ÚÔÛÈÙ¿ Ê·ÈÓfiÌÂÓ· ÁÈ· ÌÂÏ¤ÙË ÁÈ’ ·˘Ùfi Î·È ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È

ˆ˜ «‰Â›ÎÙË˜» ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹

·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ) ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ¿ÏÏÂ˜ ÈÔ ÚÒÈÌÂ˜ ‰ÈÂÚÁ·Û›Â˜

fiˆ˜ Ë ·‡ÍËÛË ÙË˜ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÔ‡ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘

(calcium influx) ‹ Ô ÌÂÙ·‚ÔÏÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÊˆÛÊÔÏÈÈ‰›ˆÓ.

ª¤¯ÚÈ ÚfiÛÊ·Ù·, Ë ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜ ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· Î·È ‰È¤ÁÂÚÛË ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹ ÌË ÂÈ‰È-

Î¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· ÁÈÓfiÙ·Ó Â›ÙÂ ·‰Ú¿ ÌÔÚÊÔÏÔÁÈÎ¿ ÌÂ ÙË Ì¤ÙÚËÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡

ÌÂÙ·ÌfiÚÊˆÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ‚Ï¿ÛÙÂ˜ ÛÙÔ ÎÔÈÓfi ÌÈÎÚÔÛÎfiÈÔ

(˘ÔÎÂÈÌÂÓÈÎ‹ ÂÎÙ›ÌËÛË), Â›ÙÂ ÌÂ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ÌÂ ÙË Ì¤ÙÚËÛË

ÙË˜ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ [3∏]-ΔdR ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂ-

ÓÔ DNA ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (Û˘Ì‚·ÙÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È Â˘-

Ú¤ˆ˜).

™ÙËÓ Ú·‰ÈÔ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô Ù· ·ÔÌÔÓˆı¤ÓÙ· ·fi ÙÔ ÔÏÈÎfi ·›Ì·

ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Î·ÏÏÈÂÚÁÔ‡ÓÙ·È ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜ ÛÂ ÎÏ›‚·ÓÔ (37° C, 5% CO2)

·ÚÔ˘Û›· ‹ fi¯È ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ Û˘ÁÎÂÓÙÚÒÛÂÈ˜ Î·È 6-12 ÒÚÂ˜ ÚÈÓ

ÙË Û˘ÏÏÔÁ‹ ÙÔ˘˜ Á›ÓÂÙ·È ÚÔÛı‹ÎË ÛÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›-

ÓË˜. Δ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙË Ê¿ÛË S ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÂÓÛˆ-

Ì·ÙÒÓÔ˘Ó ÙËÓ [3H]-TdR. Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È Î˘Ú›ˆ˜ ÛÂ cpm

(counts per minute) ‹ ÛÂ dpm (disintegration per minute) Î·È ˘ÔÏÔÁ›˙ÂÙ·È

Î·È ¤Ó·˜ ‰Â›ÎÙË˜ ‰È¤ÁÂÚÛË˜ (Stimulation Index [SI] = cpm in stimulated

culture/cpm in control culture) Ô˘ ‰Â›¯ÓÂÈ ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi ÙˆÓ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ¤ÌÌÂÛ· ÌÂ ‚¿ÛË ÙÔ ÔÛfi ÙË˜ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ Ô˘ ÂÓÛˆÌ·ÙÒÓÂÙ·È ÛÙ· Î‡Ù-

Ù·Ú· Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ‰ÈÂÁÂÚıÂ› Î·È ÌÂÙ·ÌÔÚÊˆıÂ› ÛÂ ‚Ï¿ÛÙÂ˜ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ

ÔÛfi Ô˘ ÂÓÛˆÌ·ÙÒÓÂÙ·È ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‰ÂÓ ¤¯Ô˘Ó ˘ÔÛÙÂ› ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂ-

ÙÈÎ‹ ÌÂÙ·ÌfiÚÊˆÛË. °ÂÓÈÎ¿ SI>5 ıÂˆÚÂ›Ù·È ˆ˜ ıÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌ-

ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ÌÈÙÔÁfiÓÔ ‹ ÂÈ‰ÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ (∂ÈÎ. 5).37

∏ Û˘Ì‚·ÙÈÎ‹ ·˘Ù‹ ÈÛÔÙÔÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ¤¯ÂÈ ·ÚÎÂÙ¿ ÌÂÈÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù·:

ÂÎÙfi˜ ÙÔ˘ fiÙÈ Â›Ó·È ¯ÚÔÓÔ‚fiÚ· Î·È Ë ÚÔÙ˘ÔÔ›ËÛ‹ ÙË˜ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ ‰˘-

ÛÎÔÏ›Â˜, Ë ÂÎÙ¤ÏÂÛ‹ ÙË˜ ÚÔ¸Ôı¤ÙÂÈ Î·Ù¿ÏÏËÏË ÂÚÁ·ÛÙËÚÈ·Î‹ ˘Ô‰ÔÌ‹

ÁÈ· ÙË ¯Ú‹ÛË Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙfiˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È Î·Ù¿ÏÏËÏÔ ÂÍÔÏÈÛÌfi ÁÈ· ÙË Ì¤-

ÙÚËÛË ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ Î·È Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· Á-Î¿ÌÂÚ·. ∂›ÛË˜,

ÌÂÈÔÓ¤ÎÙËÌ· ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ› Î·È ÙÔ ÁÂÁÔÓfi˜ fiÙÈ ‰ÂÓ ·Ú¤¯ÂÈ ÏËÚÔ-

ÊÔÚ›Â˜ ÁÈ· Î¿ÔÈÔ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ˘ÔÏËı˘ÛÌfi ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÏÏ¿ Û˘-

ÓÔÏÈÎ¿ ÁÈ· fiÏ· Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·. °È· ÙÔ˘˜ Ïfi-

ÁÔ˘˜ ·˘ÙÔ‡˜, Ù· ÙÂÏÂ˘Ù·›· ¯ÚfiÓÈ·, Á›ÓÂÙ·È ÚÔÛ¿ıÂÈ· Ó· ‚ÚÂıÂ› ÂÓ·ÏÏ·-

35

ÎÙÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¯ˆÚ›˜

ÙË ¯Ú‹ÛË Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡, Ô˘ Ó· ÛÙËÚ›˙ÂÙ·È ÛÙÈ˜ ÂÍÂÏ›ÍÂÈ˜ Ô˘ Û˘Ì-

‚·›ÓÔ˘Ó ÙfiÛÔ ÛÙÔ Â‰›Ô ÙË˜ ·Ú·ÁˆÁ‹˜ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Î·È

ÊıÔÚÈ˙Ô˘ÛÒÓ ¯ÚˆÛÙÈÎÒÓ fiÛÔ Î·È ÛÙËÓ ·Ó¿Ù˘ÍË ÙÂ¯ÓÈÎÒÓ fiˆ˜ Ë Î˘ÙÙ·-

ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Ô˘ ‰›ÓÔ˘Ó ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.1,2 ªÂ ÙÈ˜ ÙÂ¯ÓÈÎ¤˜ ·˘Ù¤˜ ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿-

ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· ÌÂ ‚¿ÛË ÙË ÁÓÒÛË fiÙÈ Ù· ÂÓÂÚÁÔ-

ÔÈËÌ¤Ó· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÔÓÙ·È ·fi ÙËÓ ÂÌÊ¿ÓÈÛË ÂÈ‰ÈÎÒÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ-

·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ (Ô˘ Ù·˘ÙÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË Î·Ù¿ÏÏËÏˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈ-

ÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ), ÔÏÏ·Ï·ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È (Ô˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÙ·È ¤ÌÌÂÛ· ÌÂ

ÙÔÓ ˘ÔÏÔÁÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙË Ê¿ÛË S ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡

Î‡ÎÏÔ˘) Î·È ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ (Ô˘ ÂÓÙÔ›˙ÔÓÙ·È ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ¿ ÌÂ

·ÓÙÈÎ˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜).

¢Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Δ· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·˙fiÌÂÓ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Â›Ó·È ÁÓˆÛÙfi

fiÙÈ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ¿ ÙÔ˘˜ ¤Ó· ·ÚÈıÌfi ÌÔÚ›ˆÓ Ù· «·ÓÙÈÁfiÓ· ‹

‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜» (fiˆ˜ ÙÔ CD25, CD69, CD71 Î·È HLA-DR) Ù·

ÔÔ›· Û˘Ó‹ıˆ˜ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ÂÏ¿¯ÈÛÙ· ‹ Î·ıfiÏÔ˘ ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›-

ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ ËÚÂÌ›·.38 Δ· ·ÓÙÈÁfiÓ· ·˘Ù¿ Â›Ó·È Â‡ÎÔÏÔ Ó· ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÙÔ‡Ó

36

∂ÈÎfiÓ· 5. (·) ∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜ ·-ÚÔ˘Û›· ‰È·ÊfiÚˆÓ Û˘ÁÎÂÓÙÚÒÛÂˆÓ Ê˘ÙÔ·ÈÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË˜ (ƒ∏∞). 6 ÒÚÂ˜ ÚÈÓ ÙÔ¤Ú·˜ ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÚÔÛÙ›ıÂÙ·È [3H]-TdR Î·È Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·ÈÛÂ ÎÚÔ‡ÛÂÈ˜ ·Ó¿ ÏÂÙfi (cpm, counts per minute). (‚) ∫ÈÓËÙÈÎ‹ ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÏÂÌ-ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÚÔ˘Û›· ‹ fi¯È ƒ∏∞.

60

50

40

30

20

00 0 1 2 3 4 651005010 200 500 1000

10

60

50

με PHA

χωρίς PHA

40

30

20

0

10

Eνσωμάτω

ση

[3Η

]-Τ

dR

(κρούσεις/

mix

× 1

0-3

)

Eνσωμάτω

ση

[3Η

]-Τ

dR

(κρούσεις/

mix

× 1

0-3

)

Συγκέντρωση PHA (μg/mL) Hμέρες μετά την έναρξη της καλλιέργειαςα β

ÌÂ ÙË Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË Î·Ù¿ÏÏËÏˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆ-

Ì¿ÙˆÓ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜.3,39

CD25

TÔ ÌfiÚÈÔ CD25 (anti-IL-2 Receptor) ÁÓˆÛÙfi Î·È ˆ˜ Tac ·ÓÙÈÁfiÓÔ ‹

p55 Â›Ó·È Ë ·-·Ï˘Û›‰· ÙÔ˘ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙË˜ IL-2. O ˘Ô‰Ô¯¤·˜ ÙË˜ IL-2 (IL-

2R) ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È ÛÙ· Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ÂÎÙÂıÂ› ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· (PHA,

Con-A, Pokeweed mitogen, Staphylococcus aureus), ÛÂ ÈÔ‡˜ (∏ΔLV-I,

HTLV-II, Epstein-Barr virus), Î·È ÛÂ ÌÈÎÚfiÙÂÚÔ ÔÛÔÛÙfi ÛÂ ÂÓÂÚÁÔÔÈË-

Ì¤Ó· μ Î‡ÙÙ·Ú· Î·È ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·. ™Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎÔ‡ ÂÚÈ-

ÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ··ÓÙ¿ ÛÂ ÔÛÔÛÙfi ÏÈÁfiÙÂÚÔ ·fi 5%.40,41

CD69

ΔÔ CD69 ÌfiÚÈÔ (ÁÓˆÛÙfi Î·È ˆ˜ ∞πª- Activation Inducer Molecule)

Â›Ó·È ÌÈ· Ù‡Ô˘ ππ ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎ‹ ÁÏ˘ÎÔÚˆÙÂ˝ÓË ÌÂ ¤Ó· ÂÍˆÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi Ù‡Ô˘-

C ÙÌ‹Ì· ÏÂÎÙ›ÓË˜.42 ∞ÔÙÂÏÂ› ÚÒÈÌÔ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ Î·È ÂÎÊÚ¿˙Â-

Ù·È ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ì¤Û· ÛÂ Ï›ÁÂ˜ ÒÚÂ˜ (2-3h) ÌÂÙ¿

·fi “in vitro” ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ·. £ÂˆÚÂ›Ù·È fiÙÈ Û˘ÌÌÂÙ¤¯ÂÈ

ÛÙËÓ ÌÂÙ¿‰ÔÛË ÌËÓ‡Ì·ÙÔ˜ (signal transduction) Î·Ù¿ Ù· ·Ú¯ÈÎ¿ ÛÙ¿‰È· ÙË˜

Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜. ¢ÂÓ ·ÓÈ¯ÓÂ‡ÂÙ·È ÛÙËÓ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙˆÓ ÂÚÈÛÛÔ-

Ù¤ÚˆÓ Î˘ÎÏÔÊÔÚÔ‡ÓÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜.43,44

CD71

ΔÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ CD71 Â›Ó·È ÌÈ· ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎ‹ ÁÏ˘ÎÔÚˆÙÂ˝ÓË (anti-Trans-

ferrin Receptor)5 ÂÈ‰ÈÎ‹ ÁÈ· ÙÔÓ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙË˜ ·ÓıÚÒÈÓË˜ ÙÚ·ÓÛÊÂÚ›ÓË˜.

∂ÎÊÚ¿˙ÂÙ·È ÛÂ ÔÏ‡ ÌÈÎÚfi ÔÛÔÛÙfi ÛÙ· Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘

‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ ËÚÂÌ›·, ÂÓÒ ÛÂ ÌÂÁ¿ÏÔ ÔÛÔÛÙfi ÛÂ Î‡ÙÙ·Ú· fiˆ˜ ÔÈ ÏÂÌÊÔ-

‚Ï¿ÛÙÂ˜ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙË G1 Î·È ÛÙËÓ S Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÌÂÙ¿

·fi ‰È¤ÁÂÚÛË ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹ ·ÏÏÔ·ÓÙÈÁfiÓ·.45

HLA-DR

ΔÔ HLA-DR ÌfiÚÈÔ Ô˘ Â›Ó·È ÌÈ· ‰È·ÌÂÌ‚Ú·ÓÈÎ‹ ÚˆÙÂ˝ÓË ·ÔÙÂÏÔ‡-

ÌÂÓË ·fi ‰‡Ô ˘ÔÌÔÓ¿‰Â˜ (· Î·È ‚) ·ÔÙÂÏÂ› ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÙÔ˘ ªÂ›˙ÔÓÔ˜ ™˘-

ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜ πÛÙÔÛ˘Ì‚·ÙfiÙËÙ·˜ (Major Histocompatibility Complex, MHC)

ÛÙÔÓ ¿ÓıÚˆÔ. ∂ÎÊÚ¿˙ÂÙ·È ÛÙ· ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·, ÛÙ· Ì·ÎÚÔÊ¿Á·, ÛÙ· μ ÏÂÌ-

ÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·, ÛÙ· μ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·, ÛÙ· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Δ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

Î·È ¡∫ Î‡ÙÙ·Ú·.46,47

37

∫˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ Î‡ÎÏÔ˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

T· ÂÚÈÛÛfiÙÂÚ· Δ-Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ

Ê¿ÛË ËÚÂÌ›·˜ (Go). H ·Ó·ÁÓÒÚÈÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ¤¯ÂÈ Û·Ó ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· Ó·

ÌÂÙ·‚Ô‡Ó ÛÂ ÌÈ· Î·Ù¿ÛÙ·ÛË ÂÙÔÈÌfiÙËÙ·˜ Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÌÂ ÙË ‰Ú¿ÛË ÙË˜

IL-2 ÛÙÔÓ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙË˜ ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È Ë ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ‰È·‰ÈÎ·Û›·˜ ÙÔ˘ Î˘Ù-

Ù·ÚÈÎÔ‡ ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÌÂ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi ÙÔ˘˜.

ΔÔ ¯ÚÔÓÈÎfi ‰È¿ÛÙËÌ· Î·Ù¿ ÙÔ ÔÔ›Ô ¤Ó· Î‡ÙÙ·ÚÔ ‰È·ÈÚÂ›Ù·È ÒÛÙÂ Ó·

ÚÔÎ‡„Ô˘Ó ‰‡Ô ı˘Á·ÙÚÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· ÔÓÔÌ¿˙ÂÙ·È Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ Î‡ÎÏÔ˜ ‹ Î‡-

ÎÏÔ˜ ˙ˆ‹˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ (∂ÈÎ. 6). ∞Ó Î·È Ô Î‡ÎÏÔ˜ ·˘Ùfi˜ Ô˘ÛÈ·ÛÙÈÎ¿ ·Ô-

ÙÂÏÂ› ÌÈ· Û˘ÓÂ¯‹ ‰È·‰Ô¯‹ ÁÂÁÔÓfiÙˆÓ, Ú·ÎÙÈÎ¿ ¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÂ ‰‡Ô ÙÌ‹Ì·Ù·,

ÛÙË ÌÂÛfiÊ·ÛË (interphase) Î·È ÛÙËÓ Ì›ÙˆÛË ‹ ÌÈÙˆÙÈÎ‹ ‰È·›ÚÂÛË (mito-

sis).2,48-49

∏ ÌÂÛfiÊ·ÛË ·ÚÂÌ‚¿ÏÂÙ·È ÛÂ ‰‡Ô ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÈÙˆÙÈÎ¤˜ ‰È·ÈÚ¤ÛÂÈ˜

Î·È ·ÓÙÈÚÔÛˆÂ‡ÂÈ ÙÔ 90-95% ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘. ∫·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ·

38

∂ÈÎfiÓ· 6. ∫˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ Î‡ÎÏÔ˜ (cell cycle) Î·È ‰È¿ÊÔÚÔÈ ·Ú¿ÁÔÓÙÂ˜ Ô˘ ÂÌÏ¤ÎÔÓÙ·È.

active

inactive

inactive

E2F

E2F

E2F

Gene targetP

Rb

Rb

p53

Rb

RCC1

Ran

PCNA DNA polymerase aThymidine kinase

BrdUCyclin A

cdk2

cdk2

Pyp3

cdc2

cdk2cdk4cdk5cdk6

Cyclin E

Cyclin C, D

Cyclin A, B

Go

Pim1

CAK

Nim1Cdr1

Wee1Mik1

Cdc25PTP

Histone H1

Nucleolin

Lamin

MAP

MG2

SG1 Ki 67

Cellcycle

DHFH, c-Myc, N-MycCyclin A, C6c2DNA pοlymerase aThymidine synthetaseThymidine kinase

ÙË˜ ÌÂÛfiÊ·ÛË˜ (ÂÚ›Ô˘ 12-24 ÒÚÂ˜) ‰ÂÓ ·Ú·ÙËÚÔ‡ÓÙ·È ¤ÓÙÔÓ· ÎÈÓËÙÈÎ¿

Ê·ÈÓfiÌÂÓ· ÛÙÔÓ ˘Ú‹Ó· ÁÈ’·˘Ùfi Î·È Ê·ÈÓÔÌÂÓÈÎ¿ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Ê·›ÓÂÙ·È fiÙÈ

·‰Ú·ÓÔ‡Ó. ™ÙËÓ Ú·ÁÌ·ÙÈÎfiÙËÙ· fiÌˆ˜ Û˘Ì‚·›ÓÔ˘Ó ¤ÓÙÔÓÂ˜ ÌÂÙ·‚ÔÏÈÎ¤˜

‰È·‰ÈÎ·Û›Â˜ fiˆ˜ ·‡ÍËÛË ÙÔ˘ fiÁÎÔ˘ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÁÈ·

ÙËÓ ÂÈÎÂ›ÌÂÓË ‰È·›ÚÂÛ‹ ÙÔ˘ (‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌfi˜ DNA, Û‡ÓıÂÛË mRNA, tRNA,

ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ, Î·.). ∏ ÌÂÛfiÊ·ÛË ˘Ô‰È·ÈÚÂ›Ù·È ÛÂ ÛÙ¿‰È·-Ê¿ÛÂÈ˜:

G0 - Ê¿ÛË (Gap 0, G0 cells ‹ resting cells ‹ quiescent cells): ¤Ó· Î‡Ù-

Ù·ÚÔ ÌÔÚÂ› Ó· ÂÁÎ·Ù·ÏÂ›„ÂÈ ÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi Î‡ÎÏÔ, Ó· ÛÙ·Ì·Ù‹ÛÂÈ Ó· ‰È·È-

ÚÂ›Ù·È Î·È Ó· ‚Ú›ÛÎÂÙ·È ÛÂ ÌÈ· Î·Ù¿ÛÙ·ÛË “ËÚÂÌ›·˜”. ∏ Î·Ù¿ÛÙ·ÛË ·˘Ù‹

·Ó·Ê¤ÚÂÙ·È ·ÔÎÏÂÈÛÙÈÎ¿ Î·È ÌfiÓÔ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi Î‡ÎÏÔ ÁÈ·Ù›

ÛÙËÓ Ú·ÁÌ·ÙÈfiÙËÙ· ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ ‰ÂÓ ÛÙ·Ì·Ù¿ Ó· ÂÈÙÂÏÂ› ÙÈ˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›Â˜

ÙÔ˘ ÛÙÔÓ ÔÚÁ·ÓÈÛÌfi. ªÔÚÂ› Ó· Â›Ó·È ÚÔÛˆÚÈÓ‹ ÔfiÙÂ ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ Ó· ÂÈ-

Û¤ÏıÂÈ ¿ÏÈ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi Î˘ÎÏÔ ‹ Ó· Â›Ó·È ÌfiÓÈÌË fiˆ˜ Û˘Ì‚·›ÓÂÈ ÛÂ

ÔÚÈÛÌ¤Ó· Â›‰Ë Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‰ÂÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È (¯. ÓÂ˘ÚÈÎ¿).

G1 - Ê¿ÛË (Gap 1): Â›Ó·È ÙÔ ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚÔ ÛÙ¿‰ÈÔ ÛÂ ‰È¿ÚÎÂÈ· (∼ 12

ÒÚÂ˜) fiÔ˘ ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ ÌÂÁ·ÏÒÓÂÈ ÛÂ Ì¤ÁÂıÔ˜ Î·È Á›ÓÂÙ·È Ë ‚ÈÔÛ‡ÓıÂÛË

mRNA, tRNA, ÚÈ‚ÔÛˆÌ¿ÙˆÓ Î·È ‰ÔÌÈÎÒÓ Î·È ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎÒÓ ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ

(¯. ÈÛÙÔÓÒÓ, ÙÔ˘ÌÔ˘Ï›ÓË˜) ··Ú·›ÙËÙˆÓ ÁÈ· ÙËÓ Û‡ÓıÂÛË DNA Î·È ÙÔÓ

ÌÂÙ¤ÂÈÙ· ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌfi ÙÔ˘.50,51 ŒÓ·˜ ÛËÌ·ÓÙÈÎfi˜ ÌË¯·ÓÈÛÌfi˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÙÔ˘

Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÂÓÂÚÁÔÔÈÂ›Ù·È Î·Ù¿ ÙËÓ ÂÚ›Ô‰Ô ·˘Ù‹ (G1 check-

point) ÁÈ· Ó· ‰È·ÛÊ·Ï‹ÛÂÈ fiÙÈ fiÏ· Â›Ó·È ¤ÙÔÈÌ· ÁÈ· ÙË Û‡ÓıÂÛË ÙÔ˘ DNA.52

S - Ê¿ÛË (Synthesis): Î·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ·˘Ù‹˜ (6-8 ÒÚÂ˜) Á›-

ÓÂÙ·È Ô ·˘ÙÔ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌfi˜ ÙÔ˘ ÁÂÓÂÙÈÎÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡ (DNA replication) ÔfiÙÂ

ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ ‰ÈÏ·ÛÈ¿˙ÂÈ ÙËÓ ÔÛfiÙËÙ· ÙÔ˘ ÁÂÓÂÙÈÎÔ‡ ÙÔ˘ ˘ÏÈÎÔ‡ Î·È Ù· ‰‡Ô

·ÓÙ›ÁÚ·Ê· Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ¤¯Ô˘Ó ·ÓÔÌÔÈfiÙ˘Â˜ ÁÂÓÂÙÈÎ¤˜ ÏËÚÔÊÔ-

Ú›Â˜.2,53

G2 (Gap 2): ·ÔÙÂÏÂ› ÌÂÙ·‚·ÙÈÎ‹ ÂÚ›Ô‰Ô (2,5-4 ÒÚÂ˜) ÚÈÓ ÙËÓ

¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ÌÈÙˆÙÈÎ‹˜ ‰È·›ÚÂÛË˜ fiÔ˘ ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ Û˘ÓÂ¯›˙ÂÈ Ó· ·˘Í¿ÓÂÙ·È

Î·È Ó· ·Ú¿ÁÂÈ ÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ ÂÓÒ Ù· ÌÈÙÔ¯fiÓ‰ÚÈ· Î·È ÙÔ ÎÂÓÙÚÔÛˆÌ¿ÙÈÔ ‰È·È-

ÚÔ‡ÓÙ·È. À¿Ú¯ÂÈ Î·È ¤Ó· ÛËÌÂ›Ô ÂÏ¤Á¯Ô˘ (G2 checkpoint) Ô˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›-

˙ÂÈ ·Ó ¤¯ÂÈ ÔÏÔÎÏËÚˆıÂ› Ô ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌfi˜ ÙÔ˘ ÁÂÓÂÙÈÎÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡ ÒÛÙÂ ÙÔ

Î‡ÙÙ·ÚÔ Ó· Â›Ó·È ¤ÙÔÈÌÔ Ó· ÂÈÛ¤ÏÂÈ ÛÙË Ì›ÙˆÛË.51

∏ Ì›ÙˆÛË ·ÔÙÂÏÂ› ÙÔ ÈÔ Û‡ÓÙÔÌÔ (0,5 ÒÚ·) ÙÌ‹Ì· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡

Î‡ÎÏÔ˘. ∫·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ Ì›ÙˆÛË˜ ·Ú·ÙËÚÔ‡ÓÙ·È ÂÓÙ˘ˆÛÈ·Î¤˜ ·Ï-

Ï·Á¤˜ Ô˘ Ô‰ËÁÔ‡Ó ÙÂÏÈÎ¿ ÛÙË ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ‰‡Ô ·ÓÔÌÔÈfiÙ˘ˆÓ ÌÂÙ·Í‡

ÙÔ˘˜ –·ÏÏ¿ Î·È ÌÂ ÙÔ ÌËÙÚÈÎfi– ı˘Á·ÙÚÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ. ∞˘Ùfi ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È

ÌÂ ‰‡Ô ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ‰È·‰ÈÎ·Û›Â˜, ÙËÓ ˘ÚËÓÈÎ‹ ‰È·›ÚÂÛË (nuclear division)

39

Î·È ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎ‹ ‰È·›ÚÂÛË ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓËÛË (cytoplasmic divi-

sion ‹ cytokinesis).

∏ ˘ÚËÓÈÎ‹ ‰È·›ÚÂÛË ¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÙ· ÂÍ‹˜ ÛÙ¿‰È·: ÙËÓ ÚfiÊ·ÛË, ÚÔ-

ÌÂÙ¿Ê·ÛË, ÌÂÙ¿Ê·ÛË, ·Ó¿Ê·ÛË, ÙÂÏfiÊ·ÛË.54

∫·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ ÚfiÊ·ÛË˜ Ù· ÈÓ›‰È· ÙË˜ ¯ÚˆÌ·Ù›ÓË˜ Û˘Ì˘ÎÒ-

ÓÔÓÙ·È Î·È Û¯ËÌ·Ù›˙Ô˘Ó Ù· ¯ÚˆÌÔÛÒÌ·Ù·. ∫¿ıÂ ¯ÚˆÌfiÛˆÌ· ÙÔ˘ ˘Ú‹Ó·

·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ‰‡Ô ÁÂÓÂÙÈÎ¿ fiÌÔÈÂ˜ ·‰ÂÏÊ¤˜ ¯ÚˆÌ·Ù›‰Â˜ Ë Î·ıÂÌ›· ·fi

ÙÈ˜ ÔÔ›Â˜ ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ¤Ó· ‰›ÎÏˆÓÔ ÌfiÚÈÔ DNA ˆ˜ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙÔ˘

·˘ÙÔ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙÔ˘ ÁÂÓÂÙÈÎÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡ Ô˘ ¤ÁÈÓÂ Î·Ù¿ ÙË ÌÂÛfiÊ·ÛË.

ŒÍˆ ·fi ÙÔÓ ˘Ú‹Ó· Û˘Ó·ÚÌÔÏÔÁÂ›Ù·È Ë ÌÈÙˆÙÈÎ‹ ¿ÙÚ·ÎÙÔ˜ ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ·

ÙÔ˘ ÎÂÓÙÚÔÛˆÌ·Ù›Ô˘ Ô˘ ¤¯ÂÈ ‹‰Ë ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÙÂ› ·fi ÙË ÌÂÛfiÊ·ÛË.

™ÙË ÚÔÌÂÙ¿Ê·ÛË ·ÔÈÎÔ‰ÔÌÂ›Ù·È Ô ˘ÚËÓÈÎfi˜ Ê¿ÎÂÏÔ˜ Î·È Ô ˘ÚË-

Ó›ÛÎÔ˜, ÁÂÁÔÓfi˜ Ô˘ ÂÈÙÚ¤ÂÈ ÛÙ· ¯ÚˆÌÔÛÒÌ·Ù· Ó· ¤ÚıÔ˘Ó ÛÂ Â·Ê‹ Î·È

Ó· ÚÔÛ‰ÂıÔ‡Ó ÌÂ ÙÔ˘˜ ÌÈÎÚÔÛˆÏËÓ›ÛÎÔ˘˜ ÙË˜ ÌÈÙˆÙÈÎ‹˜ ·ÙÚ¿ÎÙÔ˘ Ì¤Ûˆ

ÙˆÓ ÎÈÓËÙÔ¯ÒÚˆÓ (ÎÂÓÙÚÔÌÂÚÈ‰›ˆÓ) ÙÔ˘˜ Î·È Ó· ÌÂÙ·ÎÈÓËıÔ‡Ó.

∫·Ù¿ ÙË ÌÂÙ¿Ê·ÛË Ù· ¯ÚˆÌÔÛÒÌ·Ù· ¤¯Ô˘Ó ÙÔ Ì¤ÁÈÛÙÔ ‚·ıÌfi Û˘Ì‡-

ÎÓˆÛË˜ Î·È ·Ú·Ù¿ÛÛÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ÈÛËÌÂÚÈÓfi ÙË˜ ·ÙÚ¿ÎÙÔ˘. ™ÙË Ê¿ÛË ·˘Ù‹

˘¿Ú¯ÂÈ ¤Ó·˜ ÌË¯·ÓÈÛÌfi˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘ fiˆ˜ Î·È ÛÙÈ˜ G1 Î·È G2 Ê¿ÛÂÈ˜ (meta-

phase checkpoint) ÁÈ· Ó· ‰È·ÛÊ·Ï›ÛÂÈ ·Ó ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ Â›Ó·È ¤ÙÔÈÌÔ ÁÈ· ‰È·›-

ÚÂÛË.55

™ÙËÓ ·Ó¿Ê·ÛË ÂÈÙÂÏÂ›Ù·È Ô Û˘Á¯ÚÔÓÈÛÌ¤ÓÔ˜ ‰È·¯ˆÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ˙Â˘Á·-

ÚˆÌ¤ÓˆÓ ¯ÚˆÌ·Ù›‰ˆÓ ÒÛÙÂ Ó· Û¯ËÌ·ÙÈÛÙÔ‡Ó ‰‡Ô ı˘Á·ÙÚÈÎ¿ ¯ÚˆÌÔÛÒÌ·-

Ù·. ∫¿ıÂ ¯ÚˆÌ·Ù›‰· ¤ÏÎÂÙ·È ÚÔ˜ ÙÔÓ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ô fiÏÔ ÙË˜ ·ÙÚ¿ÎÙÚÔ˘ (ÂÏ-

ÎÙÈÎ¤˜ - ·ˆÛÙÈÎ¤˜ ‰˘Ó¿ÌÂÈ˜) Ì¤Ûˆ ÌÈ·˜ ‰È·‰ÈÎ·Û›·˜ ·ÔÔÏ˘ÌÂÚÈÛÌÔ‡

ÙË˜ ÙÔ˘ÌÔ˘Ï›ÓË˜ Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ› ÙË ‚·ÛÈÎ‹ ‰ÔÌÈÎ‹ ÌÔÓ¿‰· ÙˆÓ ÌÈÎÚÔÛˆÏË-

Ó›ÛÎˆÓ ÙË˜ ÌÈÙˆÙÈÎ‹˜ ·ÙÚ¿ÎÙÔ˘.

∫·Ù¿ ÙËÓ ÙÂÏfiÊ·ÛË ÔÈ ‰‡Ô ÔÌ¿‰Â˜ ÙˆÓ ¯ÚˆÌÔÛˆÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ¤¯Ô˘Ó

ÚÔÎ‡„ÂÈ ÊÙ¿ÓÔ˘Ó ÛÙÔ˘˜ fiÏÔ˘˜ ÙË˜ ·ÙÚ¿ÎÙÔ˘ Î·È Á‡Úˆ ÙÔ˘˜ ·Ú¯›˙ÂÈ Ë

Â·Ó·Û‡ÛÙ·ÛË ÙˆÓ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ÂÚÈ‚ÏËÌ¿ÙˆÓ ÂÓÒ ÍÂÎÈÓ¿ÂÈ Ë ‰È·‰ÈÎ·Û›·

ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎ‹˜ ‰È·›ÚÂÛË˜ ÌÂ ÙË ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· Û˘ÛÙ·ÏÙÔ‡ ‰·ÎÙ˘Ï›Ô˘

Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ·ÎÙ›ÓË Î·È Ì˘ÔÛ›ÓË. ªÂ ÙËÓ ÂÚ›ÛÊ˘ÍË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘

Ú·ÁÌ·ÙÔÔÈÂ›Ù·È ‰È·›ÚÂÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ¿ÛÌ·ÙÔ˜ Î·È Ë ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ‰‡Ô

ı˘Á·ÙÚÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÙÔ ‰ÈÎfi ÙÔ˘ ˘Ú‹Ó· ÙÔ Î·ı¤Ó· (ÛÙ¿‰ÈÔ Î˘ÙÙ·ÚÔ-

Î›ÓËÛË˜).54

ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘

ΔÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ ¤¯ÂÈ ·Ó·Ù‡ÍÂÈ ÂÓÙ˘ˆÛÈ·ÎÔ‡˜ ÌË¯·ÓÈÛÌÔ‡˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÁÈ·

Ó· ·ÔÊÂ‡ÁÂÙ·È Ë ÌÂÙ·‚›‚·ÛË ÛÙÔ ÂfiÌÂÓÔ ÛÙ¿‰ÈÔ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘

40

¯ˆÚ›˜ ÂÈÙ˘¯‹ ÔÏÔÎÏ‹ÚˆÛË ÙË˜ ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓË˜ Ê¿ÛË˜ Ô˘ ·Ó·fiÊÂ˘ÎÙ· ı·

Ô‰ËÁÔ‡ÛÂ ÛÙË ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ÌË ‚ÈÒÛÈÌˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.2

ΔÔ Û‡ÛÙËÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ÌÈ· ÛÂÈÚ¿ «ÌÔÚÈ·-

ÎÒÓ ÊÚ¤ÓˆÓ» (cell cycle control genes-CDC genes, cell cycle regulatory

proteins) Ù· ÔÔ›· ÌÔÚÔ‡Ó Ó· ÛÙ·Ì·ÙÔ‡Ó ÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi Î‡ÎÏÔ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚ·

ÎÔÌ‚ÈÎ¿ - Î·ıÔÚÈÛÙÈÎ¿ ÛËÌÂ›· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (checkpoints).56,57 μ·Û›˙ÂÙ·È ÛÙËÓ

Î˘ÎÏÈÎ‹ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÂÓ˙‡ÌˆÓ fiˆ˜ ÔÈ ÎÈÓ¿ÛÂ˜ ÛÂÚ›ÓË˜/ıÚÂÔÓ›ÓË˜ Ô˘ Î·-

Ù·Ï‡Ô˘Ó ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÊˆÛÊÔÚÈÎÒÓ ÔÌ¿‰ˆÓ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ ÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ Î·Ù¿

ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘. OÈ ÎÈÓ¿ÛÂ˜ ·˘Ù¤˜, ÂÓÒ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È Û˘-

Ó¤¯ÂÈ· Ì¤Û· ÛÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ Â›Ó·È ·ÓÂÓÂÚÁ¤˜ Î·È ÂÓÂÚÁÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÌfiÓÔ fiÙ·Ó

Û˘Ó‰ÂıÔ‡Ó ÌÂ ÌÈ· ÂÍÂÈ‰ÈÎÂ˘Ì¤ÓË ÔÌ¿‰· ÚˆÙÂ˝ÓÒÓ ÙÈ˜ Î˘ÎÏ›ÓÂ˜ (G1, S, M

Î˘ÎÏ›ÓÂ˜) Ô˘ ÂÌÊ·Ó›˙ÔÓÙ·È ÛÂ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· ÛËÌÂ›· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡-

ÎÏÔ˘ Î·È Î·ÙfiÈÓ ·ÔÈÎÔ‰ÔÌÔ‡ÓÙ·È, ÁÈ’ ·˘Ùfi Î·È ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Î˘ÎÏÈ-

ÓÔÂÍ·ÚÙÒÌÂÓÂ˜ ÎÈÓ¿ÛÂ˜ (Cyclins-dependent kinases, CDKs).58,59 ∂ÈÈÏ¤-

ÔÓ, ˘¿Ú¯Ô˘Ó Î·È ÔÈ ·Ó·ÛÙÔÏÂ›˜ ÙˆÓ Î˘ÎÏÈÓÔÂÍ·ÚÙÒÌÂÓˆÓ ÎÈÓ·ÛÒÓ (Cy-

clins-dependent kinases inhibitors, CKI). ∏ ÌÂÙ¿‚·ÛË ÏÔÈfiÓ ·fi ÌÈ· Ê¿-

ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÛÂ Ì›· ¿ÏÏË Á›ÓÂÙ·È ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ ·ÚÔ˘Û›· ÌÈ·˜

Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓË˜ Î˘ÎÏ›ÓË˜ Ô˘ ÂÓÂÚÁÔÔÈÂ› Ì›· Î˘ÎÏÈÓÔÂÍ·ÚÙÒÌÂÓË ÎÈÓ¿ÛË

Ë ÔÔ›· ÌÂ ÙË ÛÂÈÚ¿ ÙË˜ Ì¤Ûˆ ÙË˜ ÊˆÛÊÔÚ˘Ï›ˆÛË˜ ÌÈ·˜ ÛÂÈÚ¿˜ ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ

ı· ÌÂÙ·‚È‚¿ÛÂÈ ÙËÓ ÏËÚÔÊÔÚ›·.60

™ÙÔ Ù¤ÏÔ˜ ÙË˜ G1 Ê¿ÛË˜ ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È ÙÔ Ì¤ÁÂıÔ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È Ô ·˘-

ÙÔ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌfi˜ ÙÔ˘ DNA ‰ÂÓ ÍÂÎÈÓ¿ ·Ó ‰ÂÓ ÂÎÏËÚˆıÂ› ·˘Ùfi ÙÔ ÎÚÈÙ‹-

ÚÈÔ.52 OÈ Î˘ÎÏ›ÓÂ˜ ÙË˜ G1 Ê¿ÛË˜ (D-Î˘ÎÏ›ÓÂ˜)61 ÛÙ· Δ Î‡ÙÙ·Ú· Â¿ÁÔÓÙ·È

Ì¤Ûˆ ÙÔ˘ TCR Î·È ·ÔÙÂÏÔ‡Ó “·ÈÛıËÙ‹ÚÈÔ” ÙˆÓ ÂÍˆÁÂÓÒÓ ·˘ÍËÙÈÎÒÓ ·-

Ú·ÁfiÓÙˆÓ (¯. ÌÈÙÔÁfiÓ·).62 ΔÔ ¤Ú·ÛÌ· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ ·fi ÙÔ Î·ıÔÚÈÛÙÈÎfi

·˘Ùfi ÛËÌÂ›Ô ÂÏ¤Á¯Ô˘ (G1/S cell cycle checkpoint) ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È ·fi ÙËÓ D-Î˘-

ÎÏ›ÓË, ÙÈ˜ CDK2,4,6 Î·È ÙÔ˘˜ ·Ó·ÛÙÔÏÂ›˜ ÙÔ˘˜ (∂ÈÎ. 6, 7). ∞ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, ÛÙÔ

Ù¤ÏÔ˜ ÙË˜ Ê¿ÛË˜ S ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È Ë ÔÏÔÎÏ‹ÚˆÛË ÙË˜ Û‡ÓıÂÛË˜ ÙÔ˘ DNA ÁÈ· Ó·

·Ú¯›ÛÂÈ Ë G2 Ê¿ÛË (S/G2 cell cycle checkpoint). ∏ Î˘ÎÏ›ÓË Ô˘ Ô‰ËÁÂ› ÙÔ

Î‡ÙÙ·ÚÔ Î·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ S Ê¿ÛË˜ Â›Ó·È Ë Î˘ÎÏ›ÓË ∞ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È

ÌÂÙ¿ ·fi ÙË Û‡Ó‰ÂÛË ÙˆÓ ÌÔÚ›ˆÓ ÚÔÛÎfiÏÏËÛË˜ ÔfiÙÂ Ë ÚfiÔ‰Ô˜ ÙÔ˘ Î˘Ù-

Ù·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÂÍ·ÚÙ¿Ù·È ·fi ÙËÓ ÛˆÛÙ‹ Â·Ê‹ ∞PC/Δ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ (∂ÈÎ. 6,

7). ŒÙÛÈ, ÂÓÒ Ô TcR Ô‰ËÁÂ› ÌÂ ÙËÓ Â·ÁˆÁ‹ ÙˆÓ D-Î˘ÎÏÈÓÒÓ ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ ÛÂ

ÂÙÔÈÌfiÙËÙ· ÁÈ· ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi, ÙÔ ÙÂÏÈÎfi Û‹Ì· ‰›ÓÂÙ·È ·fi ÙËÓ ‰Ú¿ÛË

ÙË˜ IL-2 ÛÙÔÓ ˘Ô‰Ô¯¤· ÙË˜ Ô˘ ¤¯ÂÈ Û·Ó ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙËÓ ÂÏ¿ÙÙˆÛË ÙÔ˘

p27 Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ› ¤Ó·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎfi ·Ó·ÛÙÔÏ¤· ÙˆÓ D-Î˘ÎÏÈÓÒÓ, ÒÛÙÂ Ó·

ÂÈÙÚ¤ÂÙ·È Ë ÔÌ·Ï‹ ÌÂÙ¿‚·ÛË ÛÙËÓ S Ê¿ÛË Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· Ë ÂÚ¿ÙˆÛË

ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘.63

41

∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜

OÈ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎÔ‡˜ ÌÂÛÔÏ·‚ËÙ¤˜ ÙË˜ Δ Î˘ÙÙ·ÚÔ-

ÂÍ·ÚÙÒÌÂÓË˜ ·ÓÔÛÈ·Î‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜ ÛÙ· ‰È¿ÊÔÚ· ÚˆÙÂ˚ÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ·.

™˘ÓÂÒ˜, ÙÔ Â›‰Ô˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È Î·Ù¿ ÙËÓ ÂÍ¤ÏÈÍË

ÌÈ·˜ ·ÓÔÛÈ·Î‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜, Î·ıÔÚ›˙ÂÈ ÙfiÛÔ ÙË Ê‡ÛË fiÛÔ Î·È ÙËÓ ·ÔÙÂÏÂ-

ÛÌ·ÙÈÎfiÙËÙ· ÙË˜ ·¿ÓÙËÛË˜ ·˘Ù‹˜. ∏ Ì¤ÙÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ‰Â›¯ÓÂÈ

¤ÌÌÂÛ· ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÙˆÓ ·ÓÔÛÔ˚Î·ÓÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ÂÓÂÚÁÔÔÈËıÔ‡Ó Î·È

Ó· Á›ÓÔ˘Ó ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎÒ˜ ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú·.64,65 ∏ ·Ó¿Ù˘ÍË Û‡Á¯ÚÔÓˆÓ ÙÂ-

¯ÓÈÎÒÓ ÁÈ· ÙËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ (RT-PCR, Northen Blot, In

situ ˘‚ÚÈ‰ÈÛÌfi˜, Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜) Û˘Ó¤‚·ÏÂ ÛÙËÓ ÚÔÛ¿ıÂÈ· ‰È·Û·-

Ê‹ÓÈÛË˜ ÙÔ˘ ‚ÈÔÏÔÁÈÎÔ‡ ÙÔ˘˜ ÚfiÏÔ˘.7-8,66

Ÿˆ˜ ·Ó·Ê¤ÚıËÎÂ, ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ‰‡Ô Ù‡ÔÈ ‰Ú·ÛÙÈÎÒÓ ‚ÔËıËÙÈÎÒÓ Δ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ‚¿ÛË ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó, Ù· Δ∏1 Î·È Ù· Δ∏2

(¶›Ó. 4).12,67

Δ· Δ∏1-Î‡ÙÙ·Ú· ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2, IFN-Á Î·È TNF-‚ Ô˘ ÚÔ¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜

ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›Â˜ ÙˆÓ Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ Î·È ¿ÏÏˆÓ Ê·ÁÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·

Î·Ù·ÛÙÚÔÊ‹ ·ıÔÁfiÓˆÓ, ·ÓÙ›‰Ú·ÛË Ù‡Ô˘ 1). H πL-2 ‰Ú· ˆ˜ ·˘ÙÔÎÚÈÓ‹˜

·˘ÍËÙÈÎfi˜ ·Ú¿ÁÔÓÙ·˜ Î·È ‰ÈÂÁÂ›ÚÂÈ ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi Î·È ÙË ‰È·ÊÔÚÔ-

Ô›ËÛË ÙˆÓ CD8+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (CTLs).68,69

42

∂ÈÎfiÓ· 7. ™Ù¿‰È· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ Î·È ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÛÙÔΔ Î‡ÙÙ·ÚÔ.

Kυκλίνη Α,Β+ CDΚ2

Kυκλίνη Α+ CDΚ2

Kυκλίνη D+ CDΚ2/4/6

Μίτωση

MεσόφασηKυκλίνη E+ CDΚ2

Πρόφαση

Μετάφαση

Ανάφαση

Τελόφαση

G2

S

G1

43

∫˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÙˆÓ Δ∏1 Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

πL-2: Î‡ÚÈÔ˜ ·˘ÍËÙÈÎfi˜ ·Ú¿ÁÔÓÙ·˜ ÙˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ, ‰ÈÂÁÂ›ÚÂÈ ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi ÙÔ˘˜ (ÌÂÙ¿-

ÙˆÛË ·fi ÙËÓ G0/G1 ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈ-

ÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘).

¶·Ú¿ÁÂÙ·È Î˘Ú›ˆ˜ ·fi Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Δ-

Î‡ÙÙ·Ú· Î·È ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ ·fi Ù· ÂÓÂÚÁÔ-

ÔÈËÌ¤Ó· μ-Î‡ÙÙ·Ú·

∂¿ÁÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ ¿ÏÏˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ, Î˘-

Ú›ˆ˜ IFN-Á Î·È IL-1.

∞˘Í¿ÓÂÈ ÙË ‰Ú·ÛÙËÚÈfiÙËÙ· ÙˆÓ ¡∫-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È

ÙˆÓ Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ.

IFN-Á: ¶·Ú¿ÁÂÙ·È ·fi Ù· CD4+ T-Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘

ÂÎÎÚ›ÓÔ˘Ó IL-2, ·fi fiÏ· Û¯Â‰fiÓ Ù· CD8+ T-Î‡Ù-

Ù·Ú· Î·È ÛÂ ÌÈÎÚfi ÔÛÔÛÙfi ·fi Ù· ¡∫-Î‡ÙÙ·Ú·.

∞Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙËÓ ·Ó··Ú·ÁˆÁ‹ ÙˆÓ ÈÒÓ.

∞ÔÙÂÏÂ› ÎÂÓÙÚÈÎfi Ú˘ıÌÈÛÙ‹ ÙfiÛÔ ÙË˜ ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹˜

ÊÏÂÁÌÔÓ‹˜, fiÛÔ Î·È ÙË˜ ÂÈ‰ÈÎ‹˜ ·ÓÔÛÈ·Î‹˜ ·¿-

ÓÙËÛË˜.

∂¿ÁÂÈ ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ ·fi

Ù· Δ-Î‡ÙÙ·Ú·.

¶ÚÔÎ·ÏÂ› ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ ÂÓ‰ÔıËÏÈ·ÎÒÓ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ Î·È Â¿ÁÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ ÌÔÚ›ˆÓ ÚÔ-

ÛÎfiÏÏËÛË˜ (ICAM-1) ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÔ˘˜ Ù‡Ô˘˜ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ. ¶ÚÔ¿ÁÂÈ ÙËÓ ÚÔÛÎfiÏÏËÛË ÙˆÓ CD4+ Δ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ÂÓ‰Ôı‹ÏÈÔ Î·È ÂÈÊ¤ÚÂÈ ÌÔÚÊÔÏÔ-

ÁÈÎ¤˜ ·ÏÏÔÈÒÛÂÈ˜ Ô˘ ÂÈÙÚ¤Ô˘Ó ÙËÓ ÂÍ·ÁÁÂ›ˆ-

ÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

IL-12: ¢ÈÂÁÂ›ÚÂÈ ÙË ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙˆÓ CD4+Δ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‰ÂÓ ¤¯Ô˘Ó ¤ÏıÂÈ ÛÂ Â·Ê‹ ÌÂ ÙÔ

·ÓÙÈÁfiÓÔ ÛÂ Δ∏1-Î‡ÙÙ·Ú· Î·È ÙˆÓ CD8+T-Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ÛÂ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎ¿ ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ ÒÚÈÌ· Î‡ÙÙ·Ú·.

¢ÈÂÁÂ›ÚÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ IFN-Á Î·È ·ÔÙÂÏÂ› ÙÔÓ

ÈÛ¯˘ÚfiÙÂÚÔ ‰ÈÂÁ¤ÚÙË ÙˆÓ ¡∫-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

IL-15: ÎÔÈÓ‹ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›· ÌÂ ÙËÓ IL-2

IL-18: Â·ÁˆÁÈÎfi˜ ·Ú¿ÁÔÓÙ·˜ ÙË˜ IFN-Á

∂¿ÁÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ù‡Ô˘ Δ∏1.

∫˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÙˆÓ Δ∏2 Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

πL-4: ∞˘Í¿ÓÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ Δ∏2-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

μ·ÛÈÎ‹ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›· ÙË˜ Â›Ó·È Ë Ú‡ıÌÈÛË ÙˆÓ ·Ï-

ÏÂÚÁÈÎÒÓ ·ÓÙÈ‰Ú¿ÛÂˆÓ.

∂¿ÁÂÈ ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË, ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi

Î·È ÙËÓ ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙˆÓ μ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÚÔ-

Î·ÏÂ› ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ IgE.

∞Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ.

IL-5: ∞˘ÍËÙÈÎfi˜ ·Ú¿ÁÔÓÙ·˜ ÙˆÓ ËˆÛÈÓÔÊ›ÏˆÓ.

¢ÈÂÁÂ›ÚÂÈ ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi, ÙË ‰È·ÊÔÚÔÔ›Ë-

ÛË Î·È ÙËÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË ÙˆÓ ËˆÛÈÓÔÊ›ÏˆÓ.

IL-6: ·Ú¿ÁÔÓÙ·˜ ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ μ-Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ.

¢ÈÂÁÂ›ÚÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ ÔÍÂ›·˜ Ê¿-

ÛË˜.

IL-10: ∞Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ

(TNF, IL-1, IL-12, ¯ËÌÂÈÔÎ›ÓÂ˜) ·fi Ù· Ì·ÎÚÔ-

Ê¿Á·. πÛ¯˘Úfi˜ ·Ó·ÛÙÔÏ¤·˜ ÙˆÓ Δ∏1-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Î·È ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÒÓ ÙˆÓ Ì·ÎÚÔÊ¿ÁˆÓ Î·-

Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ.

¶›Ó·Î·˜ 4. ∫˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ·fi Ù· ‚ÔËıËÙÈÎ¿ CD4+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ù‡Ô˘ Δ∏1 Î·È Δ∏2

Δ· Δ∏2 Î‡ÙÙ·Ú· ÂÎÎÚ›ÓÔ˘Ó IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 Î·È IL-13 Ô˘

‰ÚÔ‡Ó ˆ˜ ¯ËÌÂÈÔÙ·ÎÙÈÎÔ› ·Ú¿ÁÔÓÙÂ˜ ÙˆÓ μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ, ÙˆÓ ÛÈÙÂ˘ÙÈÎÒÓ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ Î·È ÙˆÓ ‚·ÛÂfiÊÈÏˆÓ Î·È ÚÔ¿ÁÔ˘Ó ÙËÓ ˆÚ›Ì·ÓÛË Î·È ÙË ‰È·ÊÔÚÔ-

Ô›ËÛË ·˘ÙÒÓ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙ· ÛËÌÂ›· ÙË˜ ·ÓÔÛÈ·Î‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜ (·ÓÙ›-

‰Ú·ÛË Ù‡Ô˘ 2). ∂ÈÏ¤ÔÓ, Ë IL-4 ÚÔ¿ÁÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ ÙË˜ IgE ·ÓÔÛÔ-

ÛÊ·ÈÚ›ÓË˜, ÂÓÒ Ë IL-10 ·Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ IFN-Á Î¿ÓÔÓÙ·˜ Ù· Δ∏2

ÈÔ ‰Ú·ÛÙÈÎ¿ ÛÙ· ÔÏ˘Î˘ÙÙ·ÚÈÎ¿ ·Ú¿ÛÈÙ·.68,69

Δ· Δ∏1 Î·È Δ∏2 Î‡ÙÙ·Ú· ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ¤Ó· ÎÔÈÓfi Úfi‰ÚÔÌÔ

Δ∏0 Î‡ÙÙ·ÚÔ Ô˘ ¤¯ÂÈ ÙËÓ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· Ó· ÂÎÎÚ›ÓÂÈ ÙfiÛÔ IFN-Á fiÛÔ Î·È IL-4.

H ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Δ∏0 Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ ÚÔ˜ ÙÔÓ ¤Ó· ‹ ÙÔÓ ¿ÏÏÔ ˘ÔÏËı˘-

ÛÌfi ÂÍ·ÚÙ¿Ù·È ·fi ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ˘¿Ú¯Ô˘Ó ÛÙÔ ÂÚÈ‚¿ÏÏÔÓ. ∏ IL-

12 ÚÔ¿ÁÂÈ ÙËÓ ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙˆÓ ·Úı¤ÓˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ¤Ú¯ÔÓÙ·È

ÛÂ Â·Ê‹ ÌÂ ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÚÔ˜ Δ∏1 Î‡ÙÙ·Ú·, ÂÓÒ Ë IL-4 ÚÔ¿ÁÂÈ ÙËÓ ·-

Ú·ÁˆÁ‹ Δ∏2 Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.70 ∂ÈÏ¤ÔÓ, ÔÈ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ·fi

ÙÔ˘˜ ‰‡Ô ˘ÔÏËı˘ÛÌÔ‡˜ ÙˆÓ ‚ÔËıËÙÈÎÒÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÚÔÎ·ÏÔ‡Ó ·Ó·ÛÙÔ-

Ï‹ ÙË˜ ·Ó¿Ù˘ÍË˜ ÙÔ˘ ¿ÏÏÔ˘ ÏËı˘ÛÌÔ‡. ∏ IFN-Á Ô˘ ·Ú¿ÁÂÙ·È ·fi ·fi

Ù· Δ∏1 Î‡ÙÙ·Ú· ·Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi Î·È ÙË ‰Ú¿ÛË ÙˆÓ Δ∏2

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ, ÂÓÒ Ë IL-4 Ô˘ ·Ú¿ÁÂÙ·È ·fi Ù· Δ∏2 Î‡ÙÙ·Ú· ·Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÈ ÙËÓ

·Ó¿Ù˘ÍË ÙˆÓ Δ∏1 Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÒÛÙÂ ÙÂÏÈÎ¿ Î·Ù¿ ÙËÓ ·ÓÔÛÈ·Î‹ ·¿ÓÙËÛË Ó·

ÂÈÎÚ·ÙÂ› ¤Ó·˜ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ˜ ˘ÔÏËı˘ÛÌfi˜ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (∂ÈÎ. 8).71,72

44

∂ÈÎfiÓ· 8. ™¯ËÌ·ÙÈÎ‹ ·ÂÈÎfiÓËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ ÂÎÎÚ›ÓÔ˘Ó Ù· ‚ÔËıËÙÈÎ¿Δ Î‡ÙÙ·Ú·. º·›ÓÂÙ·È fiÙÈ Ë IL-12 ÚÔÎ·ÏÂ› ÙË ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÙˆÓ Δ∏1 Î˘ÙÙ¿ÚˆÓÔ˘ Â›Ó·È ˘¤˘ı˘Ó· ÁÈ· ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ·ÓÔÛ›·, ÂÓÒ Ë IL-4 ÙˆÓ Δ∏2 Ô˘ Â›Ó·È ˘Â‡-ı˘Ó· ÁÈ· ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ.72

TH0

IL-12 IL-4

TH1 TH2

IL-2IL-4

IL-5·Ó·ÛÙÔÏ‹

∫˘ÙÙ·ÚÔÏ˘ÙÈÎ‹

‰Ú¿ÛË

¶·Ú·ÁˆÁ‹

·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ

§∂πΔ√Àƒ°π∫√™ ¢π∞Ãøƒπ™ª√™ Δ-∫ÀΔΔ∞ƒø¡

™˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·˜, Ù· Ù‡Ô˘ Δ∏1 Î‡ÙÙ·Ú· Î·È ÔÈ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ·Ú¿-

ÁÔ˘Ó, ÚÔ¿ÁÔ˘Ó ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ·ÓÔÛ›·, ÙË Ê·ÁÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÛË, ÙËÓ ·ÚÔ˘Û›·-

ÛË ÙÔ˘ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ Î·È ÙËÓ ÂÈ‰ÈÎ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÂÓÒ Ù· Δ∏2 Î‡Ù-

Ù·Ú· Î·È ÔÈ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ÂÎÎÚ›ÓÔ˘Ó, Ú˘ıÌ›˙Ô˘Ó ÙËÓ ·Ú·ÁˆÁ‹ ÙˆÓ

·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Î·È Û˘ÌÌÂÙ¤¯Ô˘Ó ÛÙÈ˜ ·ÏÏÂÚÁÈÎ¤˜ ·ÓÙÈ‰Ú¿ÛÂÈ˜.12 ŸÙ·Ó Á›ÓÂ-

Ù·È ·Ó·ÊÔÚ¿ ÛÙÔ Û‡ÓÔÏÔ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙfiÙÂ ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ÛÂ Ù‡Ô˘ Δ1

Î·È Ù‡Ô˘ Δ2 Î‡ÙÙ·Ú·.

45

2 . ∫ À Δ Δ ∞ ƒ O ª ∂ Δ ƒ π ∞ ƒ O ∏ ™

∏ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ (Flow Cytometry-FC) Â›Ó·È ÁÂÓÈÎ¿ ÌÈ· ÌÂıÔ-

‰ÔÏÔÁ›· Ì¤ÙÚËÛË˜ Î·È ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È Î·ıÒ˜ ÌÈ·

ÌÔÓ‹ÚË˜ ÛˆÌ·ÙÈ‰È·Î‹ ‰È¿Ù·ÍË ‰È¤Ú¯ÂÙ·È ‰È· Ì¤ÛÔ˘ ÌÈ·˜ ÊˆÙÂÈÓ‹˜ ‰¤ÛÌË˜.

™ÙË ÎÏÈÓÈÎ‹ Ú¿ÍË ı· ÌÔÚÔ‡ÛÂ Ó· ÔÚÈÛıÂ› ˆ˜ Ì›· ·˘ÙÔÌ·ÙÔÔÈËÌ¤ÓË

Ì¤ıÔ‰Ô˜ Ì¤ÙÚËÛË˜ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‹ ÁÂÓÈÎfiÙÂÚ· ÛˆÌ·ÙÈ‰›ˆÓ (ÌÈÎÚÔÔÚÁ·ÓÈÛÌÒÓ,

ÛÊ·ÈÚÈ‰›ˆÓ ·‰Ú·ÓÔ‡˜ ˘ÏÈÎÔ‡), ÌÂ ‚¿ÛË Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· Ê˘ÛÈÎÔ¯ËÌÈÎ¿ ¯·-

Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ ÙÔ˘˜ Ô˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÔÓÙ·È ¿ÌÂÛ· Î·È ÍÂ¯ˆÚÈÛÙ¿ ÁÈ· Î¿ıÂ

¤Ó· Î‡ÙÙ·ÚÔ ‹ ÛˆÌ·Ù›‰ÈÔ ÙÔ˘ ˘fi ÂÍ¤Ù·ÛË ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ (·›Ì· ‹ ¿ÏÏ· ‚ÈÔÏÔ-

ÁÈÎ¿ ˘ÁÚ¿) Î·ıÒ˜ ‰È¤Ú¯ÔÓÙ·È ÛÂ ÓËÌ·ÙÈÎ‹ ÚÔ‹ ·fi ¤Ó· ÛÙ·ıÂÚfi ÛËÌÂ›Ô

ÛÙÔ ÔÔ›Ô ÚÔÛ›ÙÂÈ ÌÈ· ·ÎÙ›Ó· LASER.73,74

πÛÙÔÚÈÎ‹ ·Ó·‰ÚÔÌ‹

∏ ÈÛÙÔÚ›· ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ Â›Ó·È ¿ÌÂÛ· Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓË ÌÂ ÙËÓ ÂÍ¤ÏÈ-

ÍË ÙË˜ ·Ó·Ï˘ÙÈÎ‹˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÏÔÁ›·˜.75 ∏ ÚÒÙË ¯Ú‹ÛË ÔÚÁ¿ÓÔ˘ ÁÈ· ÙËÓ ·-

Ú·Ù‹ÚËÛË Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¤ÁÈÓÂ ÙÔÓ 17Ô ·ÈÒÓ· fiÙ·Ó ¤Ó·˜ OÏÏ·Ó‰fi˜ ¤ÌÔÚÔ˜ Ô

Antony Van Leeuwenhoeck ·Ó·Î¿Ï˘„Â ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË Ê·ÎÒÓ ÙÔ˘˜ ÌÈÎÚÔÔÚ-

Á·ÓÈÛÌÔ‡˜ Î·È Î·Ù·ÛÎÂ‡·ÛÂ ÙÔ ÚÒÙÔ ·Ïfi ÌÈÎÚÔÛÎfiÈÔ. ∏ ÂÍ¤ÏÈÍË ÙË˜

ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›·˜ Ô‰‹ÁËÛÂ ÛÙÔ Ó· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Û‹ÌÂÚ· ÌÈÎÚÔÛÎfiÈ· ·ÓÔ-

ÛÔÊıÔÚÈÛÌÔ‡, ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎ¿ ÌÈÎÚÔÛÎfiÈ· Î·È ÌÈÎÚÔÛÎfiÈ· Û¿ÚˆÛË˜ Ô˘

ÂÈÙÚ¤Ô˘Ó ÙËÓ Â˘ÎÚÈÓ¤ÛÙÂÚË ·Ú·Ù‹ÚËÛË ÔÏ‡ ÌÈÎÚfiÙÂÚˆÓ ÌÈÎÚÔÔÚÁ·ÓÈ-

ÛÌÒÓ. °ÓˆÚ›˙ÔÓÙ·˜ fiÙÈ Ô ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌfi˜ Û˘ÓÙÂÏÂ› ÛÙËÓ ·Ó·ÁÓÒÚÈÛË Î·È

Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ÌÈÎÚÔÛÎÔ›Ô˘ Î·È ÌÔ-

ÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· ¤Ó·ÓÙÈ ‰È·-

ÊfiÚˆÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·˘ÙÒÓ, ÌÔÚÔ‡ÌÂ Ó· Ô‡ÌÂ fiÙÈ Ë Î˘ÙÙ·ÚÔ-

ÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ·Ó·Ù‡¯ıËÎÂ ÛÙËÓ ÚÔÛ¿ıÂÈ· ·ÓÙÈÎÂÈÌÂÓÈÎ‹˜ ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙÔ˘

·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌÔ‡. ŒÙÛÈ Ù· Î˘ÙÙ·ÚfiÌÂÙÚ· ÚÔ‹˜ ÌÔÚÂ› Ó· ıÂˆÚËıÔ‡Ó ˆ˜

·˘ÙÔÌ·ÙÔÔÈËÌ¤Ó· ÌÈÎÚÔÛÎfiÈ· ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌÔ‡ Ô˘ ‰È·ı¤ÙÔ˘Ó ÏÂÔÓÂ-

ÎÙ‹Ì·Ù· fiˆ˜ ÙËÓ ÂÍ¤Ù·ÛË ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚÔ˘ ·ÚÈıÌÔ‡ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÔÏ‡ ÌÈÎÚfi

46

¯ÚfiÓÔ Î·È ÙËÓ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË ·Ó¿Ï˘ÛË ÔÏÏÒÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ.

Δ· ÚÒÙ· ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ‚‹Ì·Ù· ÛÙËÓ ·Ó¿Ù˘ÍË ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙÒÓ

¤ÁÈÓ·Ó ÙÔ 1930 ·fi ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙÔ˘ T. Caspersson ÛÙÔ ÈÓÛÙÈÙÔ‡ÙÔ Karolinska

ÙË˜ ™ÙÔÎ¯fiÏÌË˜.76 O Caspersson ·Ó¤Ù˘ÍÂ ÙËÓ ÌÈÎÚÔÊ·ÛÌ·ÙÔÊˆÙÔÌÂÙÚ›·

(microspectophotometry) –Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÛÂ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ·ÔÚÚÔÊ‹ÛÂ-

ˆ˜– Î·È Ù· ÚÒÙ· Û˘ÛÙ‹Ì·Ù· Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ Û¿ÚˆÛË˜ (scanning cyto-

metry) Ô˘ ·ÔÙ¤ÏÂÛ·Ó ÙË ‚¿ÛË ÁÈ· ÙËÓ Î·ÙÔÈÓ‹ ·Ó¿Ù˘ÍË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔ-

ÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ (flow cytometry) Î·È ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ÂÈÎfiÓ·˜

(image cytometry, image analysis). ™ËÌ·ÓÙÈÎ‹ Â›ÛË˜ ‹Ù·Ó Î·È Ë Û˘Ì‚ÔÏ‹

ÙÔ˘ Paul Erlich Ô ÔÔ›Ô˜ ‹‰Ë ·fi ÙÔ ‰Â‡ÙÂÚÔ ‹ÌÈÛ˘ ÙÔ˘ 19Ô˘ ·ÈÒÓ· ·Ó¤-

Ù˘ÍÂ ÙË ıÂˆÚ›· «‰ÚÒÛË˜ Ô˘Û›·˜ Î·È ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ˘Ô‰Ô¯¤ˆ˜» (ligand receptor

principle) Î·È ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛÂ Û˘ÓıÂÙÈÎ¤˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ Î¿ÙÈ ·Ó¿ÏÔÁÔ ÌÂ Ù·

ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·.77

ΔÔ 1934 ·Ó·Ê¤ÚÔÓÙ·È ÛÂ ÌÈ· ‰ËÌÔÛÈÂ˘Ì¤ÓË ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ Moldavan78 ÔÈ

ÚÒÙÂ˜ ÚÔÛ¿ıÂÈÂ˜ ÁÈ· ÊˆÙÔËÏÂÎÙÚÈÎ‹ Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‰È¤Ú¯Ô-

ÓÙ·È Ì¤Û· ·fi ÙÚÈ¯ÔÂÈ‰‹ ÛˆÏ‹Ó· Î·È ÙÔ 1947 ·fi ÙÔÓ Gucker Î·È Û˘Ó79

·Ó·Ê¤ÚÂÙ·È ¤Ó· fiÚÁ·ÓÔ Ì¤ÙÚËÛË˜ ÛÙÂÚÂÒÓ ÛˆÌ·ÙÈ‰›ˆÓ Ô˘ ·ÈˆÚÔ‡ÓÙ·È ÛÂ

Î¿ÔÈÔ ·¤ÚÈÔ. ∏ Û˘ÛÎÂ˘‹ ·˘Ù‹ Ô˘ ·Ó·Ù‡¯ıËÎÂ Ì¤Ûˆ ÂÓfi˜ ÚÔÁÚ¿ÌÌ·-

ÙÔ˜ ÙÔ˘ ∞ÌÂÚÈÎ¿ÓÈÎÔ˘ ÛÙÚ·ÙÔ‡ ÛÙfi¯Â˘Â ÛÙËÓ ÁÚ‹ÁÔÚË ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ‚·ÎÙË-

ÚÈ·ÎÒÓ ·Ú·ÁfiÓÙˆÓ ÛÙ· ·ÂÚÔ˙fiÏ. ∂ÈÙÂ‡¯ıËÎÂ Ë ÁÚ‹ÁÔÚË ÌÂÙ·ÊÔÚ¿ ‰Â›Á-

Ì·ÙÔ˜ ÌÂ ÙËÓ ÂÈÛ·ÁˆÁ‹ ÚÔ‹˜ ·¤Ú· Ë ÔÔ›· ÂÚÈÂ›¯Â ÙÔ ‰Â›ÁÌ· ÛÙÔ Î¤ÓÙÚÔ

ÌÈ·˜ ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚË˜ ÚÔ‹˜ ·¤Ú· ÂÛÙÈ¿˙ÔÓÙ·˜ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙÔ ˘Ú‹Ó· ÙË˜, ¤ÙÛÈ

ÒÛÙÂ Ó· Û˘Ó·ÓÙÔ‡Ó ¤Ó· ÂÛÙÈ·Îfi Â‰›Ô Ô˘ ÛÙËÓ ÚÔÎÂÈÌ¤ÓË ÂÚ›ÙˆÛË

‹Ù·Ó ÙÔ ÛÎÔÙÂÈÓfi Â‰›Ô ÂÓfi˜ ÌÈÎÚÔÛÎÔ›Ô˘. Δ· ÌÂÙ·ÎÈÓÔ‡ÌÂÓ· Î‡ÙÙ·Ú·

ÛÎ¤‰·˙·Ó ÙÔ Êˆ˜ ÚÔÎ·ÏÒÓÙ·˜ ËÏÂÎÙÚÈÎ¿ Û‹Ì·Ù· Ô˘ ·ÓÈ¯ÓÂ‡ÔÓÙ·Ó ·fi

¤Ó·Ó ÊˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù‹. ∞˘Ùfi ÙÔ Û‡ÛÙËÌ· ‹Ù·Ó Ô ÚÒÙÔ˜ ÚˆÙfiÁÔÓÔ˜ Î˘ÙÙ·-

ÚÔÌÂÙÚËÙ‹˜ ÚÔ‹˜ Î·È Ë ·Ú¯‹ ÛÙËÓ ÔÔ›· ‚·Û›ÛÙËÎÂ ¤ıÂÛÂ ÙÈ˜ ıÂÌ¤ÏÈÔ˘˜ Ï›-

ıÔ˘˜ ÁÈ· ÙË ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ÙˆÓ Û‡Á¯ÚÔÓˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙÒÓ ÚÔ‹˜ ÌÂ ÙË ¯Ú‹-

ÛË fiÌˆ˜ ˘ÁÚÔ‡ ˆ˜ Ì¤ÛÔ ÌÂÙ·ÊÔÚ¿˜.

ΔÔ 1950 ÔÈ Mellors Î·È Silver80 Î·Ù·ÛÎÂ‡·Û·Ó ¤Ó· ÌÈÎÚÔÊıÔÚÈfiÌÂÙÚÔ

Û¿ÚˆÛË˜ (scaning microfluorometer) ÁÈ· ÙËÓ ÔÛÔÙÈÎ‹ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙÔ˘ ÊıÔ-

ÚÈÛÌÔ‡. ΔËÓ ›‰È· ÂÔ¯‹ ÔÈ Coons Î·È Kaplan81 ÂÚÈ¤ÁÚ·„·Ó fiÙÈ Ë ÊıÔÚ›-

˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË ÛÙËÓ ÈÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹ ÙË˜ ÌÔÚÊ‹ ‰È·ı¤ÙÂÈ

ÙÔ ÏÂÔÓ¤ÎÙËÌ· ÙË˜ Â‡ÎÔÏË˜ Û‡Ó‰ÂÛË˜ Î·È ·ÔÙÂÏÂ› Ï¤ÔÓ ÌÈ· ·fi ÙÈ˜ ‚·-

ÛÈÎ¤˜ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·. ¶·Ú¿ÏÏËÏ· ‰ËÌÈÔ˘Ú-

Á‹ıËÎ·Ó ·fi ÙÔÓ Coulter ÔÈ ÚÒÙÔÈ ·ÈÌ·ÙÔÏÔÁÈÎÔ› ·Ó·Ï˘Ù¤˜ ÚÔ˘Ù›Ó·˜ ‚·-

ÛÈÛÌ¤ÓÔÈ ÛÙËÓ ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎ‹ ·Ú¯‹ Ì¤ÙÚËÛË˜ ˆ˜ ÌÈ· ÂÓ·ÏÏ·ÎÙÈÎ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

47

ÙÚÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜.82 ΔÔ 1955 Î·Ù·ÛÎÂ˘¿ÛıËÎÂ ÛÂ ÂÈÚ·Ì·ÙÈÎfi Â›Â‰Ô ·fi

ÙÔ˘˜ Tolles Î·È Bostrom ¤Ó· ÚˆÙÔÔÚÈ·Îfi Û‡ÛÙËÌ· ÙÔ Cytoanalyzer (Air-

borne Instruments) Ô˘ Û˘Ó‰‡·˙Â ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ·ÔÚÚfiÊËÛË˜ Î·È ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

ÛÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÏÔÁÈÎ¿ ÂÈ¯Ú›ÛÌ·Ù·.

™ÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÌÂ ÙËÓ ÂÍ¤ÏÈÍË ÙË˜ ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›·˜ ÙÔ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÔÓ ÌÂÙ·ÙÔ-

›ÛıËÎÂ ÛÙË ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·È ÛÙË ‰È¿ÎÚÈÛË Î·È ·Ó¿Ï˘-

ÛË ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ (¶›Ó. 5). ∂ÚÂ˘ÓËÙ¤˜ fiˆ˜ ÔÈ Haller-

man,83 Kosenow84 Î·È Kamentsky85 Ô˘ ‹Ù·Ó ÚˆÙÔfiÚÔÈ ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

ÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÂÊ¿ÚÌÔÛ·Ó Ó¤· ÂÈÚ·Ì·ÙÈÎ¿ Û˘ÛÙ‹Ì·Ù· ÁÈ· ÙËÓ ‰È¿ÎÚÈÛË ÙˆÓ

ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ Ô˘ ‚Ú‹Î·Ó ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÛÙË ‰È¿ÎÚÈÛË Î·È

·Ó¿Ï˘ÛË ÂÙÂÚÔÁÂÓÒÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ.

ΔÔ 1965 Ô Fulwyler Î·È Ô van Dilla86,87 ·fi ÙÔ Los Alamos (Los Ala-

mos National laboratory) Î·È Ô Kantempsky85,88 ·fi ÙËÓ πμª (IBM’s

Watson Laboratory at Columbia University) ÙÂÏÂÈÔÔ›ËÛ·Ó ÙÔ˘˜ ÚÒÙÔ˘˜

Î˘ÙÙ·ÚÔ‰È·¯ˆÚÈÛÙ¤˜ Û·Ó ÚfiÛıÂÙ· ÙÌ‹Ì·Ù· ÛÙ· ‹‰Ë ˘¿Ú¯ÔÓÙ· Û˘ÛÙ‹Ì·-

Ù· Î˘ÙÙ·ÚÔ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ‚·ÛÈ˙fiÌÂÓÔÈ ÛÙËÓ ·Ú¯‹ ÙÔ˘ ÂÎÙ˘ˆÙ‹ „ÂÎ·ÛÌÔ‡ ÌÂ-

Ï¿ÓË˜ (ink-jet printer) Ô˘ ÂÊ‹˘ÚÂ Ô Dick Sweet (Stanford 1969)89 ÔfiÙÂ

‹Ù·Ó Ï¤ÔÓ ÂÊÈÎÙfi˜ Ô ÂÍÂÈ‰ÈÎÂ˘Ì¤ÓÔ˜ ‰È·¯ˆÚÈÛÌfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ

ÌÂ ÙËÓ ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›· ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹˜ ‰È·ÏÔÁ‹˜ (cell sorting). ™Ù· Ù¤ÏË

ÙË˜ ‰ÂÎ·ÂÙ›·˜ ÙÔ˘ ’60 Ô Herzenberg Î·È ÔÈ Û˘ÓÂÚÁ¿ÙÂ˜ ÙÔ˘ ·fi ÙÔ ¶·ÓÂÈ-

ÛÙ‹ÌÈÔ ÙÔ˘ Stanford ÛÙÈ˜ ∏¶∞ (Stanford University Medical School, Cali-

48

¶›Ó·Î·˜ 5. ∂ÍÂÏ›ÍÂÈ˜ ÛÙ·ıÌÔ› ÙË˜ ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›·˜ Ô˘ Û˘ÓÙ¤ÏÂÛ·Ó ÛÙËÓ ·Ó¿Ù˘ÍË Î·ÈÙÂÏÂÈÔÔ›ËÛË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜.

• ∫·Ù·ÛÎÂ˘‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙÒÓ ÚÔ‹˜ Ó¤·˜ ÁÂÓÈ¿˜

• ∞Ó¿Ù˘ÍË ÙË˜ ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›·˜ ÙˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ

• ∞Ó·Î¿Ï˘„Ë Î·È ¯Ú‹ÛË Ó¤ˆÓ ÊıÔÚÈ˙Ô˘ÛÒÓ ¯ÚˆÛÙÈÎÒÓ

• ÃÚ‹ÛË ÔÈÎÈÏ›·˜ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛˆÓ ¯ÚˆÛÙÈÎÒÓ Î·È ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ·Ú·ÁˆÁ‹˜ ÙÚÈÏÔ‡

‹ Î·È ÙÂÙÚ·ÏÔ‡ ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÌÂ Ì›· ·ÎÙ›Ó· LASER

• ÃÚ‹ÛË ‰‡Ô ‹ Î·È ÙÚÈÒÓ ·ÎÙ›ÓˆÓ LASER ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡ Ê¿ÛÌ·ÙÔ˜ ÂÎÔÌ‹˜

• ¢˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎ¿ ÂÙÂÚÔÁÂÓÒÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ

ÏËı˘ÛÌÒÓ

• ∞Ó¿Ù˘ÍË ÂÍÂÈ‰ÈÎÂ˘Ì¤ÓˆÓ ÚÔÁÚ·ÌÌ¿ÙˆÓ ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎÒÓ ˘ÔÏÔÁÈÛÙÒÓ ÁÈ·

ÙËÓ ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ Î·È ÙˆÓ ÚˆÙÔÁÂÓÒÓ ‰Â-

‰ÔÌ¤ÓˆÓ

• ∞˘ÙÔÌ·ÙÔÔ›ËÛË ÛÙÔ ¯ÂÈÚÈÛÌfi ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ

• ∂Ê·ÚÌÔÁ‹ ·˘ÛÙËÚÒÓ ÎÚÈÙËÚ›ˆÓ ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÔÈfiÙËÙ·˜

fornia) ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛ·Ó ÙÔ Û‡ÛÙËÌ· ÚÔ‹˜ Ô˘ Â›¯·Ó Î·Ù·ÛÎÂ˘¿ÛÂÈ ÔÈ Ful-

wyler Î·È van Dilla Î·È ÚfiÛıÂÛ·Ó ÂÈÏ¤ÔÓ ¤Ó· Û‡ÛÙËÌ· ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË˜ ÊıÔ-

ÚÈÛÌÔ‡ Û˘Ó‰˘¿˙ÔÓÙ·˜ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÌÂ ÙÔÓ ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌfi (ÊıÔÚÈÔ-

Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÚ›·).90 ◊Ù·Ó ·˘ÙÔ› Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛ·Ó ÁÈ· ÚÒÙË ÊÔÚ¿ ·ÂÚÔ-

„‡ÎÙË LASER ·ÚÁÔ‡ ‰ËÌÈÔ˘ÚÁÒÓÙ·˜ ¤Ó· Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ FACS

(Fluorescence Activated Cell Sorter).91 ΔÔ 1976 Ë ÔÌ¿‰· ÙÔ˘ Herzenberg

Ô˘ ··ÚÙ›˙ÔÓÙ·Ó ·fi È·ÙÚÔ‡˜, ‚ÈÔÏfiÁÔ˘˜ Î·È ÌË¯·ÓÈÎÔ‡˜ Î·ÙfiÚıˆÛÂ ÙÂ-

ÏÈÎ¿ Ó· Î¿ÓÂÈ ÙÔ FACS ¤Ó· Ï‹Úˆ˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfi fiÚÁ·ÓÔ Ë ‚·ÛÈÎ‹ ‰ÔÌ‹ ÙÔ˘

ÔÔ›Ô˘ ‰ËÌÔÛÈÂ‡ıËÎÂ ÛÙÔ Scientific American ÙÔ ª¿ÚÙÈÔ ÙÔ˘ 197692 Î·È

·Ú¤ÌÂÈÓÂ Ë ›‰È· ÁÈ· Ù· ÂfiÌÂÓ· 30 ¯ÚfiÓÈ· ÌÂ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÂÚÈÛÛfiÙÂ-

ÚˆÓ ·ÎÙ›ÓˆÓ LASER.

ªÂÙ¿ ÙÔ 1960 Ë ÂÍ¤ÏÈÍË ÙË˜ ÏËÚÔÊÔÚÈÎ‹˜ Î·È ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜

ÚÔ‹˜ Û˘Ó‰¤ıËÎ·Ó ÔÚÈÛÙÈÎ¿. H „ËÊÈÔÔ›ËÛË ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÔ˘Ó

·fi ÙÈ˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ Î·È Ë ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎ‹ ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ ÌÂ ÂÈ-

‰ÈÎ¿ ÏÔÁÈÛÌÈÎ¿ ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎÔ‡ ˘ÔÏÔÁÈÛÙ‹ ¿Ú¯ÈÛÂ Ó· ·Ú¤¯ÂÈ Ó¤Â˜ ·Ó·Ï˘ÙÈ-

Î¤˜ ‰˘Ó·ÙfiÙËÙÂ˜ ÛÂ ÂÏ¿¯ÈÛÙÔ ¯ÚfiÓÔ.

H ÚfiÔ‰Ô˜ Ô˘ Û˘ÓÙÂÏ¤ÛÙËÎÂ ÂÈÚ·Ì·ÙÈÎ¿ ÛÙÔ ÂÚÁ·ÛÙ‹ÚÈÔ ·fi ÂÚÂ˘-

ÓËÙ¤˜ fiˆ˜ o Herzenberg,93 o Kamentsky,88 o Block Î·È o Shapiro94 ÌÂÙ¿

ÙÔ 1979 ÌÂÙ·ÙÔ›ÛÙËÎÂ ·fi Î·Ù·ÛÎÂ˘·ÛÙÈÎ¤˜ ÂÙ·ÈÚÂ›Â˜ fiˆ˜ Ë Bio/Physics

(Ortho), Ë Becton-Dickinson Î·È Ë Coulter ÛÙÈ˜ ÎÏÈÓÈÎ¤˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜ ÌÂ ÙË

‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ·Ó·Ï˘ÙÒÓ Ô˘ ‰È·ı¤ÙÔ˘Ó Ì›· ‹ ‰‡Ô ·ÎÙ›ÓÂ˜ LASER Î·È ·ÓÈ-

¯ÓÂ‡Ô˘Ó ‰‡Ô Âˆ˜ Ù¤ÛÛÛÂÚÈ˜ Û˘Á¯ÚfiÓˆ˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡˜. ∂›ÛË˜ Ë ·Ó¿Ù˘ÍË

ÙË˜ ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›·˜ ÙˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ95,96 Î·È Ë ·Ó·Î¿Ï˘„Ë ÙˆÓ ˘‚ÚÈ‰ˆ-

Ì¿ÙˆÓ Î·È ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ÙÔ 1975 ·fi ÙÔ˘˜ Kohler Î·È Mil-

stein (‚Ú·‚Â›Ô Nobel 1984)97 Û˘Ó¤‚·Ï·Ó Î·ıÔÚÈÛÙÈÎ¿ ÛÙËÓ ÚfiÔ‰Ô Î·È

ÂÍ¤ÏÈÍË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ Î·È Û˘ÓÙ¤ÏÂÛ·Ó ÛÙË ‰ÈÂ‡Ú˘ÓÛË ÙˆÓ ÂÊ·Ú-

ÌÔÁÒÓ ÙË˜.

¶ÏÂÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù·

∏ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÂÈÙÚ¤ÂÈ ÙËÓ ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÂÓfi˜

ÌÂÁ¿ÏÔ˘ ·ÚÈıÌÔ‡ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ¤¯ÂÈ ÔÏÏ¿ ÏÂÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù· ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÈ˜

Û˘Ì‚·ÙÈÎ¤˜ ÙÂ¯ÓÈÎ¤˜, fiˆ˜ :

� ¶ÔÏ‡ ÌÂÁ¿ÏË Ù·¯‡ÙËÙ· Ì¤ÙÚËÛË˜ (500-10.000 Î‡ÙÙ·Ú·/sec)

� ªÂÁ¿ÏÔ ·ÚÈıÌfi ·Ó·Ï˘fiÌÂÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÂÏ¿¯ÈÛÙÔ ¯ÚfiÓÔ (Ù· Î‡ÙÙ·-

Ú· ·Ó·Ï‡ÔÓÙ·È ¤Ó· ÚÔ˜ ¤Ó· Î·È ÌÂ ÙÔÓ ÙÚfiÔ ·˘ÙfiÓ ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È Ë ÂÙÂÚÔ-

Á¤ÓÂÈ· ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡)

� ∂·Ó·ÏË„ÈÌfiÙËÙ· ÙˆÓ ÌÂÙÚ‹ÛÂˆÓ

49

� ™‡Á¯ÚÔÓË ·Ó¿Ï˘ÛË ÔÏÏÒÓ ·ÓÂÍ¿ÚÙËÙˆÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ ÛÙÔ ›‰ÈÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ

(ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË) .¯. Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓÔ˜ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ‰‡Ô ‹

ÂÚÈÛÛÔÙ¤ÚˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÌÂ ‚¿ÛË ÙÔÓ ÚfiÛıÈÔ Î·È Ï¿ÁÈÔ

ÛÎÂ‰·ÛÌfi Î·È ÙË ¯Ú‹ÛË ‰‡Ô ÙÔ˘Ï¿¯ÈÛÙÔÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ

� ªÂÁ¿ÏË ·Ó·Ï˘ÙÈÎ‹ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· Î·È ·ÍÈÔÈÛÙ›· ÛÂ Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ ÙËÓ ÌÈÎÚÔ-

ÛÎÔ›·

� H ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË˜ ÌÈÎÚÔ‡ ·ÚÈıÌÔ‡ ÌÔÚ›ˆÓ (fiÚÈÔ 3000-5000 Ìfi-

ÚÈ·) ·Ó¿ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÌÂ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ˘ÂÚË‰¿ ÙÔ

Úfi‚ÏËÌ· ÙÔ˘ ·˘ÙÔÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÚÈÔÚ›˙ÂÈ ÛÙËÓ Ú¿-

ÍË ÙËÓ Â˘·ÈÛıËÛ›· ÙÔ˘ ÌÈÎÚÔÛÎÔ›Ô˘ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ (fiÚÈÔ > 20.000

ÌfiÚÈ·)98

� ∞ÎÚ›‚ÂÈ·

� ¶ÔÏ‡ ÌÂÁ¿ÏË Â˘·ÈÛıËÛ›· ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘

� ∂Ï¿¯ÈÛÙË ÔÛfiÙËÙ· ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ (100Ìl ·›Ì·ÙÔ˜, Ô˘ fiˆ˜ Â›Ó·È Â˘ÓfiËÙÔ

‰ÈÂ˘ÎÔÏ‡ÓÂÈ ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÛÂ ·È‰È¿ Î·È ÛÂ Î·Ù·ÔÓËÌ¤-

ÓÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜)

� ∂‡ÎÔÏË ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜

� ¢˘Ó·ÙfiÙËÙ· ·ÔÙ‡ˆÛË˜ Î·È ·Ôı‹ÎÂ˘ÛË˜ ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ ÛÙË

ÌÓ‹ÌË ÙÔ˘ ˘ÔÏÔÁÈÛÙ‹ Î·ıÒ˜ ·Ó¿ÎÏËÛË Î·È ÂÎÙ‡ˆÛ‹ ÙÔ˘˜ Û’ ÔÔÈ·‰‹-

ÔÙÂ ¯ÚÔÓÈÎ‹ ÛÙÈÁÌ‹.

O Ù·¯‡˜ Ú˘ıÌfi˜ ÌÂ ÙÔÓ ÔÔ›Ô Ë Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÂÍÂÙ¿˙ÂÈ ÙÈ˜ Î˘Ù-

Ù·ÚÈÎ¤˜ ·Ú·Ì¤ÙÚÔ˘˜ ‰›ÓÂÈ ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÌÂÁ¿ÏÔ˘ ·ÚÈıÌÔ‡ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ Î·È ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌÔ‡ Û¿ÓÈˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎÒÓ (hetero-

geneity subpopulation) Î·È Î·Ù¿ Û˘Ó¤ÂÈ· ÙÔÓ ÂÓÙÔÈÛÌfi Î·È ÙË ÌÂÏ¤ÙË Ô-

Ï‡ ÌÈÎÚÒÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ (¤Ó· /105 Î‡ÙÙ·Ú·, ¯. Î·ÚÎÈÓÈÎ¿ Î‡ÙÙ·-

Ú· ÛÙ· Ô‡Ú·, ‚Ï¿ÛÙÂ˜ ÛÙËÓ ÂÏ¿¯ÈÛÙË ˘ÔÏÂÈÌÌ·ÙÈÎ‹ ÓfiÛÔ).

™Â ·ÓÙ›ıÂÛË ÌÂ ÙÔ Û‡ÓÔÏÔ Û¯Â‰fiÓ ÙˆÓ ·Ó·Ï˘ÙÈÎÒÓ ÌÂıfi‰ˆÓ fiÔ˘ ÔÈ

Î˘ÙÙ·ÚÈÎ¤˜ ·Ú¿ÌÂÙÚÔÈ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Ô Ì¤ÛÔ˜ fiÚÔ˜ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ ÛÙÔÓ

·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ô Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÏËı˘ÛÌfi, ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·, Ô ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜

ÙˆÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ Á›ÓÂÙ·È ÛÂ Î¿ıÂ ¤Ó· Î‡ÙÙ·ÚÔ ÌÂÌÔÓˆÌ¤Ó·.

¶Ú¤ÂÈ Ó· ÂÈÛËÌ¿ÓÔ˘ÌÂ fiÙÈ ÔÈ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ¤˜ ÚÔ‹˜ ‰ÂÓ Â›Ó·È ·˘Ùfi-Ì·ÙÔÈ ·Ó·Ï˘Ù¤˜ ·ÏÏ¿ Ë ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›· ÙÔ˘˜ ÂÈ‰¤¯ÂÙ·È ÛËÌ·ÓÙÈÎ‹ ˘ÔÎÂÈÌÂÓÈÎ‹·Ú¤Ì‚·ÛË, ÌÂ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· Ó· ÂÍ·ÚÙ¿Ù·È Î·ıÔÚÈÛÙÈÎ¿ ·fi ÙËÓ Î·Ù¿ÚÙÈÛËÎ·È ÙËÓ ÂÌÂÈÚ›· ÙÔ˘ ¯Ú‹ÛÙË.

50

∂Ê·ÚÌÔÁ¤˜

H Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÍÂÎ›ÓËÛÂ Û·Ó ÂÚÁ·ÏÂ›Ô Î˘ÙÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜

ÛÙÔ Â‰›Ô ÙË˜ ‚·ÛÈÎ‹˜ ¤ÚÂ˘Ó·˜, ·ÏÏ¿ ÁÚ‹ÁÔÚ· ¿Ú¯ÈÛ·Ó Ó· ·Ó·Ù‡ÛÛÔÓÙ·È

Ú·ÎÙÈÎ¤˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜ ÙË˜ Î·È ÛÙÔ ÎÏÈÓÈÎfi Â›Â‰Ô fiˆ˜ Ê·›ÓÂÙ·È ·Ó·Ï˘ÙÈ-

Î¿ ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 6.99,100

ΔÔ Â‰›Ô ÂÊ·ÚÌÔÁÒÓ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ Â›Ó·È Â˘Ú‡ Î·È ÂÚÈ-

Ï·Ì‚¿ÓÂÈ ‰È¿ÊÔÚÔ˘˜ ÎÏ¿‰Ô˘˜ ÙË˜ ÂÈÛÙ‹ÌË˜ (fiˆ˜ ÂÊ·ÚÌÔÛÌ¤ÓË ÌË¯·ÓÈ-

Î‹, È·ÙÚÈÎ‹, ÎÙËÓÈ·ÙÚÈÎ‹, Ê˘ÙÔÏÔÁ›·, ÌÔÚÈ·Î‹ ‚ÈÔÏÔÁ›·, Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ‚ÈÔÏÔ-

Á›·, ÁÂÓÂÙÈÎ‹). H ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ ÛÙË ÌÂÏ¤ÙË ÙˆÓ ·ÓÔ-

ÛÔÏÔÁÈÎÒÓ, ·ÈÌ·ÙÔÏÔÁÈÎÒÓ Î·È ÓÂÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎÒÓ ÓÔÛËÌ¿ÙˆÓ ¿ÓÔÈÍÂ Î·È-

ÓÔ‡ÚÈÂ˜ ÚÔÔÙÈÎ¤˜ ÛÙËÓ ÎÏÈÓÈÎ‹ ¤ÚÂ˘Ó·. ∏ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÙË˜

Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ (·ÓÔÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜) ·ÔÙÂÏÂ› ÙËÓ ÈÔ ‰È·‰ÔÌ¤ÓË

ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜.101 ∏ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓÔÙ˘ÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ‰›-

ÓÂÈ ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· Î·ıÔÚÈÛÌÔ‡ ÙÔ˘ ÛÙ·‰›Ô˘ ˆÚ›Ì·ÓÛË˜, ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË˜

Î·È ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È ÙÔÓ ‰È·¯ˆÚÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÈ-

ÎÒÓ ˘ÔÏËı˘ÛÌÒÓ ÌÂ ÙËÓ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË Ì¤ÙÚËÛË ÙÂÛÛ¿ÚˆÓ ÙÔ˘Ï¿¯ÈÛÙÔÓ

ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ (ÌÔÚ›ˆÓ ‹ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ), ‰ÂÈÎÙÒÓ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÏ¿-

ÛÌ·ÙÔ˜ ‹ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÙÔ˘ ˘Ú‹Ó· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎÒÓ È‰ÈÔ-

Ù‹ÙˆÓ ÌÂÌÔÓˆÌ¤ÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ. ªÂ ÙÔÓ ÙÚfiÔ ·˘ÙfiÓ, ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È Ë ·Ó›-

¯ÓÂ˘ÛË ·ıÔÏÔÁÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È Ô ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ‰È·Ù·Ú·¯ÒÓ

ÙË˜ Û‡ÛÙ·ÛË˜ ÙˆÓ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎÒÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ. ™Â ·˘Ùfi Û˘Ì‚¿Ï-

ÏÂÈ Ë Û˘ÓÂ¯‹˜ ·Ú·ÁˆÁ‹ Ó¤ˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ¤Ó·ÓÙÈ Î˘ÙÙ·-

ÚÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È Ë ÂÍ¤ÏÈÍË ÙË˜ ÙÂ¯ÓÔÏÔÁ›·˜ ÙˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿-

ÙˆÓ.96,102 ŒÙÛÈ, Ô Î·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÚÔ¤ÏÂ˘ÛË˜ Î·È ÙÔ˘ ÛÙ·‰›Ô˘

‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊˆÌ¿ÙˆÓ Î·È ÙˆÓ ÏÂ˘¯·ÈÌÈÒÓ Î·ıÒ˜ Î·È Ô ÚÒÈ-

ÌÔ˜ ÂÓÙÔÈÛÌfi˜ ÙË˜ ˘ÔÙÚÔ‹˜ Î·ÎÔ‹ıˆÓ ·ÈÌ·ÙÔÏÔÁÈÎÒÓ ÓÔÛËÌ¿ÙˆÓ (ÂÏ¿-

¯ÈÛÙË ˘ÔÏÏÂÈÌ·ÙÈÎ‹ ÓfiÛÔ˜), Ë ·Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ÓÔ˘ÎÏÂ˚ÎÒÓ ÔÍ¤ˆÓ (DNA,

RNA) Î·È ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘, Ë Ì¤ÙÚËÛË ÙË˜ ·fiÙˆÛË˜, ÙË˜ ÎÈÓËÙÈÎ‹˜

ÙˆÓ ÌÂÙ·‚ÔÏÒÓ ÙÔ˘ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈÔ˘ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘, ÙÔ˘ ‰˘Ó·ÌÈÎÔ‡ ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿-

ÓË˜, ÙÔ˘ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ pH, ÔÏÏÒÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÂÓ˙‡ÌˆÓ Î·È Ô ‰È·¯ˆÚÈ-

ÛÌfi˜ ·ÓÒÌ·ÏˆÓ ¯ÚˆÌÔÛˆÌ¿ÙˆÓ, ·ÔÙÂÏÔ‡Ó Ú·ÁÌ·ÙÈÎfiÙËÙ·.

E›ÛË˜, ÂÓÒ Ì¤¯ÚÈ ÚfiÛÊ·Ù· Ë Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ·ÚÂ›¯Â ÏËÚÔ-

ÊÔÚ›Â˜ Û¯ÂÙÈÎ¤˜ ÌÂ ÙËÓ ÔÛÔÛÙÈ·›· ·Ó·ÏÔÁ›· ÂÓfi˜ ÏËı˘ÛÌÔ‡ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‹

ÙÔ˘ ·fiÏ˘ÙÔ˘ ·ÚÈıÌÔ‡ ÙÔ˘˜, Â›Ó·È È· ‰˘Ó·Ùfi, Ó· ÌÂÙÚËıÂ› ÔÛÔÙÈÎ¿ Ô

·ÚÈıÌfi˜ ÙˆÓ ÌÔÚ›ˆÓ ÙÔ˘ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ Ô˘ Û˘Ó‰¤ÔÓÙ·È ÌÂ Î¿ıÂ Î‡ÙÙ·ÚÔ Î·È

Ó· ˘ÔÏÔÁ›˙ÂÙ·È ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ ¤ÓÙ·ÛË ÙÔ˘ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ·Ó¿ Î‡ÙÙ·ÚÔ Ô ‚·ı-

Ìfi˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘. ∏ ÔÛÔÙÈÎÔÔ›ËÛË ·˘Ù‹ ÙË˜

51

52

¶›Ó·Î·˜ 6. ∫ÏÈÓÈÎ¤˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜

∞ÓÔÛÔÏÔÁ›· - ∞ÈÌ·ÙÔÏÔÁ›·1. º·ÈÓÔÙ˘ÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÙˆÓ ˘ÔÏËı˘ÛÌÒÓ ÙÔ˘˜

2. º·ÈÓÔÙ˘ÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË Î·ÎÔ‹ıˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

3. ¢È¿ÁÓˆÛË Î·È Ù˘ÔÔ›ËÛË ÏÂ˘¯·ÈÌÈÒÓ Î·È ÏÂÌÊˆÌ¿ÙˆÓ

4. ¢È¿ÁÓˆÛË Î·È ·Ú·ÎÔÏÔ‡ıËÛË ÎÏËÚÔÓÔÌÈÎÒÓ Î·È Â›ÎÙËÙˆÓ ·ÓÔÛÔ·ÓÂ·ÚÎÂÈÒÓ

5. ¢È¿ÁÓˆÛË Î·È ·Ú·ÎÔÏÔ‡ıËÛË ·˘ÙÔ¿ÓÔÛˆÓ ÓÔÛËÌ¿ÙˆÓ

6. ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ Ê·ÁÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ (DHR123-·Ú·ÁˆÁ‹ ∏2O2, LFA-1,2,3)

7. ª¤ÙÚËÛË ·ÓÔÛÔÛ˘ÌÏÂÁÌ¿ÙˆÓ (Î‡ÙÙ·Ú· Raji)

8. HLA-Ù˘ÔÔ›ËÛË

9. ªÂÏ¤ÙË ÌÈÎÙ‹˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

10. ¢È·ÛÙ·‡ÚˆÛË ÈÛÙÔÛ˘Ì‚·ÙfiÙËÙ·˜ (Cross-macthing)

11. ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ·ÔÙÂÏÂÛÌ·ÙÈÎfiÙËÙ·˜ ÙË˜ ·ÓÔÛÔıÂÚ·Â›·˜ Î·È ¯ËÌÂÈÔıÂÚ·Â›·˜- ˘ÔÏÂÈ-

fiÌÂÓË ÓfiÛÔ˜

12. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ÔÌ¿‰ˆÓ ·›Ì·ÙÔ˜ ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÌÂÙ¿ ·fi ·Û‡Ì‚·ÙË ÌÂÙ¿ÁÁÈÛË)

13. ∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙÔ˘ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Ù‡Ô˘

14. ª¤ÙÚËÛË ‰ÈÎÙ˘ÔÂÓ‰ÔıËÏÈ·ÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

15. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ·ÓÙÈ·ÈÌÔÂÙ·ÏÈ·ÎÒÓ Î·È ·ÓÙÈÂÚ˘ıÚÔÎ˘Ù·ÚÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ

OÁÎÔÏÔÁ›·1. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÔÏ˘ÏÔÂÈ‰›·˜ ÙÔ˘ DNA

2. ∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ·˜ ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡ ÛÂ DNA, RNA

3. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ (ÔÛÔÛÙfi Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Î¿ıÂ Ê¿ÛË ÙÔ˘

Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘)

4. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÔÁÎÔÁÔÓÈ‰›ˆÓ

5. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ (Û¯ÂÙ›˙ÔÓÙ·È ÌÂ ÙÔÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ)

6. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ‰ÂÈÎÙÒÓ fiÁÎˆÓ (¯. ˘Ô‰Ô¯Â›˜ ÔÈÛÙÚÔÁfiÓˆÓ)

ªÈÎÚÔ‚ÈÔÏÔÁ›·1. Δ·˘ÙÔÔ›ËÛË ‚·ÎÙËÚÈ‰›ˆÓ ÌÂ ¯Ú‹ÛË ¯ÚÒÛÂˆÓ DNA, ÂÓ˙˘ÌÈÎ‹˜ ‰Ú·ÛÙÈÎfiÙËÙ·˜ ‹ ·Ú·-

Ì¤ÙÚˆÓ ÛÎ¤‰·ÛË˜ ÙÔ˘ ÊˆÙfi˜

2. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ Î·È ·Ú›ıÌËÛË ÌÈÎÚÔÔÚÁ·ÓÈÌÒÓ Î·È ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ ·Ú·Û›ÙˆÓ

∂Ó‰ÔÎÚÈÓÔÏÔÁ›·1. ÀÔ‰Ô¯Â›˜ ÔÚÌÔÓÒÓ

2. ∞Ó¿Ï˘ÛË Û¤ÚÌ·ÙÔ˜ ÌÂ Ì¤ÙÚËÛË ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ·˜ ÛÂ DNA

3. ¢È·¯ˆÚÈÛÌfi˜ Û¤ÚÌ·ÙÔ˜ Ã:À

°ÂÓÂÙÈÎ‹1. ÃÚˆÌÔÛˆÌÈ·Î‹ ·Ó¿Ï˘ÛË

ÕÏÏÂ˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜1. ∂Ó‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÈÔÓÙÈÛÌ¤ÓÔ ·Û‚¤ÛÙÈÔ

2. ¢˘Ó·ÌÈÎfi ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜

3. ∫˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈÎfi pH

4. ∂Ó‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈÂ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜

¤ÓÙ·ÛË˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÌÂ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ (Quantitative Fluorescence

Cytometry, QFCM) ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÈ ÔÛÔÙÈÎ¿ ÙËÓ ·ÚÔ˘Û›· ÂÓfi˜ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘

·Ó¿ Î‡ÙÙ·ÚÔ ÌÂ ‚¿ÛË ÙÔÓ ·ÚÈıÌfi ÙˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Ô˘

Û˘Ó‰¤ÔÓÙ·È ·Ó¿ Î‡ÙÙ·ÚÔ (antibodies bound per cell, ∞μC).103,104,105

T· ‰Â›ÁÌ·Ù· Ô˘ ÌÂÏÂÙÒÓÙ·È Û‹ÌÂÚ· ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Â›Ó·È Î˘-

Ú›ˆ˜ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì·, ¿ÏÏ· ‚ÈÔÏÔÁÈÎ¿ ˘ÁÚ¿ fiˆ˜ ∂¡À, ÏÂ˘ÚÈÙÈÎfi ˘ÁÚfi,

·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi, ‰Â›ÁÌ· ·fi ‚ÈÔ„›· Ì˘ÂÏÔ‡ ÙˆÓ ÔÛÙÒÓ, ‰Â›ÁÌ· ·fi Û˘Ì·-

ÁÂ›˜ fiÁÎÔ˘˜ Â›ÙÂ ÛÂ ÂÓ·ÈÒÚËÌ· Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi ÂÈ‰ÈÎ‹ Î·ÙÂÚÁ·Û›· Â›ÙÂ

ÛÂ Óˆfi ˘ÏÈÎfi ÚfiÛÊ·ÙË˜ ‚ÈÔ„›·˜ ÈÛÙÔ‡ ‹ ÈÛÙÔ‡ ÂÁÎÏÂÈÛÌ¤ÓÔ˘ ÛÂ ·Ú·Ê›-

ÓË Î·È ÂÎÏ‡Ì·Ù· ÔÚÁ¿ÓˆÓ fiˆ˜ ÙË˜ Ô˘ÚÔ‰fi¯Ô˘ Î‡ÛÙË˜ Î·È ÙˆÓ ‚ÚfiÁ¯ˆÓ

(BAL).

∞Ú¯¤˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜

ŒÓ·˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹˜ ÚÔ‹˜ ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ÙÚ›· Û˘ÛÙ‹Ì·Ù·: ·fi

ÙÔ Û‡ÛÙËÌ· ÚÔ‹˜ ˘ÁÚÒÓ (‹ ˘‰ÚÔ‰˘Ó·ÌÈÎfi), ·fi ÙÔ ÔÙÈÎfi Î·È ·fi ÙÔÓ ËÏÂ-

ÎÙÚÔÓÈÎfi Û‡ÛÙËÌ·.106

·. ™‡ÛÙËÌ· ÚÔ‹˜ ˘ÁÚÒÓ (˘‰ÚÔ‰˘Ó·ÌÈÎfi Û‡ÛÙËÌ·)

∂›Ó·È ÙÔ Û‡ÛÙËÌ· ÌÂ ÙÔ ÔÔ›Ô ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È Ë ÌÔÓ‹ÚË˜ ÛˆÌ·ÙÈ‰È·Î‹

‰È¿Ù·ÍË ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ (Û˘Ó‹ıˆ˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹) ÒÛÙÂ Ó· ÂÈÙÚ¤ÂÙ·È Ë Úfi-

ÛÙˆÛË ÙË˜ ÊˆÙÂÈÓ‹˜ ‰¤ÛÌË˜ ÛÂ Î¿ıÂ ¤Ó· ÌÂÌÔÓˆÌ¤ÓÔ ÛˆÌ·Ù›‰ÈÔ/Î‡ÙÙ·ÚÔ

Ô˘ ‰È¤Ú¯ÂÙ·È ÌÂ ÓËÌ·ÙÈÎ‹ ÚÔ‹ Î·È ÌÂ ÙÔÓ ÙÚfiÔ ·˘Ùfi Ó· Á›ÓÂÙ·È Ë Ì¤ÙÚËÛË

‰È·ÊfiÚˆÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ ÙÔ˘.

ΔÔ ˘‰ÚÔ‰˘Ó·ÌÈÎfi Û‡ÛÙËÌ· (fluidics system) ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ‰‡Ô

˘‰Ú·˘ÏÈÎ¿ Î˘ÎÏÒÌ·Ù·. ΔÔ ÚÒÙÔ Î‡ÎÏˆÌ· ÚÔÛÚÔÊ¿ ·fi ÙÔÓ ‰ÔÎÈÌ·ÛÙÈ-

Îfi ÛˆÏ‹Ó· ÙÔ ˘fi ÂÍ¤Ù·ÛË ÛˆÌ·ÙÈ‰È·Îfi/Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÂÓ·ÈÒÚËÌ· Î·È ÙÔ ÚÔ-

ˆıÂ› ˘fi ›ÂÛË ÚÔ˜ ÌÈ· ¯Ô·ÓÔÂÈ‰‹ Î·Ù·ÛÎÂ˘‹ (flow cell=Î˘„¤ÏË ÚÔ‹˜ ‹

flow chamber=ı·Ï·Ì›ÛÎÔ ÚÔ‹˜ ‹ nozzle=·ÎÚÔÊ‡ÛÈÔ) (∂ÈÎ. 9). ΔÔ ‰Â‡ÙÂ-

ÚÔ ˘‰Ú·˘ÏÈÎfi Î‡ÎÏˆÌ· ·Ó·ÚÚÔÊ¿ ·fi ÙÔ ·ÔıËÎÂ˘ÙÈÎfi ‰Ô¯Â›Ô ¤Ó· Ú˘ıÌÈ-

ÛÙÈÎfi ÈÛfiÙÔÓÔ ‰È¿Ï˘Ì· Ô˘ Â›Ó·È ÙÔ ÂÚÈ‚¿ÏÏÔÓ ˘ÁÚfi (sheath fluid). ΔÔ

˘ÁÚfi ·˘Ùfi ‰ÈÔ¯ÂÙÂ‡ÂÙ·È ˘fi ›ÂÛË ÛÙËÓ Î˘„¤ÏË ÚÔ‹˜ Î·È ·˘Ùfi ¤¯ÂÈ ˆ˜ ·Ô-

Ù¤ÏÂÛÌ· ÙË ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ÙÔ˘ Ê·ÈÓÔÌ¤ÓÔ˘ Bernoulli ‰ËÏ·‰‹ Ë ÚÔ‹ ÙÔ˘ ˘ÁÚÔ‡

‰È·Ì¤ÛÔ˘ ÙË˜ Î˘„¤ÏË˜ Ó· Á›ÓÂÙ·È ÛÂ ÔÌfiÎÂÓÙÚÂ˜ ÛÙÔÈ‚¿‰Â˜ ÎÂÓÙÚÔ·ÍÔÓÈÎ¿

Êı›ÓÔ˘Û·˜ ›ÂÛË˜. ΔÔ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÂÓ·ÈÒÚËÌ· (sample stream) ‰È¤Ú¯ÂÙ·È

Î·Ù¿ Ì‹ÎÔ˜ ÙÔ˘ ÎÂÓÙÚÈÎÔ‡ ¿ÍÔÓ· ·˘Ù‹˜ ÙË˜ ÚÔ‹˜ fiÔ˘ Ë ›ÂÛË ¤¯ÂÈ ÙËÓ ¯·-

ÌËÏfiÙÂÚË ÙÈÌ‹. ƒ˘ıÌ›˙ÔÓÙ·˜ Î·Ù¿ÏÏËÏ· ÙÈ˜ Û¯ÂÙÈÎ¤˜ Ù·¯‡ÙËÙÂ˜ ÙÔ˘ ÂÚÈ-

‚¿ÏÏÔÓÙÔ˜ ˘ÁÚÔ‡ Î·È ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÂÓ·ÈˆÚ‹Ì·ÙÔ˜ ÌÔÚÂ› Ó· ‰È·ÌÔÚÊˆ-

53

ıÂ› Ë ‰È¿ÌÂÙÚÔ˜ ÙÔ˘ ÎÂÓÙÚÈÎÔ‡ ¿ÍÔÓ· ÚÔ‹˜ ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ó· ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Â› ÛÙË

‰È¿ÌÂÙÚÔ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ, ÁÂÁÔÓfi˜ Ô˘ Ù· ·Ó·ÁÎ¿˙ÂÈ Ó· ‰È·Ù¿ÛÛÔÓÙ·È ÙÔ

¤Ó· ›Ûˆ ·fi ÙÔ ¿ÏÏÔ (hydrodynamic focucing= ˘‰ÚÔ‰˘Ó·ÌÈÎ‹ ÂÛÙ›·ÛË)

Î·È Ó· ‰È¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÙÔ Ú‡Á¯Ô˜ ÙË˜ Î˘„¤ÏË˜ ÌÂ Ù·¯‡ÙËÙ· 3000-10000 Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ·Ó¿ ‰Â˘ÙÂÚfiÏÂÙÔ.107,108

‚. OÙÈÎfi Û‡ÛÙËÌ·

∫·ıÒ˜ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· ‰È¤Ú¯ÔÓÙ·È ÛÂ ÌÔÓ‹ÚË ‰È¿Ù·ÍË ·fi ÙËÓ Î˘„ÂÏ›‰·

ÚÔ‹˜ ÚÔÛ›ÙÂÈ ÛÂ ·˘Ù¿ Î¿ıÂÙ· ÌÈ· ‰¤ÛÌË ÊˆÙfi˜ (∂ÈÎ. 9). OÈ ÊˆÙÂÈÓ¤˜

ËÁ¤˜ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ·Ú¯ÈÎ¿ ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ‹Ù·Ó Ï¿-

ÌÂ˜ ˘‰Ú·ÚÁ‡ÚÔ˘ ÌÂÚÎÔ˘Ú›Ô˘ ‹ ÍÂÓ›Ô˘ ˘„ËÏ‹˜ ›ÂÛË˜, Ë ÊˆÙÂÈÓ‹ ·ÎÙÈÓo-

‚ÔÏ›· ÙˆÓ ÔÔ›ˆÓ ‰ÂÓ ‹Ù·Ó ÈÎ·ÓÔÔÈËÙÈÎ‹. ∞ÚÁfiÙÂÚ· ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËıËÎ·Ó

ËÁ¤˜ ·ÎÙ›ÓˆÓ Laser. ™Ù· Û‡Á¯ÚÔÓ· Î˘ÙÙ·ÚfiÌÂÙÚ· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ·Ô-

ÎÏÂÈÛÙÈÎ¿ Ï¤ÔÓ ËÁ¤˜ LASER ÂÂÈ‰‹ ‰›ÓÔ˘Ó ÌÔÓÔ¯ÚˆÌ·ÙÈÎ¤˜, ÏÂÙ¤˜, Ô-

Ï‡ ÈÛ¯˘Ú¤˜, ÛÙ·ıÂÚ¤˜ Î·È Â‡ÎÔÏ· ‰È·¯ÂÈÚ›ÛÈÌÂ˜ ‰¤ÛÌÂ˜ ÊˆÙfi˜. Δ· ¯·Ú·-

ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ ·˘Ù¿ ÙÔ˘ ÊˆÙfi˜ ·fi ËÁ¤˜ LASER ‰ÈÂ˘ÎÔÏ‡ÓÔ˘Ó ÙËÓ ÂÛÙ›·ÛË

ÈÎ·ÓÔÔÈËÙÈÎ‹˜ ÊˆÙÂÈÓ‹˜ ÂÓ¤ÚÁÂÈ·˜ ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‰È¤Ú¯ÔÓÙ·È ÌÂ ÌÂÁ¿-

ÏË Ù·¯‡ÙËÙ· ‰È· Ì¤ÛÔ˘ ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜.109

54

EÈÎfiÓ· 9. ∏ Î˘„¤ÏË ÚÔ‹˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜.

Κυτταρικόεναιώρημα

Περιβάλλονυγρό τηςκυψέλης

Περιβάλλονυγρό τηςκυψέλης

Kλιμάκωσηταχύτητας

Moνήρηςκυτταρική ροή

Συστήματαφθορισμού

ΕστιασμένηδέσμηLASER

50-300μm

10m/sec3000-10.000 events/sec

Purdue University Cytometry Laboratories

Kυψέλη (θαλαμ ίσκος ) ροής

OÈ LASER ‹ ÂÓÈÛ¯˘Ù¤˜ ÊˆÙfi˜ ÁÈ· ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›· ÂÍ·Ó·ÁÎ·ÛÌ¤ÓË˜ ÂÎ-

ÔÌ‹˜ (Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation) ÂÚÈ¤-

¯Ô˘Ó:

– ÙÔ ‰Ú·ÛÙÈÎfi ˘ÏÈÎfi (ÈÔÓÈÛÌ¤ÓÔ ·¤ÚÈÔ, ÊıÔÚ›˙ÔÓ ˘ÁÚfi, ÛÙÂÚÂfi ÎÚ‡ÛÙ·ÏÏÔ

Î·.) ·fi ÙÔ ÔÔ›Ô ·›ÚÓÔ˘Ó ÙÔ fiÓÔÌ¿ ÙÔ˘˜.

– ¤Ó· Û‡ÛÙËÌ· ·fi ‰‡Ô ·Ú¿ÏÏËÏ· Î¿ÙÔÙÚ· Ô˘ ·ÓÙ·Ó·ÎÏÔ‡Ó ¤ÓÙÔÓ·

ÌÂÙ·Í‡ ÙÔ˘˜ ÙÔ Êˆ˜ Î·È ÂÈÙÚ¤Ô˘Ó Ó· ‰È·Ê‡ÁÂÈ ¤Ó· ÌÈÎÚfi ÔÛÔÛÙfi

·fi ¤Ó· ÂÈ‰ÈÎfi ÎÂÓfi.

– ÙËÓ ËÁ‹ ÂÓ¤ÚÁÂÈ·˜ Ô˘ ÔÈÎ›ÏÂÈ ·Ó¿ÏÔÁ· ÌÂ ÙÔ ‰Ú·ÛÙÈÎfi ˘ÏÈÎfi (ËÏÂ-

ÎÙÚÔÌ·ÁÓËÙÈÎ‹, Êˆ˜, ËÏÂÎÙÚÈÎfi ÚÂ‡Ì· Î·.).

∏ ÈÛ¯‡˜ ÙˆÓ ËÁÒÓ LASER ÌÂÙÚ¿Ù·È ÛÂ mWatts/cm2 Î·È ÌÔÚÂ› Ó·

Î˘Ì·›ÓÂÙ·È ·fi 0.5mV (¯·ÌËÏ‹˜ ÈÛ¯‡Ô˜) ¤ˆ˜ Î·È 5.0W (˘„ËÏ‹˜ ÈÛ¯‡Ô˜). H

¯Ú‹ÛË LASER ˘„ËÏ‹˜ ÈÛ¯‡Ô˜ Ô˘ ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Â› ÛÂ ÌÂÁ¿ÏË ¤ÓÙ·ÛË ÚÔÛ›-

ÙÔ˘Û·˜ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ ÌÔÚÂ› Ó· ·‰Ú·ÓÔÔÈ‹ÛÂÈ ÌfiÚÈ· ÊıÔÚ›˙Ô˘Û·˜ Ô˘-

Û›·˜ ÌÂ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙËÓ ·fiÛ‚ÂÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ (Bleaching). ∂›ÛË˜, Ì·˙›

ÌÂ ÙËÓ ÂÓ›Û¯˘ÛË ÙÔ˘ ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÂÓÈÛ¯‡ÂÙ·È ÔÏÏ·Ï¿ÛÈ· Î·È Ô ·˘-

ÙÔÊıÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· Ó· Î·Ï‡ÙÂÙ·È Ô ·ÛıÂÓ‹˜ ÊıÔ-

ÚÈÛÌfi˜ Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÂÈ ·fi ÌÈÎÚfi ·ÚÈıÌfi ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿-

ÚÔ˘ (ÌÂÚÈÎ¤˜ ¯ÈÏÈ¿‰Â˜ ÌfiÚÈ·). °È’ ·˘Ùfi Â›Ó·È ÚÔÙÈÌfiÙÂÚË Ë ¯Ú‹ÛË ·Ô-

ÎÏÂÈÛÙÈÎ¿ LASER ¯·ÌËÏ‹˜ ÈÛ¯‡Ô˜ ÛÂ fiÏÔ ÙÔ Ê¿ÛÌ· Ì‹ÎÔ˘˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ Ô˘

··ÈÙÂ›Ù·È ÁÈ· ÙÈ˜ ÎÏÈÓÈÎ¤˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜.110

μ·ÛÈÎfi ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎfi ÙˆÓ LASER Â›Ó·È ÙÔ Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ ÙË˜ ·ÎÙÈ-

ÓÔ‚ÔÏ›·˜ Ô˘ ÂÎ¤ÌÔ˘Ó Î·È Ô˘ Î˘Ì·›ÓÂÙ·È ÌÂÙ·Í‡ 400-600nm. ∏ ÂÈÏÔ-

Á‹ ÙË˜ ËÁ‹˜ LASER ¤¯ÂÈ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ Ê¿ÛÌ· ‰È¤ÁÂÚÛË˜ ÙˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯Úˆ-

Ì¿ÙˆÓ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ˆ˜ ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤˜. Œ¯ÔÓÙ·˜ ˘fi„Ë fiÙÈ ÔÈ ÊıÔÚ›-

˙Ô˘ÛÂ˜ ·˘Ù¤˜ ÂÓÒÛÂÈ˜ ‰ÈÂÁÂ›ÚÔÓÙ·È ÛÂ ¤Ó· ·˘ÛÙËÚ¿ ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤ÓÔ Ê¿ÛÌ·

ËÏÂÎÙÚÔÌ·ÁÓËÙÈÎ‹˜ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ ÂÈÏ¤ÁÂÙ·È Ë Î·Ù¿ÏÏËÏË ËÁ‹. ªÂÚÈÎ¤˜

·fi ÙÈ˜ LASER Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Â›Ó·È ÔÈ ËÏ›Ô˘-Ó¤Ô˘, ·ÚÁÔ‡, ÎÚ˘-

ÙÔ‡, ËÏ›Ô˘-Î·‰Ì›Ô˘ Î·. ∏ ÈÔ ‰È·‰Â‰ÔÌ¤ÓË Â›Ó·È Ë ËÁ‹ LASER ÈfiÓÙˆÓ

·ÚÁÔ‡ Ô˘ ÂÎ¤ÌÂÈ ÛÙ· 488nm Â›ÙÂ ·ÂÚfi„˘ÎÙË Â›ÙÂ ˘‰Úfi„˘ÎÙË. ΔÂÏÂ˘-

Ù·›·, ÛÙ· ÓÂÒÙÂÚ· Û˘ÛÙ‹Ì·Ù· ÂÌÊ·Ó›˙ÂÙ·È Ë LASER ˙·ÊÂÈÚ›Ô˘ ÛÙÔ ›‰ÈÔ

Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜, Ë ÔÔ›· ıÂˆÚÂ›Ù·È Î·Ï‡ÙÂÚË˜ ·fi‰ÔÛË˜ Î·È ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚÔ˘

¯ÚfiÓÔ˘ ˙ˆ‹˜ ·fi fiÙÈ ·˘Ù‹ ÙÔ˘ ·ÚÁÔ‡. ∂›ÛË˜, ÌÈ· ·fi ÙÈ˜ ÂÍÂÏ›ÍÂÈ˜ ÙË˜ ÙÂ-

ÏÂ˘Ù·›·˜ ÂÓÙ·ÂÙ›·˜ Â›Ó·È Ë ¯Ú‹ÛË ÂÚÈÛÛfiÙÂÚˆÓ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡ Ì‹ÎÔ˘˜

Î‡Ì·ÙÔ˜ LASER ÛÙÔ ›‰ÈÔ fiÚÁ·ÓÔ, fiˆ˜ Ë ÚÔÛı‹ÎË ‰Â‡ÙÂÚË˜ LASER Û˘-

Ó‹ıˆ˜ ÂÚ˘ıÚ¿˜ ÛÙ· 635nm Î·È ÙÂÏÂ˘Ù·›·, Ë ÚÔÛı‹ÎË Î·È ÙÚ›ÙË˜ ˘ÂÚÈÒ-

‰Ô˘˜ ‹ ÈÒ‰Ô˘˜ (UV ‹ violet). ªfiÓÔ ÛÂ ÂÚÂ˘ÓËÙÈÎ¿ fiÚÁ·Ó· Â›Ó·È ‰˘Ó·ÙfiÓ

55

Ó·ÂÎ¤ÌÔÓÙ·È Ù¤ÛÛÂÚÈ˜ ·ÓÂÍ¿ÚÙËÙÂ˜ ·ÎÙ›ÓÂ˜ ÌÂ ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË˜

Ì¤¯ÚÈ ÔÎÙÒ Û˘Á¯ÚfiÓˆ˜ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ. ªÂ ·˘ÙfiÓ ÙÔÓ ÙÚfiÔ

‰›ÓÂÙ·È Ë ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· Ó· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÂÚÈÛÛfiÙÂÚ· ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù·

ÌÂ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎ¿ Ê¿ÛÌ·Ù· ‰È¤ÁÂÚÛË˜ ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ó· ÌÂÏÂÙÒÓÙ·È Û˘Á¯ÚfiÓˆ˜

ÂÚÈÛÛfiÙÂÚÂ˜ ·Ú¿ÌÂÙÚÔÈ ÛÙÔ ›‰ÈÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ (ÔÏ˘¯ÚˆÌ·ÙÈÎ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

ÙÚ›·). ¶·Ú’ fiÏ· ·˘Ù¿ ‰ÂÓ ˘¿Ú¯Ô˘Ó ÎÏÈÓÈÎ¤˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜ ÌÂ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË

·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÂÚÈÛÛfiÙÂÚˆÓ ·fi Ù¤ÛÛÂÚ· ·ÓÙÈÁfiÓ· ÛÙÔ ›‰ÈÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ.

∏ ÚfiÛÙˆÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER ¿Óˆ ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· ÚÔÎ·ÏÂ› ÙÔ

Ê·ÈÓfiÌÂÓÔ ÙÔ˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡ ÙÔ˘ ÊˆÙfi˜ (ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜ Î·Ù¿ Reyleigh-Debye).

∏ ¤ÓÙ·ÛË ÙÔ˘ ÛÎÂ‰·˙fiÌÂÓÔ˘ ÊˆÙfi˜ Ô˘ ÂÎ¤ÌÂÙ·È Î·Ù¿ ÙË ÊÔÚ¿ ÙË˜ Êˆ-

ÙÂÈÓ‹˜ ‰¤ÛÌË˜ (ÚfiÛıÈÔ˜ ‹ Â˘ı‡ÁÚ·ÌÌÔ˜ ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜, forward scatter-FSC,

forward angle light scatter-FALS) Â›Ó·È ·Ó¿ÏÔÁË ÙÔ˘ ÌÂÁ¤ıÔ˘˜-fiÁÎÔ˘ ÙˆÓ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ, ÂÓÒ Ë ¤ÓÙ·ÛË ÙÔ˘ ÛÎÂ‰·˙fiÌÂÓÔ˘ ÊˆÙfi˜ Ô˘ ÂÎ¤ÌÂÙ·È Î·Ù¿

ÔÚı‹ ÁˆÓ›· ÚÔ˜ ÙË ÊÔÚ¿ ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ (Ï¿ÁÈÔ˜ ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜, side scatter-

SSC) Û¯ÂÙ›˙ÂÙ·È ÌÂ ÙÔ Û¯‹Ì· Î·È ÙËÓ ÔÙÈÎ‹ ÔÌÔÈÔÁ¤ÓÂÈ· (ÎÔÎÎ›ˆÛË) ÙˆÓ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (∂ÈÎ. 10). °È· ÙÔÓ ÚfiÛıÈÔ ÛÎÂ‰·ÛÌfi Ú¤ÂÈ Ó· ·Ó·ÊÂÚıÂ›, fiÙÈ Ë

ÊˆÙÔ‰›Ô‰Ô˜ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÂÙ·È ·ÎÚÈ‚Ò˜ ·¤Ó·ÓÙÈ ·fi ÙË ‰¤ÛÌË ÙË˜ ÊˆÙÂÈÓ‹˜

·ÎÙ›Ó·˜ ·ÔÊÚ¿ÛÛÂÙ·È ÌÂÚÈÎÒ˜ ·fi ÌÈ· ÛÙ‹ÏË (obscuration bar) ÌÂ ·ÔÙ¤-

ÏÂÛÌ· Ó· ÌËÓ ·ÓÈ¯ÓÂ‡ÂÈ ÙËÓ Î·Ù’ Â˘ıÂ›·Ó ÚÔÛ›ÙÔ˘Û· ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›· ·ÏÏ¿

ÌfiÓÔ ·˘Ù‹ Ô˘ ÛÎÂ‰¿ÛÙËÎÂ ÛÂ ÔÏ‡ ÌÈÎÚ‹ ÁˆÓ›· (0.5-3°). ∂›ÛË˜, Ô Úfi-

ÛıÈÔ˜ ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜ ÂÎÙfi˜ ·fi ÙÔ Ì¤ÁÂıÔ˜ ÂÍ·ÚÙ¿Ù·È Î·È ·fi ÙÔÓ ‰Â›ÎÙË ‰È¿-

ıÏ·ÛË˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ. ŒÙÛÈ, fiÙ·Ó Ô ‰Â›ÎÙË˜ ‰È¿ıÏ·ÛË˜ ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ‰È·Ê¤ÚÂÈ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ·fi ·˘ÙfiÓ ÙÔ˘ ˘ÁÚÔ‡ Ô˘ Ù· ÂÚÈ‚¿ÏÏÂÈ, ÌÔÚÂ›

Ó· ÂÌÊ·Ó›˙ÔÓÙ·È ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚ· ·fi ¿ÏÏ· Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ›‰ÈÔ˘ ÌÂÁ¤ıÔ˘˜ Ô˘ Ô

‰Â›ÎÙË˜ ‰È¿ıÏ·Û‹˜ ÙÔ˘˜ ‰ÂÓ ‰È·Ê¤ÚÂÈ ·fi ·˘ÙfiÓ ÙÔ˘ ÂÚÈ‚¿ÏÏÔÓÙÔ˜ ˘ÁÚÔ‡

(¯. Ù· ÓÂÎÚ¿ Î‡ÙÙ·Ú· Ê·›ÓÔÓÙ·È ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚ· ·fi Ù· ˙ÒÓÙ· ÛÙÔ ÌÈÎÚÔÛÎfi-

ÈÔ ÂÓÒ ÛÙÔ Î˘ÙÙ·ÚfiÌÂÙÚÔ ¤¯Ô˘Ó ÙËÓ ·ÓÙ›ıÂÙË ·ÎÚÈ‚Ò˜ ÂÌÊ¿ÓÈÛË ÏfiÁˆ

‰È·Ù·Ú·¯‹˜ ÛÙËÓ ‰È·ÂÚ·ÙfiÙËÙ· ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÙÔ˘˜).108,111-112

∂¿Ó ¤¯ÂÈ ÚÔËÁËıÂ› Û‡Ó‰ÂÛË, ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‹ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚÈˆÓ ÌÔÚ›ˆÓ (Û˘ÛÙ·ÙÈÎÒÓ) ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÊıÔÚÈÔÛËÌ·ÛÌ¤Ó· ÌÔÓÔÎÏˆ-

ÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·, ÙfiÙÂ Ë ÚfiÛÙˆÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER ÚÔÎ·ÏÂ› ÙËÓ ÂÎ-

ÔÌ‹ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û·˜ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ (∂ÈÎ. 10). ΔÔ Ê·ÈÓfiÌÂÓÔ ÙÔ˘ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

·Ó·Ê¤ÚÂÙ·È ÛÙËÓ È‰ÈfiÙËÙ· ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ Ô˘ÛÈÒÓ Ó· ÂÎ¤ÌÔ˘Ó Êˆ˜ ÔÚÈÛÌ¤-

ÓÔ˘ Ì‹ÎÔ˘˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ fiÙ·Ó ‰ÈÂÁÂÚıÔ‡Ó ·fi Êˆ˜ ÌÈÎÚfiÙÂÚÔ˘ Ì‹ÎÔ˘˜ Î‡Ì·-

ÙÔ˜. ∏ ¤ÓÙ·ÛË ÙË˜ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û·˜ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ ÂÍ·ÚÙ¿Ù·È ·fi ÙÔ ÔÛfi ÙÔ˘

·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ Ô˘ ·ÓÙ¤‰Ú·ÛÂ ÌÂ ÙÔ ˘fi ÂÍ¤Ù·ÛË ·ÓÙÈÁfiÓÔ Î·È ÙÔÓ ·ÚÈıÌfi

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·Ùfi˜ Ô˘ Ê¤ÚÔ˘Ó ÙÔ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ÌfiÚÈÔ.

Δ· ÊˆÙÂÈÓ¿ Û‹Ì·Ù· Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È (Â›ÙÂ ÏfiÁˆ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡ Â›ÙÂ ÏfiÁˆ

56

ÊıÔÚÈÛÌÔ‡) ·fi ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER ÌÂ Ù· Î‡ÙÙ·Ú·, ÌÂ ÙË

‚Ô‹ıÂÈ· ÂÓfi˜ ÔÏ‡ÏÔÎÔ˘ Û˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜ Ê·ÎÒÓ, Ê›ÏÙÚˆÓ Î·È Î·ÙfiÙÚˆÓ

Ô˘ ÂÈÙÚ¤Ô˘Ó ÙËÓ ÂÎÏÂÎÙÈÎ‹ ‰È¤ÏÂ˘ÛË ‹ ·ÓÙ·Ó¿ÎÏ·ÛË ÊˆÙfi˜ Û˘ÁÎÂÎÚÈ-

57

EÈÎfiÓ· 10. (·) Δ·˘Ùfi¯ÚÔÓÔ˜ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙÂÛÛ¿ÚˆÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ, ÌÂÙ¿ ÙËÓ Úfi-ÛÙˆÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER ÛÂ Î¿ıÂ ¤Ó· Î‡ÙÙ·ÚÔ ÙË˜ ÌÔÓ‹ÚÔ˘˜ ‰È¿Ù·ÍË˜ Ô˘ ‰È¤Ú-¯ÂÙ·È ‰È·Ì¤ÛÔ˘ ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜. (‚) ™ÙÈÎÙfiÁÚ·ÌÌ· ÛÙÔ ÔÔ›Ô Ê·›ÓÂÙ·È Ë Î·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂ ‚¿ÛË Ù· ÛÎÂ‰·ÛÙÈÎ¿ ÙÔ˘˜ ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ (Úfi-ÛıÈÔ˜ Î·È Ï¿ÁÈÔ˜ ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜). ¢È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È 3 ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ› ÏËı˘ÛÌÔ› ¯ˆÚ›˜ Î·Ì-Ì›· ÂÈÏ¤ÔÓ ÂÂÍÂÚÁ·Û›·, fiˆ˜ .¯. ÂÈÛÙÔ›‚·ÍË ÛÂ ‰È·‚¿ıÌÈÛË ˘ÎÓfiÙËÙ·˜ ÌÂFicol. (Á) ∫·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂÙ¿ ·fi ÂÈÛ‹Ì·ÓÛË ÌÂ·ÓÙÈ-CD3 Î·È ·ÓÙÈ-CD4 ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤Ó· ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜. D1: CD4+, D2: CD3+CD4+, D3: CD3-CD4-, D4: CD3+.

∂ÈÊ·ÓÂÈ·Î¿ ÌfiÚÈ·Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·ÊıÔÚÈÔÛËÌ·ÛÌ¤Ó·

¶Ú¿ÛÈÓÔÊıÔÚÈÛÌfi

∂Ú˘ıÚfiÊıÔÚÈÛÌfi

¶ÚfiÛıÈÔÛÎÂ‰·ÛÌfi

¢¤ÛÌËLASER

ª¤ÁÂıÔÎ˘ÙÙ¿ÚÔ˘

¶Ï¿ÁÈÔÛÎÂ‰·ÛÌfi

∫ÔÎÎ›ˆÛËÎ˘ÙÙ¿ÚÔ˘

ªÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·

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64)

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D1

D1 D2

D3 D4

0.5% 34.7%

38.9% 25.9%

CD3 FITC

Ì¤ÓÔ˘ Ì‹ÎÔ˘˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ Û˘ÏÏ¤ÁÔÓÙ·È Î·È ÂÎÙÚ¤ÔÓÙ·È ÚÔ˜ ÙËÓ Î·ÙÂ‡ı˘ÓÛË

Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÔÈ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯ÔÈ ÊˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤˜ (∂ÈÎ. 11). MÈ· ·fi ÙÈ˜ Î·È-

ÓÔÙÔÌ›Â˜ ÛÙË Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· Â›Ó·È Ë ¯Ú‹ÛË ÔÙÈÎÒÓ ÈÓÒÓ ÁÈ· ÙË ÌÂÙ·ÊÔÚ¿

ÙË˜ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ ÙË˜ ËÁ‹˜ LASER ÛÙÔ˘˜ ÊˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤˜ ‰ÈfiÙÈ Ë ÌÂÙ·ÊÔ-

Ú¿ ÛÙÔÓ ·¤Ú· ÌÔÚÂ› Ó· ÚÔÎ·Ï¤ÛÂÈ ÚÔ‚Ï‹Ì·Ù· ÈÔÓÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÛˆÌ·ÙÈ-

‰›ˆÓ Î·È Ó· ¯ÚÂÈ¿˙ÂÙ·È Â˘ı˘ÁÚ¿ÌÌÈÛË ÙÔ˘ ÔÚÁ¿ÓÔ˘.

ø˜ ÊˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤˜ (photodetectors) ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ‚ÔÏÙ·˚ÎÔ›

ÊˆÙÔ‰›Ô‰ÔÈ Î˘Ú›ˆ˜ ÁÈ· ÙÔ Û‹Ì· ÙÔ˘ ÚfiÛıÈÔ˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡ Ô˘ Â›Ó·È Û¯ÂÙÈ-

Î¿ ÈÛ¯˘ÚfiÙÂÚÔ Î·È ÊˆÙÔÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÙ¤˜ (photomultipliers, PMTs) Ô˘

Â›Ó·È ÂÚÈÛÛfiÙÂÚÔ Â˘·›ÛıËÙÔÈ ÛÙ· ·ÛıÂÓ¤ÛÙÂÚ· ÊˆÙÂÈÓ¿ Û‹Ì·Ù·. OÈ Êˆ-

ÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤˜ ÌÂÙ·ÙÚ¤Ô˘Ó Ù· ÊˆÙÂÈÓ¿ Û‹Ì·Ù· ÛÂ ËÏÂÎÙÚÈÎÔ‡˜ ·ÏÌÔ‡˜

·Ó¿ÏÔÁË˜ ¤ÓÙ·ÛË˜. ∂ÈÏ¤ÔÓ ÂÂÈ‰‹ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÔ‡Ó ÌÂ ËÏÂÎÙÚÈÎfi ÚÂ‡Ì·

ÌÔÚÂ› Ó· ·˘ÍËıÂ› Ë Â˘·ÈÛıËÛ›· ÙÔ˘˜ Î·È Ó· ÂÓÈÛ¯˘ıÂ› ÙÔ ÂÍÂÚ¯fiÌÂÓÔ ËÏÂ-

ÎÙÚÈÎfi Û‹Ì· ÌÂ ·‡ÍËÛË ÙË˜ Ù¿ÛË˜ ÙÔ˘ ÂÊ·ÚÌÔ˙fiÌÂÓÔ˘ ÚÂ‡Ì·ÙÔ˜ ·ÏÏ¿ Î·È

58

∂ÈÎfiÓ· 11. ¢È¿Ù·ÍË ÙÔ˘ ÔÙÈÎÔ‡ Û˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜.

Ανιχνευτήςπρώτου

φθοριοχρώματος

530 /30

488/10

585/42

SSC

FL1

FL2

FL4

FL3

661/16

488/10Ανιχνευτήςπρόσθιουσκεδασμού

670LP

Διαχωριστής οπτικήςδέσμης (90/10)

DM 560SPΔιχροϊκό κάτοπρο (560nm)

Συλλεκτικοίφακοί

Συλλεκτικοίφακοί

Half-Mirror

FlowCell

Red Diode Laser~ 635 nmLASER

Beam Combiner488 nm

Blue Laser

Aνιχνευτήςπλάγιου

σκεδασμού

Aνιχνευτήςδεύτερου


Aνιχνευτήςτέταρτου


Aνιχνευτήςτρίτου


DM 640LP

ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ· Î·Ù¿ÏÏËÏˆÓ ÂÓÈÛ¯˘ÙÒÓ Ô˘ ÚÔÛ‰›‰Ô˘Ó ÁÚ·ÌÌÈÎ‹ ‹ ÏÔÁ·-

ÚÈıÌÈÎ‹ ÂÓ›Û¯˘ÛË (amplification).

ºıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ‹ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù·

OÈ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ‹ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È

ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ¯·ÎÙËÚ›˙ÔÓÙ·È ·fi:

– ΔÔ Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ ·fi ÙÔ ÔÔ›Ô ‰ÈÂÁÂ›ÚÔÓÙ·È Î·È ÙÔ Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ ÛÙÔ

ÔÔ›Ô ÂÎ¤ÌÔ˘Ó (Stoke’s Shift)

– ΔËÓ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· Î‚¿ÓÙˆÛË˜ (quantum efficiency)

– ΔËÓ ÂÎÏÂÎÙÈÎ‹ ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÙÔ˘˜ È‰ÈfiÙËÙ· (Û¯ËÌ·ÙÈÛÌfi˜ ÔÌÔÈoÔÏÈÎÒÓ ‰Â-

ÛÌÒÓ ÌÂ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ‹ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ fiˆ˜ ÙÔ ƒropidium

iodide (ƒπ) Ô˘ Û˘Ó‰¤ÔÓÙ·È ÂÎÏÂÎÙÈÎ¿ ÌÂ ÙÔ DNA)

– ΔËÓ ÙÂ¯ÓÈÎ‹ ÌÔÓÈÌÔÔÈ‹ÛÂˆ˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (fixation) ÚÈÓ ÙË ¯ÚÒÛË

– TËÓ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· Ó· ÌËÓ Â›Ó·È ÂÈ‚Ï·‚Â›˜ ÁÈ· ÙÈ˜ Ê˘ÛÈÎ¤˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›Â˜ ÙˆÓ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (˙ˆ˚Î¤˜ ¯ÚÒÛÂÈ˜) Ô˘ Â›Ó·È ÔÏ‡ ÛËÌ·ÓÙÈÎfi fiÙ·Ó Á›ÓÂÙ·È ‰È·-

ÏÔÁ‹ (sorting) ˙ˆÓÙ·ÓÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÌÂÏ¤ÙË.

∏ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË ÛÙËÓ ÈÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹ ÙË˜ ÌÔÚÊ‹ (fluorescein iso-

thiocyanate, FITC) Â›Ó·È Ë Û˘ÓËı¤ÛÙÂÚ· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÌÂÓË ÊıÔÚ›˙Ô˘Û·

¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÌÂ ÂÚÈÔ¯‹ ‰ÈÂÁ¤ÚÛÂˆ˜ ÛÙ· 488nm (ÌÂ Ú¿ÛÈÓÔ ÊıÔÚÈÛÌfi) Ô˘

Û˘Ì›ÙÂÈ ÌÂ ÙÔ Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ ÙÔ˘ LASER ·ÚÁÔ‡ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÂÙ·È ÛÙ· Â-

ÚÈÛÛfiÙÂÚ· fiÚÁ·Ó· Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜. ÕÏÏÂ˜ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ Ô˘

Â›ÛË˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Û˘¯Ó¿ Â›Ó·È Ë ÈÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹ ÙÂÙÚ·ÌÂı˘ÏÚÔ‰·-

Ì›ÓË (tetramethylrhodamine isothiocyanate, TRITC) ÌÂ ÎfiÎÎÈÓÔ ÊıÔÚÈÛÌfi

Î·È ÔÈ Ê˘ÎÔ¯ÔÏÔÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ (phycobiliproteins) fiˆ˜ Ë Ê˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË (R-

ƒ∂) Î·È Ë Ê˘ÎÔÎ˘·Ó›ÓË (PC) Ô˘ ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÔÓÙ·È ·fi È‰È·›ÙÂÚ· ÌÂÁ¿ÏË

‰È·ÛÔÚ¿ ÙÈÌÒÓ ÛÙ· Ê¿ÛÌ·Ù· ‰È¤ÁÂÚÛË˜ Î·È ÂÎÔÌ‹˜. ∫·ıÒ˜ ÔÈ ÂÊ·ÚÌÔ-

Á¤˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÚ›·˜ Á›ÓÔÓÙ·È ÈÔ Û‡ÓıÂÙÂ˜ ‰ËÌÈÔ˘ÚÁÂ›Ù·È Ë ·Ó¿ÁÎË ÁÈ·

·Ó¿Ù˘ÍË Ó¤ˆÓ ¯ÚˆÛÙÈÎÒÓ ÌÂ ¤ÓÙÔÓÔ ÊıÔÚÈÛÌfi Î·È ¯·ÌËÏfi ÌË ÂÈ‰ÈÎfi ÊıÔ-

ÚÈÛÌfi Î·Ù¿ ÙË Û‡Ó‰ÂÛ‹ ÙÔ˘˜ ÌÂ Ù· Î‡ÙÙ·Ú·. ΔÔ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· Â›Ó·È Ë ·Ó¿-

Ù˘ÍË Î·È ·Ú·ÁˆÁ‹ ¯ÚˆÛÙÈÎÒÓ Ô˘ ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Resonance

Energy Transfer (RET) ‹ Tandem Dyes. OÈ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ·˘Ù¤˜ ·ÔÙÂÏÔ‡ÓÙ·È

·fi ÌÈÎÚ¿ ·ÓfiÚÁ·Ó· ÌfiÚÈ· fiˆ˜ Ë ÈÓ‰Ô‰ÈÎ·Ú‚ÔÎ˘·Ó›ÓË (Cy5) ‹ Ë ÈÓ‰ÔÙÚÈ-

Î·Ú‚ÔÎ˘·Ó›ÓË (Cy7) Ô˘ Â›Ó·È Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂ Ê˘ÎÔ‚ÈÏÈÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ fiˆ˜ Ë

Ê˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË (ƒ∂) ‹ Ë ·ÏÏÔÊ˘ÎÔÎ˘·Ó›ÓË (APC). ◊‰Ë Â›Ó·È ÁÓˆÛÙ¤˜ Î·È

¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ·fi ·˘Ù‹Ó ÙËÓ Î·ÙËÁÔÚ›· ¯ÚˆÛÙÈÎÒÓ Ë Ê˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË-

ÂÚ˘ıÚfi ÙÔ˘ Ù¤Í·˜ (∂CD), Ë Ê˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË-Î˘·Ó›ÓË 5 (PC5), Ë ÚˆÙÂ˝ÓË

ÙË˜ ÂÚÈ‰›ÓË˜-¯ÏˆÚÔÊ‡ÏË˜ (Peridine Chlorophyl Protein, PerCP), Ë Ê˘ÎÔÂ-

Ú˘ıÚ›ÓË-Î˘·Ó›ÓË 7 (PC7), Ë PE-Cy5 Î.¿. Δ· Û˘ÓËı¤ÛÙÂÚ· ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù·

59

60

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ÙÔ˘˜ Î·ıÒ˜ Î·È ÔÈ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Â˜ ËÁ¤˜ LASER Ê·›ÓÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 7 Î·È

ÛÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 12.93

61

∂ÈÎfiÓ· 12. Ã·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ ÙˆÓ Û˘ÓËı¤ÛÙÂÚˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ-Ô‡ÓÙ·È ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Î·È ÔÈ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Â˜ ËÁ¤˜ LASER (L. Herzenberg,Clin Invest Med 2004).

∫ryptonLaser407 nm

ArgonLaser488 nm

DyeLaser595 nm

Excitationspectrum

Emissionspecrtrum

Collection Filter(wavelength/bandpass)

CascadeBlue

Alexa 430

Fluorescein

PE

TRPE

Cy5PE

Cy5.5PE

Cy7PE

Alexa 594

APC

Cy5.5APC

Cy7APC

300 400 500 600 700 800

Wavelehgth (nm)

440/40

540/80

525/50

575/25

630/22

665/30

720/45

785/50

625/40

660/40

705/50

750LP

Á. ∏ÏÂÎÙÚÔÓÈÎfi Û‡ÛÙËÌ·

Δ· ÂÓÈÛ¯˘Ì¤Ó· Û‹Ì·Ù· Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÙÔ˘˜ ÊˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤˜ ÌÂ

ÙË ¯Ú‹ÛË ÂÈ‰ÈÎÒÓ ÌÂÙ·ÙÚÔ¤ˆÓ (analogue to digital converters, ADCs) ÌÂ-

Ù·ÙÚ¤ÔÓÙ·È ÛÂ „ËÊÈ·Î¿ ‰Â‰ÔÌ¤Ó· ÚÔÎÂÈÌ¤ÓÔ˘ Ó· ·Ó·Ï˘ıÔ‡Ó Î·È Ó·

·ÔıËÎÂ˘ÙÔ‡Ó ÛÙÔÓ ÛÎÏËÚfi ‰›ÛÎÔ ÙÔ˘ ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎÔ‡ ˘ÔÏÔÁÈÛÙ‹ ÙÔ˘ Î˘Ù-

Ù·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹. ªÂ ·˘Ùfi ÙÔÓ ÙÚfiÔ, Ù· Û˘ÓÂ¯‹ ·Ó·ÏÔÁÈÎ¿ ËÏÂÎÙÚÈÎ¿ Î‡Ì·Ù·

ÙË˜ Ù¿ÍË˜ ÙˆÓ 0-10 Volt, ÌÂÙ·Ê¤ÚÔÓÙ·È ÛÂ ÌÈ· ÎÏ›Ì·Î· ‰È·ÎÚÈÙÒÓ ‰˘·‰È-

ÎÒÓ ÙÈÌÒÓ Ô˘ ˘Ô‰È·ÈÚÂ›Ù·È ÛÂ ‰È·‡ÏÔ˘˜ (Î·Ó¿ÏÈ· ‹ channels) ·Ó¿ÏÔÁ·

ÌÂ ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË Ô˘ ÂÈÙÚ¤Ô˘Ó ÔÈ ADCs ÌÂÙ·ÙÚÔÂ›˜. ™˘Ó‹ıˆ˜ Ë ·Ó¿Ï˘-

ÛË Â›Ó·È ÙˆÓ 8 ‹ ÙˆÓ 10 bits (‰ËÏ. ÙÔ Û‹Ì· ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi 8 ‹ 10 ·ÓÙ›ÛÙÔÈ-

¯· ·ÏÏËÏÔ˘¯›Â˜ Û˘Ó‰˘·ÛÌÒÓ 0 Î·È 1) Î·È Ë ÎÏ›Ì·Î· ÙˆÓ „ËÊÈÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ

·˘ÙÒÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ ˘Ô‰È·ÈÚÂ›Ù·È ÛÂ 256 (28) ‹ 1024 (210) ‰È·‡ÏÔ˘˜ (Î·Ó¿ÏÈ·)

Ô˘ Ú˘ıÌ›˙ÔÓÙ·È ÌÂ ‚¿ÛË ÙË ÁÚ·ÌÌÈÎ‹ ‹ ÏÔÁ·ÚÈıÌÈÎ‹ ÂÓ›Û¯˘ÛË (amplifica-

tion) Î·È Ô˘ Î·ı¤Ó· ·fi Ù· ÔÔ›· ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Â› ÛÂ ∼40mV(10v/256) ‹

10mV(10V/1024). ™Â Î¿ıÂ Î‡ÙÙ·ÚÔ Ô˘ ·Ó·Ï‡ÂÙ·È, ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Ô‡Ó ÙfiÛ·

bytes ·ÔıËÎÂ‡ÛÈÌË˜ ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎ‹˜ ÏËÚÔÊÔÚ›·˜, fiÛ· Â›Ó·È Ù· Û‹Ì·Ù·

Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÙËÓ ·ÏÏËÏÂ›‰Ú·Û‹ ÙÔ˘ ÌÂ ÙË ‰¤ÛÌË LASER (‰‡Ô

ÛÎÂ‰·ÛÙÈÎ¿ Û‹Ì·Ù· – ÚfiÛıÈÔ˜ Î·È Ï¿ÁÈÔ˜ ÛÎÂ‰·ÛÌfi˜) Î·È ¤Ó· Û‹Ì· ÁÈ·

Î¿ıÂ ÊıÔÚÈfi¯ÚˆÌ·. ∞Ó Ï¿‚Ô˘ÌÂ ˘fi„ÈÓ fiÙÈ, ·Ó¿ ‰Â˘ÙÂÚfiÏÂÙÔ ·Ó·Ï‡Ô-

ÓÙ·È ¯ÈÏÈ¿‰Â˜ Î‡ÙÙ·Ú·, Ô fiÁÎÔ˜ ÙˆÓ ·ÔıËÎÂ‡ÛÈÌˆÓ ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ (list mode

data) Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È Î·Ù¿ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË Â›Ó·È ÙÂÚ¿ÛÙÈÔ˜.

Δ· ‰Â‰ÔÌ¤Ó· ·˘Ù¿, ·ÔıËÎÂ‡ÔÓÙ·È ÌÂ ÂÓÈ·›· ÌÔÚÊ‹ ÌÂ ‚¿ÛË ÙÔ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈ-

Îfi Û‡ÛÙËÌ· FCS (Flow Cytometry Standard, FCS- format) ÛÂ fiÏ· Ù· Û‡Á-

¯ÚÔÓ· Î˘ÙÙ·ÚfiÌÂÙÚ· ÒÛÙÂ Ó· Â›Ó·È ÂÊÈÎÙ‹ Ë ÌÂÙ¤ÂÈÙ· ·Ó¿ÎÙËÛË Î·È ÌÂÏ¤-

ÙË ÙÔ˘˜.

∞ÂÈÎfiÓÈÛË ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ

O ÈÔ Û˘Ó‹ıË˜ ÙÚfiÔ˜ ·ÚÔ˘Û›·ÛË˜ Î·È ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ Â›Ó·È

Ù· ÛÙÈÎÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· (dot plots) ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔ‰È·ÁÚ¿ÌÌ·Ù· Î·È Ù· ÂÚÈÌÂÙÚÈÎ¿‰È·ÁÚ¿ÌÌ·Ù· (contour plots) ‹ ÓÂÊÂÏÔÁÚ¿ÌÌ·Ù·. Δ· ÁÚ·Ê‹Ì·Ù· ·˘Ù¿ ‚ÔË-

ıÔ‡Ó ÛÙË ÌÂÏ¤ÙË ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ ˆ˜ ÚÔ˜ ‰‡Ô ·Ú·Ì¤ÙÚÔ˘˜,

Ô˘ ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Ô‡Ó ÛÙÔ˘˜ ‰‡Ô ¿ÍÔÓÂ˜ ÙÔ˘ ‰È·ÁÚ¿ÌÌ·ÙÔ˜ (∂ÈÎ. 13). ªÂ ÙÔ ÛÙÈ-

ÎÙfiÁÚ·ÌÌ· ÚfiÛıÈÔ˘ Î·È Ï¿ÁÈÔ˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡ Â›Ó·È ÂÊÈÎÙ‹ Ë ‰È¿ÎÚÈÛË ÙˆÓ

ÙÚÈÒÓ ‚·ÛÈÎÒÓ ˘ÔÏËı˘ÛÌÒÓ ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·›Ì·ÙÔ˜ (∂ÈÎ. 14·).

À¿Ú¯ÂÈ Î·È Ë ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ¯¿Ú·ÍË˜/ÔÚÈÔı¤ÙËÛË˜ ÙË˜ ÂÚÈÔ¯‹˜ (gate) Á‡Úˆ

·fi ÙÔÓ ÏËı˘ÛÌfi Ô˘ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÂÈ ÁÈ· ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÌÂÏ¤ÙË ÌÂ

ÙË ¯Ú‹ÛË ÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ‰È¿ÊÔÚ· ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆ-

62

63

∂ÈÎfiÓ· 13. ¢È¿ÊÔÚÔÈ ÙÚfiÔÈ ·ÚÔ˘Û›·ÛË˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎÒÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ.

601000

800

600

400

200

8

50

40

30FS FS

(64 ×

64)

20

45

100 101 102 103

10

0.1 1 10

SS LOG

FS

SS LOG

100 1000 .1 1 10SS LOG

100 1000

FS Lin

FS Lin

CD4 FITC

Στικτόγραμμα ή κυτταροδιάγραμμα(dot plot)

Περιμετρικό διάγραμα ήνεφελόγραμμα (contour plot)

Iστόγραμμα κατανομής συχνοτήτων(histogramm)

Iσομετρική απεικόνιση σε 3 άξονες(isometric plot)

Iσομετρική απεικόνισηπολλών πααμέτρων

Απεικόνιση σε πολύεδρο(diamond view)

0%

Ì¿ÙˆÓ (∂ÈÎ. 14‚). E›ÛË˜ ÙÔ ÏÔÁÈÛÌÈÎfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌ¤ÙÚˆÓ ÂÈÙÚ¤ÂÈ ÙÔÓ

‰È·¯ˆÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÛÙÈÎÙÔÁÚ·ÌÌ¿ÙˆÓ ÛÂ ÙÂÙ·ÚÙËÌfiÚÈ· (·Ó¿Ï˘ÛË ÙÂÙ·ÚÙËÌÔ-

Ú›ˆÓ, quadrants analysis) Ô˘ ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÔ˘Ó Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ Â›Ó·È ıÂÙÈÎ¿

Î·È ·ÚÓËÙÈÎ¿ ÁÈ· Î¿ıÂ ¤Ó· ·fi Ù· ‰‡Ô ÊıÔÚÈÔÛËÌ·ÛÌ¤Ó· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿

·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ¯ˆÚÈÛÙ¿ ‹ Î·È ÁÈ· Ù· ‰‡Ô Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓ· (∂ÈÎ. 15). Δ· ÂÚÈÌÂÙÚÈ-

Î¿ ‰È·ÁÚ¿ÌÌ·Ù· ·ÂÈÎÔÓ›˙Ô˘Ó Ù· ›‰È· ·ÎÚÈ‚Ò˜ ÌÂ Ù· ÛÙÈÎÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· ·Ï-

Ï¿ ·Ô‰›‰Ô˘Ó ÁÚ·ÊÈÎ¿ ÌÂ ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚË Â˘ÎÚ›ÓÂÈ· ÙËÓ ˘ÎÓfiÙËÙ· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ÛÂ Î¿ıÂ ÛËÌÂ›Ô ÙÔ˘ ‰È·ÁÚ¿ÌÌ·ÙÔ˜. ¶ÔÏ˘ÏÔÎfiÙÂÚ· ‰È·ÁÚ¿ÌÌ·Ù·

¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÁÈ· ÙËÓ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË ·ÚÔ˘Û›·ÛË ÂÚÈÛÛfiÙÂÚˆÓ ·fi ‰‡Ô

·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ. ŒÙÛÈ ¤¯Ô˘ÌÂ ÈÛÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·ÂÈÎfiÓÈÛË ÛÂ 3 ¿ÍÔÓÂ˜ (isometricplot) ÁÈ· ÙË Û‡Á¯ÚÔÓË ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÚÈÒÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ Î·È ·ÂÈÎfiÓÈÛË ÛÂ ÔÏ‡-Â‰ÚÔ (diamond view) ÁÈ· ÙË Û‡Á¯ÚÔÓË ·ÂÈÎfiÓÈÛË ÙÂÛÛ¿ÚˆÓ ·Ú·Ì¤ÙÚˆÓ

(∂ÈÎ. 13). ∏ ·ÚÔ˘Û›·ÛË ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ ÌÔÚÂ› Ó· Á›ÓÂÈ Î·È ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË

ÈÛÙÔÁÚ·ÌÌ¿ÙˆÓ Î·Ù·ÓÔÌ‹˜ Û˘¯ÓÔÙ‹ÙˆÓ, fiÔ˘ Ë ÙÂÙ·ÁÌ¤ÓË ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Â›

ÛÙÔÓ ·ÚÈıÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È Ë ÙÂÙÌËÌ¤ÓË ÛÙËÓ ¤ÓÙ·ÛË ÙÔ˘ Û‹Ì·ÙÔ˜ (∂ÈÎ.

13). ΔÔ ÏÔÁÈÛÌÈÎfi ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌ¤ÙÚÔ˘ ¤¯ÂÈ ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· Ó· ˘ÔÏÔÁ›˙ÂÈ

Î·È Ó· ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ Ù· ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ ÙË˜ Î·Ù·ÓÔÌ‹˜ (Ì¤ÛË, ‰È¿ÌÂÛË, ÂÈ-

ÎÚ·ÙÔ‡Û· ÙÈÌ‹) ÒÛÙÂ Î·Ù¿ ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË Ó· ÂÚÈÁÚ·ÊÂ› Î·È Ó· ÚÔÛ‰ÈÔÚÈ-

ÛıÂ› Î·Ï‡ÙÂÚ· Ô ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ô˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ ÏËı˘ÛÌfi˜.

64

∂ÈÎfiÓ· 14. (·) ™ÙÈÎÙfiÁÚ·ÌÌ· ÚfiÛıÈÔ˘ Î·È Ï¿ÁÈÔ˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡, fiÔ˘ ‰È·ÎÚ›ÓÔ-ÓÙ·È ÔÈ ÙÚÂ›˜ ‚·ÛÈÎÔ› ˘ÔÏËı˘ÛÌÔ› ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·›Ì·ÙÔ˜ (¤¯ÂÈ ÚÔËÁËıÂ› Ï‡-ÛË ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ). (‚) Ã¿Ú·ÍË ÙË˜ ÂÚÈÔ¯‹˜ (gate) ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔÛÙÈÎÙfiÁÚ·ÌÌ· Ë ÔÔ›· ı· ÌÂÏÂÙËıÂ› ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ÊıÔ-ÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ.

(64 ×

64)

(64 ×

64)

.1 1 10 100 1000

SS LOG

.1 1 10 100 1000

SS LOG

FS

1000

800

600

400

200

0

FS

1000

800

600

400

200

0

· ‚

Ô˘‰ÂÙÂÚfiÊÈÏ·

ªÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·

§ÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ıÂÙÈÎfiÙËÙ·˜

ŒÓ· ÛËÌ·ÓÙÈÎfi Úfi‚ÏËÌ· ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ Â›Ó·È Ô Î·-

ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ ıÂÙÈÎfiÙËÙ·˜, ‰ËÏ·‰‹ ·fi ÈÔ ÛËÌÂ›Ô Î·È ÌÂÙ¿ Ë ¤ÓÙ·ÛË ÙÔ˘

Û‹Ì·ÙÔ˜ ÙÔ˘ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Â› ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ Â›Ó·È ıÂÙÈÎ¿ ÁÈ· ¤Ó·

Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· Ô˘ ÌÂÏÂÙ¿Ù·È. O˘ÛÈ·ÛÙÈÎ¿ Ú¤ÂÈ

Ó· Î·ıÔÚÈÛıÔ‡Ó Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ Ê¤ÚÔ˘Ó ÙÔ ·ÓÙÈÁfiÓÔ ¤Ó·ÓÙÈ ÙÔ˘ ÔÔ›Ô˘

ÛÙÚ¤ÊÂÙ·È ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ·. Δ· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ÌÔÚÂ›

ÔÏÏ¤˜ ÊÔÚ¤˜ Ó· Û˘Ó‰ÂıÔ‡Ó ÌÂ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Ì¤Ûˆ ÙˆÓ Fc-ÙÌËÌ¿ÙˆÓ ÙÔ˘˜

(ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹ Û‡Ó‰ÂÛË) fiˆ˜ .¯. Û˘Ì‚·›ÓÂÈ ÌÂ ÓÂÎÚ¿ Î‡ÙÙ·Ú·. ∂›ÛË˜ ÔÏÏ¿

Î‡ÙÙ·Ú· ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙Ô˘Ó ·˘ÙÔÊıÔÚÈÛÌfi ÏfiÁˆ ÙË˜ ·ÚÔ˘Û›·˜ Î¿ÔÈˆÓ ÂÓ‰Ô-

Î˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ Û˘ÛÙ·ÙÈÎÒÓ fiˆ˜ ÔÈ ÊÏ·‚›ÓÂ˜. ŸÏ· ·˘Ù¿ Ù· ÌË ÂÈ‰ÈÎ¿ Û‹Ì·Ù·

ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÌÔÚÂ› Ó· ‰ÒÛÔ˘Ó Ì¤ÙÚËÛË Ô˘ Ó· ÂÚÈ¤¯ÂÈ ÛËÌ·ÓÙÈÎfi ÛÊ¿ÏÌ·

Î·È Ú¤ÂÈ Ó· ÂÍ·ÈÚÔ‡ÓÙ·È ·fi ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË. ∏ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË ¯Ú‹ÛË Î·Ù¿

ÙËÓ Ì¤ÙÚËÛË ÈÛÔÙ˘ÈÎÒÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÂÈÙÚ¤ÂÈ ÙÔÓ ˘ÔÏÔÁÈÛÌfi ÙË˜

ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹˜ ÂÎÔÌ‹˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡. Δ· ÈÛÔÙ˘ÈÎ¿ ‰Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (isotype

controls) Â›Ó·È ÌË ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ›‰È·˜ ˘fiÙ·ÍË˜, ›‰È·˜ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜

Î·È ›‰ÈÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·ÙÔ˜ ÌÂ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· Ô˘

¯ÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È ÛÙË Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓË Ì¤ÙÚËÛË ·ÏÏ¿ ÌÂ Î·ÌÌ›· Èı·ÓfiÙËÙ·

Û‡Ó‰ÂÛË˜ ÌÂ Ù· Î‡ÙÙ·Ú·. ∂Í·ÈÚÒÓÙ·˜ ÏÔÈfiÓ ÙËÓ Î·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ

ÙÔ˘ ÈÛÔÙ˘ÈÎÔ‡ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÔÚ›˙ÂÙ·È ¤Ó·˜ ‰Â›ÎÙË˜ (marker/cursor) ÛÙÔÓ ¿ÍÔ-

Ó· ¤ÓÙ·ÛË˜ ÙÔ˘ ÈÛÙÔÁÚ¿ÌÌ·ÙÔ˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ Ô˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÈ ÙÔ ÙÌ‹Ì· ÙË˜

65

∂ÈÎfiÓ· 15. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÙÂÙ·ÚÙËÌÔÚ›ˆÓ ÁÈ· ÙËÓ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË ÌÂÏ¤ÙË ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ(·) CD3 Î·È CD4 Î·È (‚) CD3 Î·È CD8 ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·-ÙÔ˜.

1

3 4

2

(64 ×

64)

(64 ×

64)

.1 1 10 100 1000

CD3-FITC CD3-FITC

.1 1 10 100 1000

CD

4-R

D1

1000

100

10

1.1

CD

8-R

D1

1000

100

10

1.1

· ‚

H

1

3 4

2

D

CD3+CD4+

CD3+CD4-

CD3+CD8+

CD3+CD8-

Î·Ù·ÓÔÌ‹˜ Ô˘ ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Â› ÛÙËÓ ÂÈ‰ÈÎ‹ ‰¤ÛÌÂ˘ÛË ÙÔ˘ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈ-

ÛÒÌ·ÙÔ˜ ‰ËÏ·‰‹ ÛÙ· ·ÏËıÒ˜ ıÂÙÈÎ¿ ÁÈ· ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌfi Î‡ÙÙ·Ú· (∂ÈÎ.

16).

∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎfi˜ ¢È·¯ˆÚÈÛÌfi˜

OÈ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ› ‰È·¯ˆÚÈÛÙ¤˜ (cell sorters) ·ÍÈÔÔÈÔ‡Ó ÙÈ˜ ·Ú¯¤˜ ÙË˜

Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ ÌÂ ÙËÓ ÚfiÛıÂÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÙÔ˘ ÂÈÏÂÎÙÈÎÔ‡ ‰È·¯ˆ-

ÚÈÛÌÔ‡. O˘ÛÈ·ÛÙÈÎ¿ Â›Ó·È Î˘ÙÙ·ÚfiÌÂÙÚ· Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ·ÔÌfi-

ÓˆÛË˜ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Î·Ù¿ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ·Ó·ÁÓˆÚ›˙ÔÓÙ·È

fiÙÈ Ê¤ÚÔ˘Ó Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ˘˜ ¯·Ú·ÎÙ‹ÚÂ˜ (ÛÎÂ‰·ÛÙÈÎ¤˜ È‰ÈfiÙËÙÂ˜ ÛÂ Û˘Ó-

‰˘·ÛÌfi ÌÂ ÊıÔÚÈÛÌfi). ŒÙÛÈ, ·Ú·Ï·Ì‚¿ÓÔÓÙ·È ÎÂÎ·ı·ÚÌ¤ÓÔÈ, ÔÌÔÈÔÁÂ-

ÓÂ›˜ ˙ˆÓÙ·ÓÔ› Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ› ÏËı˘ÛÌÔ› ÁÈ· ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ÌÔÚÊÔÏÔÁÈÎ‹ Î·È Î˘-

Ú›ˆ˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎ‹ ÌÂÏ¤ÙË.74,113

O Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎfi˜ ‰È·¯ˆÚÈÛÌfi˜ ÛÙËÚ›˙ÂÙ·È ÛÙËÓ ·Ú¯‹ ÙË˜ ËÏÂÎÙÚÔ-

ÛÙ·ÙÈÎ‹˜ ÂÎÙÚÔ‹˜ ÛÙ·ÁÔÓÈ‰›ˆÓ. ™‡ÌÊˆÓ· ÌÂ ÙËÓ ·Ú¯‹ ·˘Ù‹, ·Ó Ù· Î‡ÙÙ·-

Ú· Ô˘ ÂÍ¤Ú¯ÔÓÙ·È ÛÂ ÌÔÓ‹ÚË ‰È¿Ù·ÍË ·fi ÙÔ Ú‡Á¯Ô˜ ÙË˜ Î˘„¤ÏË˜ ÚÔ‹˜ ÌÂ

ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÂÓfi˜ Ù·Ï·ÓÙˆÙ‹ ˘Ô‚ÏËıÔ‡Ó ÛÂ ÂÚÈÔ‰ÈÎ‹ Î·Ù·ÎfiÚ˘ÊË ‰fi-

ÓËÛË, ‰ËÌÈÔ˘ÚÁÂ›Ù·È ¤Ó· ÛÙ·ıÂÚfi Î‡Ì· Ô˘ Û·Ó ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ¤¯ÂÈ ÙÔ Û¯Ë-

Ì·ÙÈÛÌfi ÔÌÔÈfiÌÔÚÊˆÓ ÛÙ·ÁÔÓÈ‰›ˆÓ Ô˘ ÎÈÓÔ‡ÓÙ·È ÛÂ ·fiÛÙ·ÛË ÂÓfi˜ Ì‹-

ÎÔ˘˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ ÙÔ ¤Ó· ·fi ÙÔ ¿ÏÏÔ. ªÂ ·˘ÙfiÓ ÙÔ ÙÚfiÔ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· ÎÈÓÔ‡-

ÓÙ·È ÂÁÎÏˆ‚ÈÛÌ¤Ó· Ì¤Û· ÛÂ ‰È·‰Ô¯ÈÎ¿ ÛÙ·ÁÔÓ›‰È· (∂ÈÎ. 17).

∞Ó Ù· ÛÙ·ÁÔÓ›‰È· ÊÔÚÙÈÛÙÔ‡Ó ÌÂ ËÏÂÎÙÚÈÎfi ÚÂ‡Ì· Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ·

ÂÍ·Ó·ÁÎ·ÛÙÔ‡Ó Ó· ÂÚ¿ÛÔ˘Ó Ì¤Û· ·fi ¤Ó· ÂÊ·ÚÌÔÛÌ¤ÓÔ ËÏÂÎÙÚÈÎfi Â‰›Ô

Ë ÔÚÂ›· ÙÔ˘˜ ÂÎÙÚ¤ÂÙ·È ÚÔ˜ ÙÔÓ ·ÓÙ›ıÂÙÔ fiÏÔ ÔfiÙÂ ‰È·¯ˆÚ›˙ÔÓÙ·È

66

EÈÎfiÓ· 16. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Î·Ù·ÓÔÌ‹˜ ÙˆÓ ·ÏËıÒ˜ ıÂÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿·fi ÙËÓ ·Ê·›ÚÂÛË ÙË˜ Î·Ù·ÓÔÌ‹˜ ÙˆÓ ÛËÌ¿ÙˆÓ ÙÔ˘ ÈÛÔÙ˘ÈÎÔ‡ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜.

106

100 101 102 103

CD4 FITC

"£ÂÙÈÎfi" ÈÛÙfiÁÚ·ÌÌ·

æÂ˘‰Ò·ÚÓËÙÈÎ¿

æÂ˘‰ÒıÂÙÈÎ¿

·fi Ù· ÌË ÊÔÚÙÈÛÌ¤Ó· Î·È ·fi ÂÎÂ›Ó· Ô˘ Ê¤ÚÔ˘Ó ·ÓÙ›ıÂÙÔ ÊÔÚÙ›Ô. ™ÙË

Û˘Ó¤¯ÂÈ· Û˘ÏÏ¤ÁÔÓÙ·È ÌÂ ÙËÓ ÙÔÔı¤ÙËÛË Û˘ÏÏÂÎÙÈÎÒÓ ÛˆÏËÓ·Ú›ˆÓ ÛÙËÓ

Î·ÙÂ‡ı˘ÓÛË ÂÎÙÚÔ‹˜ ÙÔ˘˜ (∂ÈÎ. 17).

ΔÔ Úfi‚ÏËÌ· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ‰È·¯ˆÚÈÛÌÔ‡ Â›Ó·È Ë ÂÎÏÂÎÙÈÎ‹ ÊfiÚÙÈÛË

ÌfiÓÔ ÂÎÂ›ÓˆÓ ÙˆÓ ÛÙ·ÁÔÓÈ‰›ˆÓ Ô˘ ÂÚÈ¤¯Ô˘Ó Ù· Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂ Ù· Û˘ÁÎÂÎÚÈ-

Ì¤Ó· ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ Ô˘ Ì·˜ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÔ˘Ó. ∞˘Ùfi ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È ÌÂ ÙÔÓ

·ÎÚÈ‚‹ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ·fiÛÙ·ÛË˜ Î·È ÙÔ˘ ¯ÚfiÓÔ˘ (time delay) Ô˘ ·-

ÚÂÌ‚¿ÏÏÂÙ·È ÌÂÙ·Í‡ ÙÔ˘ ÛËÌÂ›Ô˘ ÚfiÛÙˆÛË˜ ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER (analysis

point) Î·È ÙÔ˘ ÛËÌÂ›Ô˘ Û¯ËÌ·ÙÈÛÌÔ‡ ÙÔ˘ ÛÙ·ÁÔÓÈ‰›Ô˘ (break-off point).

O Ú˘ıÌfi˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎÔ‡ ‰È·¯ˆÚÈÛÌÔ‡ ÂÍ·ÚÙ¿Ù·È ·fi ‰È¿ÊÔ-

ÚÂ˜ ·Ú·Ì¤ÙÚÔ˘˜ Ùo˘ ÔÚÁ¿ÓÔ˘ fiˆ˜ Ë ‰È¿ÌÂÙÚÔ˜ ÙÔ˘ Ú‡Á¯Ô˘˜ ÙË˜ Î˘„¤ÏË˜

67

∂ÈÎfiÓ· 17. ¢È¿Ù·ÍË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎÔ‡ ‰È·¯ˆÚÈÛÙ‹ (cell sorter).

∂›ÛÔ‰Ô ‰Â›ÁÌ·ÙÔ ÀÁÚfi

ÀÁÚfi

¢È·ÊÔÚ¿‰˘Ó·ÌÈÎÔ‡

LASERºˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù‹

ºˆÙÔ·ÓÈ¯ÓÂ˘Ù¤

¶ÈÂ˙ÔËÏÂÎÙÈÎfiÎÚ‡ÛÙ·ÏÏÔ(‰ÔÓËÙ‹)

-4 kV+4 kV

∞fi‚ÏËÙ·

∞ÚÓËÙÈÎ¿ÊÔÚÙÈÛÌ¤Ó·

Î‡ÙÙ·Ú·

£ÂÙÈÎ¿ÊÔÚÙÈÛÌ¤Ó·

Î‡ÙÙ·Ú·

ÚÔ‹˜ Î·ıÒ˜ Î·È ·fi ÙËÓ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÚfiÎÂÈÙ·È Ó·

Û˘ÏÏÂÁÔ‡Ó ÛÙÔ ·Ú¯ÈÎfi ·ÈÒÚËÌ·. ªÂ ¤Ó·Ó Û˘Ó‹ıË Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ‰È·¯ˆ-

ÚÈÛÌÔ‡ Ô˘ ‰È·ı¤ÙÂÈ Ú‡Á¯Ô˜ 70Ìm Î·È ÌÂ Ù·¯‡ÙËÙ· ÚÔ‹˜ 2000 Î‡ÙÙ·Ú·/sec,

Û˘ÏÏ¤ÁÔÓÙ·È 106 Î‡ÙÙ·Ú· ÛÂ 17 min fiÙ·Ó Ë Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛ‹ ÙÔ˘˜ Â›Ó·È ÂÚ›-

Ô˘ 50% ÛÙÔ ·Ú¯ÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì·, ÂÓÒ ··ÈÙÔ‡ÓÙ·È 5-8 ËÌ¤ÚÂ˜ fiÙ·Ó ‚Ú›ÛÎÔ-

ÓÙ·È ÛÂ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË 0,1%. ∏ Û˘ÏÏÔÁ‹ Û¿ÓÈˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (≤ 1% ÙÔ˘ ·Ú¯È-

ÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡), ÂÈ‚¿ÏÂÈ ÙËÓ ·‡ÍËÛË ÙË˜ Ù·¯‡ÙËÙ·˜ ‰È·¯ˆÚÈÛÌÔ‡. ∫˘ÙÙ·-

ÚÈÎfi˜ ‰È·¯ˆÚÈÛÌfi˜ ˘„ËÏ‹˜ Ù·¯‡ÙËÙ·˜ ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È ÌÂ ·‡ÍËÛË ÙË˜ ÂÊ·Ú-

ÌÔ˙fiÌÂÓË˜ ÛÙÔ ‰Â›ÁÌ· ›ÂÛË˜ ·ÏÏ¿ ÂÓÒ ÂÈ‰Ú¿ ıÂÙÈÎ¿ ÛÙËÓ Ù·¯‡ÙËÙ· ‰È·-

¯ˆÚÈÛÌÔ‡ ¤¯ÂÈ ·ÚÓËÙÈÎ‹ Â›‰Ú·ÛË ÛÙËÓ ÂÈ‚›ˆÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

68

3 . ª ∂ § ∂ Δ ∏ Δ O À ∫ À Δ Δ ∞ ƒ π ∫ O À ∫ À ∫ § O À ∫ ∞ πª ∂ Δ ƒ ∏ ™ ∏ Δ O À ∫ À Δ Δ ∞ ƒ π ∫ O À D N A ( ¶ O ™ O Δ π ∫ ∏

D N A ∞ ¡ ∞ § À ™ ∏ ) ª ∂ ∫ À Δ Δ ∞ ƒ O ª ∂ Δ ƒ π ∞ ƒ O ∏ ™

∏ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË ·ÔÙÂÏÂ› ÌÈ· ·fi ÙÈ˜ ÚÒÙÂ˜ ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·-

ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜, Ë ÔÔ›· ·Ú·Ì¤ÓÂÈ Ì¤¯ÚÈ Û‹ÌÂÚ· ·fi ÙÈ˜ ÈÔ ‰È·‰Â‰ÔÌ¤-

ÓÂ˜ ÁÈ·Ù› ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ ¤ÓÙÔÓÔ ÎÏÈÓÈÎfi ÂÓ‰È·Ê¤ÚÔÓ. ¶ÔÛÔÙÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜

ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ DNA ¤¯Ô˘Ó ‰Â›ÍÂÈ fiÙÈ ÌÂÙ·‚ÔÏ¤˜ ÙÔ˘ Û˘ÓÔ‰Â‡Ô˘Ó Û˘¯Ó¿

ÔÏÏ¿ Î·ÎÔ‹ıË ÓÔÛ‹Ì·Ù·. ∞Ó Î·È Ë ÎÏÈÓÈÎ‹ ·Í›· ·˘ÙÒÓ ÙˆÓ ÏËÚÔÊÔÚÈÒÓ

Â›Ó·È ·ÌÊÈÛ‚ËÙ‹ÛÈÌË Á›ÓÔÓÙ·È ÌÂÏ¤ÙÂ˜ ÁÈ· ÙËÓ Èı·Ó‹ ÚÔÁÓˆÛÙÈÎ‹ ·Í›·

ÙÔ˘˜.114,115

μ·ÛÈÎ‹ ÚÔ¸fiıÂÛË ÁÈ· ÙËÓ ·ÎÚÈ‚‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Â›Ó·È Ë ÛÙÔÈ¯ÂÈÔ-

ÌÂÙÚÈÎ‹ Û‡Ó‰ÂÛË ÙÔ˘ DNA ÌÂ ÌÈ· ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹. ¢ËÏ·‰‹, ÙÔ ÔÛfi

ÙË˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ‹˜ Ô˘ ‰ÂÛÌÂ‡ÂÙ·È Â›Ó·È ·Ó¿ÏÔÁÔ ÌÂ ÙÔ ÔÛfi ÙÔ˘ ÂÚÈÂ¯fiÌÂ-

ÓÔ˘ ÛÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ DNA. OÈ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Û˘Ó‹ıˆ˜ Â›Ó·È

·˘Ù¤˜ Ô˘ Û˘Ó‰¤ÔÓÙ·È ÌÂ ÙÔ DNA fiˆ˜ ÙÔ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ (propidiun

iodide, ƒπ), ÙÔ ‚ÚˆÌÈÔ‡¯Ô Âı›‰ÈÔ (ethidium bromide) Î·È Ë ÔÚÙÔÎ·Ïfi-

¯ÚÔ˘˜ ·ÎÚÈ‰›ÓË (acridine orange) ·ÏÏ¿ Î·È ÂÈ‰ÈÎ¤˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ÙˆÓ ‚¿ÛÂˆÓ

Ô˘ ‰ÂÛÌÂ‡ÔÓÙ·È ÛÙÈ˜ ÂÚÈÔ¯¤˜ ·‰ÂÓ›ÓË˜-ı˘Ì›ÓË˜ fiˆ˜ ÔÈ Hoechst 33342,

Hoechst 33258 Î·È DAPI ‹ ÛÙÈ˜ ÂÚÈÔ¯¤˜ ÁÔ˘·Ó›ÓË˜-Î˘ÙÔÛ›ÓË˜ fiˆ˜ Ë

¯ÚˆÌÔÌ˘Î›ÓË Î·È Ë ÌÈıÚ·Ì˘Î›ÓË.116,117

ªÂ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÙ·È ÙÔ ÔÏÈÎfi ÔÛfi ÙÔ˘ DNA

ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡ (ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ DNA ‹ DNA

ÏÔÂÈ‰›·) Î·ıÒ˜ Î·È ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Î¿ıÂ Ê¿-

ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ (·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘) (∂ÈÎ. 18).

∏ ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ· ÛÂ DNA ÂÓfi˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡ ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È

ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÌÂ ÙÔÓ ‰Â›ÎÙË DNA (DNA index, DI), Ô ÔÔ›Ô˜

˘ÔÏÔÁ›˙ÂÙ·È ·fi ÙÔÓ ÏfiÁÔ ÙˆÓ ÂÈÎÚ·ÙÔ˘ÛÒÓ ÙÈÌÒÓ (modal channel va-

lues) ÙˆÓ Î·Ù·ÓÔÌÒÓ G0/G1 ÙÔ˘ ˘fi ÂÍ¤Ù·ÛË ÏËı˘ÛÌÔ‡ ÚÔ˜ ÙÔÓ ‰ÈÏÔ-

ÂÈ‰ÈÎfi ÏËı˘ÛÌfi ·Ó·ÊÔÚ¿˜.116,118 ∏ ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ

69

DNA ·Ó·Ê¤ÚÂÙ·È ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ˆ˜ “DNA ÏÔÂÈ‰›·” ÛÂ ·ÓÙÈ-

‰È·ÛÙÔÏ‹ ÌÂ ÙÔÓ fiÚÔ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ “ÏÔÂÈ‰›· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ” Ô˘

¤¯ÂÈ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔÓ ·ÚÈıÌfi Î·È ÙË ‰ÔÌ‹ ÙˆÓ ¯ÚˆÌÔÛˆÌ¿ÙˆÓ. ªÂ ‚¿ÛË ÙÔ

‰Â›ÎÙË DI, ¤Ó·˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ ÏËı˘ÛÌfi˜ ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÂÙ·È ˆ˜ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎfi˜

‰ÈÏÔÂÈ‰ÈÎfi˜ ÏËı˘ÛÌfi˜ ·Ó ¤¯ÂÈ DI=1, ˆ˜ ·ÓÂ˘ÏÔÂÈ‰ÈÎfi˜ Ù‡Ô˘ ˘Ô‰È-

ÏÔÂÈ‰›·˜ ·Ó ¤¯ÂÈ DI<1 (ÔÛfiÙËÙ· DNA ÌÈÎÚfiÙÂÚË ·fi ÙÔ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎfi)

Î·È ˆ˜ ·ÓÂ˘ÏÔÂÈ‰ÈÎfi˜ Ù‡Ô˘ ˘ÂÚ‰ÈÏÔÂÈ‰›·˜ ·Ó ¤¯ÂÈ DI>1 (ÔÛfiÙËÙ·

DNA ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚË ·fi ÙÔ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎfi). ∏ „Â˘‰Ô‰ÈÏÔÂÈ‰›· ·Ó·Ê¤ÚÂÙ·È

ÛÂ DI ›ÛÔ ÌÂ ÙË ÌÔÓ¿‰· ·ÏÏ¿ ˘¿Ú¯Ô˘Ó ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛÔÙÈÎ¤˜ ‹ ‰ÔÌÈÎ¤˜ ‰È·Ù·-

Ú·¯¤˜ ÛÙÔ DNA Ô˘ ·ÓÈ¯ÓÂ‡ÔÓÙ·È ÌfiÓÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÁÂÓÂÙÈÎ¿. ∏ ÔÏ˘ÏÔÂÈ-

‰›· ÛËÌ·›ÓÂÈ ÙËÓ ‡·ÚÍË ÂÚÈÛÛfiÙÂÚˆÓ ‰ÈÏÔÂÈ‰ÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ ÌÂ ‰Â›-

ÎÙË D¡∞ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎfi ·fi ÙË ÌÔÓ¿‰·.

∏ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ‰›ÓÂÈ

ÏËÚÔÊÔÚ›Â˜ ÁÈ· Ù· ÔÛÔÛÙ¿ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙÈ˜ ‰È¿ÊÔÚÂ˜

Ê¿ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘.119 π‰È·›ÙÂÚÔ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÔÓ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ Ë S

Ê¿ÛË Î·Ù¿ ÙËÓ ÔÔ›· Á›ÓÂÙ·È Ô ‰ÈÏ·ÛÈ·ÛÌfi˜ ÙÔ˘ ÁÂÓÂÙÈÎÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡ ÙÔ˘ Î˘Ù-

Ù¿ÚÔ˘. ∏ ÌÂÏ¤ÙË ÙË˜ S Ê¿ÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ì¤Ûˆ ÙÔ˘ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂ-

ÓÔ˘ DNA ‰›ÓÂÈ ÏËÚÔÊÔÚ›Â˜ ÁÈ· ÙËÓ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ÌÂÙ·ÌfiÚ-

ÊˆÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È Û˘ÓÂÒ˜ ÂÏ¤Á¯ÂÈ ÙË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ¿ ÙÔ˘˜.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ·fi ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô-

ÓÙ·È Î˘Ú›ˆ˜ ÌÂ ÙÔÓ ‰Â›ÎÙË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ (Proliferation index, ƒπ) Ô˘

˘ÔÏÔÁ›˙ÂÙ·È ·fi ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ S Î·È G2/M

70

∂ÈÎfiÓ· 18. ™¯ËÌ·ÙÈÎ‹ ·ÂÈÎfiÓÈÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ Î·È ÙˆÓ ÈÛÙÔÁÚ·ÌÌ¿ÙˆÓ¤ÓÙ·ÛË˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÙÔ˘ DNA Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÔ˘Ó ·fi ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·ÚÔ‹˜. º·›ÓÔÓÙ·È ÔÈ ‰È·ÊÔÚ¤˜ ÙË˜ Î·Ù·ÓÔÌ‹˜ ·Ó¿ÏÔÁ· ÌÂ ÙÈ˜ Ê¿ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡Î‡ÎÏÔ˘.

G0

G1

G2/M2N

2N 2N4N 4N

S

Ê¿ÛË Â› ÙÔ˘ Û˘ÓfiÏÔ˘ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡. ΔÔ ÎÏ¿ÛÌ· ÙË˜ S Ê¿ÛË˜

(S-phase fraction, SPF) Â›Ó·È ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È

ÛÙËÓ S Ê¿ÛË Â› ÙÔ˘ Û˘ÓÔÏÈÎÔ‡ ÂÍÂÙ·˙fiÌÂÓÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡.120

¶ÈÔ ·ÍÈfiÈÛÙË ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

ÌÔÚÂ› Ó· Á›ÓÂÈ ÌÂ ÙËÓ Ì¤ÙÚËÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ·-

ÙÒÓÔ˘Ó Úfi‰ÚÔÌÂ˜ Ô˘Û›Â˜ ÙÔ˘ DNA (·Ó¿ÏÔÁ· ÓÔ˘ÎÏÂÔÙÈ‰›ˆÓ .¯. BrdU)

·ÏÏ¿ Î·È ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÌÂ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡

¤ÎÊÚ·ÛË˜ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ÚˆÙÂ˚ÓÒÓ Ô˘ Û¯ÂÙ›˙ÔÓÙ·È ÌÂ ÙËÓ ÎÈÓËÙÈÎ‹ ÙÔ˘ Î˘Ù-

Ù·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ Î·È ·Ó·Ê¤ÚÔÓÙ·È ˆ˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·-

ÛÌÔ‡ (PCNA, Ki-67, p120, p105) (¶›Ó. 8).2,121-123

∏ ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË (bromodeoxyuridine, BrdU) Â›Ó·È ¤Ó· ·Ó¿ÏÔ-

ÁÔ ÙË˜ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ Î·È Ë ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ‹ ÙË˜ ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ DNA ‰›ÓÂÈ ÙË

‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌÔ‡ –ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÂÓfi˜ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ˘ ·ÓÙÈ-BrdU

ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜– ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË

ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ (Ê¿ÛË Û‡ÓıÂÛË˜ DNA).124-130 ™˘Ó‰˘·ÛÌfi˜ ÙÔ˘

·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ Î·Ù¿ ÙË˜ BrdU (anti-BrdU FITC) ÌÂ ÌÈ· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÙÔ˘ ÔÏÈ-

ÎÔ‡ DNA, fiˆ˜ ÙÔ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ (ƒπ)131 ‹ Ë ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ 7-·ÌÈÓÔ-·ÎÙÈ-

ÓÔÌ˘Î›ÓË (7-AAD)132 ÂÈÙÚ¤ÂÈ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Û˘Ó-

ı¤ÙÔ˘Ó DNA (ÂÓÛˆÌ·ÙÒÓÔ˘Ó BrdU) ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ ÛÙ¿‰ÈÔ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡

Î‡ÎÏÔ˘ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È (G0/G1, S, G2/M) (∂ÈÎ. 19).124

71

∂ÈÎfiÓ· 19. ¢È¿ÁÚ·ÌÌ· ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÙÔ˘ DNA Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓÔ˘ ÌÂ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ(ƒπ) ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ ÊıÔÚÈÛÌfi ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Î·Ù¿ ÙË˜ ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ (aÓÙÈ-BrdU FITC). ¢È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙËÓ S Ê¿ÛË Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ÂÓÛˆÌ·ÙÒÛÂÈ BrdUÎ·È PI Û˘Á¯ÚfiÓˆ˜ (¿Óˆ ‰ÂÍÈ¿) Î·È Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙËÓ G0/G1 Ê¿ÛË Ô˘ ‰ÂÓ ÂÓÛˆÌ·ÙÒ-ÓÔ˘Ó BrdU.124

¶ÚÔÛÏ·Ì‚¿ÓÔÓÙ·BrdU

ªË ¶ÚÔÛÏ·Ì‚¿ÓÔÓÙ·BrdU

G0/G1

S º¿ÛË

G2/M

·ÓÙÈ

-Brd

U F

ITC

ΔÔ Ki-67 Â›Ó·È ÌÈ· ˘ÚËÓÈÎ‹ ÚˆÙÂ˝ÓË Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ‰‡Ô ÔÏ˘-

ÂÙÈ‰ÈÎ¤˜ ·Ï˘Û›‰Â˜ 345 Î·È 395 kDa ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·. ¢ÂÓ ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È Î·ıfiÏÔ˘

ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙË Ê¿ÛË ËÚÂÌ›·˜ G0. ∏ ¤ÎÊÚ·Û‹ ÙÔ˘ ·˘Í¿-

ÓÂÙ·È Î·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÊÙ¿ÓÔÓÙ·˜ ÛÙ· ˘„ËÏfiÙÂÚ·

Â›Â‰· ÛÙË G2/M Ê¿ÛË (¶›Ó. 8).133-136 °È· ÂÚÈÛÛfiÙÂÚÂ˜ ÏËÚÔÊÔÚ›Â˜

Î·È ÌÂ ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÙË˜ ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ Ô˘ ‰›ÓÂÈ Ë Î˘ÙÙ·-

ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÌÔÚÂ› Ó· ÌÂÏÂÙËıÂ› ÙÔ ÂÚÈÂ¯fiÌÂÓÔ DNA ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

(¯ÚÒÛË ƒπ) ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ Ki-67 ‹ ÌÂ ÙËÓ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË BrdU ‹ ·ÎfiÌË Ë ¤Î-

ÊÚ·ÛË ÙÔ˘ ∫i-67 ÛÂ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ ÂÈÊ·ÓÂÈÎÔ‡˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜

ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.6,137,138

ΔÔ PCNA (Proliferation Cell Nuclear Antigen) ÁÓˆÛÙfi ·ÏÈfiÙÂÚ· ÌÂ

ÙÔ fiÓÔÌ· Î˘ÎÏ›ÓË (cyclin) Â›Ó·È ¤Ó· ¿ÏÏÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·-

ÛÌÔ‡ Ô˘ ·Ú¯ÈÎ¿ ·ÔÌÔÓÒıËÎÂ ·fi ·ÛıÂÓÂ›˜ Ô˘ ¤·Û¯·Ó ·fi Û˘ÛÙËÌ·-

ÙÈÎfi ÂÚ˘ıËÌ·ÙÒ‰Ë Ï‡ÎÔ.139 E›Ó·È ¤Ó· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÔÏ˘ÂÙÈ‰ÈÎfi ·ÓÙÈ-

ÁfiÓÔ ÌÂÁ¤ıÔ˘˜ 36 kDa, ·Ó·ÁÓˆÚ›˙ÂÙ·È Û·Ó ‚ÔËıËÙÈÎ‹ ÚˆÙÂ˝ÓË ÙË˜ DNA

ÔÏ˘ÌÂÚ¿ÛË˜ ‰ Î·È ÂÌÊ·Ó›˙ÂÙ·È ÚÔ˜ ÙÔ Ù¤ÏÔ˜ ÙË˜ G1 Ê¿ÛË˜ Ï›ÁÔ ÚÈÓ ÙËÓ

¤Ó·ÚÍË ÙË˜ S Ê¿ÛË˜, ÊÙ¿ÓÂÈ ÛÙ· ·ÓÒÙÂÚ· Â›Â‰· Î·Ù¿ ÙËÓ S Ê¿ÛË Î·È

ÂÏ·ÙÙÒÓÂÙ·È Í·Ó¿ ÛÙÈ˜ G2 Î·È ª Ê¿ÛÂÈ˜ (¶›Ó. 8).140-142

À¿Ú¯Ô˘Ó Î·È ¿ÏÏ· ÔÏ˘ÂÙÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· (p105, p120, p145)143,144

Ô˘ ·˘Í¿ÓÔÓÙ·È Î·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ Î·È ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ-

‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘˜ Á›ÓÂÙ·È ÂÎÙ›ÌËÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔ-

72

¶›Ó·Î·˜ 8. OÈ ÈÔ ·ÓÙÈÚÔÛˆÂ˘ÙÈÎÔ› ‰Â›ÎÙÂ˜ ÁÈ· Î¿ıÂ Ê¿ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘

G0 G1 G2/MS

Statin

Terminin

P 105

P 120

Ki-67

PCNA

BrdU

PI,7-AAD

ÓÙ·È ÛÙË Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡. ∂ÂÈ‰‹ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· ·ÓÙÈÁfiÓ· ÂÎÊÚ¿-

˙ÔÓÙ·È ÛÂ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÂ˜ Ê¿ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÔÚÂ› Ó· ¯ÚËÛÈ-

ÌÔÔÈËıÔ‡Ó ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Î¿ıÂ

Ì›· ·fi ÙÈ˜ Ê¿ÛÂÈ˜ ·˘Ù¤˜.145

73

4 . μ § ∞ ™ Δ O ° ∂ ¡ ∂ Δ π ∫ ∏ ∞ ¶ ∞ ¡ Δ ∏ ™ ∏ Δ ø ¡ § ∂ ª º O -∫ À Δ Δ ∞ ƒ ø ¡ ™ Δ ∞ ƒ ∂ À ª ∞ Δ π ∫ ∞ ¡ O ™ ∏ ª ∞ Δ ∞

∏ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚ· ÌÈÙÔÁfi-

Ó· ‹ ÛÂ ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· ¤¯ÂÈ ·fi ¯ÚfiÓÈ· ÌÂÏÂÙËıÂ› ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ ·ı‹ÛÂÈ˜

ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙˆÓ Û˘Ì‚·ÙÈÎÒÓ ÌÂıfi‰ˆÓ Î·È Î˘Ú›ˆ˜ ÌÂ ÙË Ú·‰ÈÔ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎ‹

Ì¤ıÔ‰Ô Ô˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÈ ÙËÓ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜

[3H]-TdR ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ DNA ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.146,147 ∞fi Ù·

ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ¤¯ÂÈ ÌÂÏÂÙËıÂ› Î˘Ú›ˆ˜ ÛÙË ÚÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰·

(ƒ∞) ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ Î·È ÛÂ ÔÏ‡ ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤ÓÔ ‚·ıÌfi ÛÙË ÓÂ·ÓÈÎ‹ È‰ÈÔ·ı‹

·ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞) ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ.148,149

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙˆÓ ‰È·ÊfiÚˆÓ ÌÂÏÂÙÒÓ ÛÂ ÁÂÓÈÎ¤˜ ÁÚ·ÌÌ¤˜ Ô‰Ë-

ÁÔ‡Ó ÛÙÔ Û˘Ì¤Ú·ÛÌ· fiÙÈ Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÛÂ ‰È¿ÊÔÚ· ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹ ÛÂ ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· ÛÂ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔ-

Û‹Ì·Ù· Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ ¿ÙÔÌ·.150-156

∂È‰ÈÎfiÙÂÚ·, ÔÈ Lloyd Î·È Û˘Ó150 ÙÔ 1977 ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÒÓÙ·˜ ÙËÓ Ú·‰ÈÔ·-

ÓÔÛÔÏÔÁÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ, Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÓ‹ÏÈÎˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ƒ∞ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ Û˘ÁÎÂÓÙÚÒÛÂÈ˜ ÌÈÙÔÁfi-

ÓˆÓ ‹ ÂÈ‰ÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ, Â›Ó·È ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙˆÓ

˘ÁÈÒÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ Î·È Û¯ÂÙ›˙ÂÙ·È ÌÂ ÙËÓ ÂÓÂÚÁfiÙËÙ· ÙË˜ ÓfiÛÔ˘, ÙËÓ ËÏÈÎ›·

ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ, ÙÔÓ ·ÚÈıÌfi ÙˆÓ ÚÔÛ‚Â‚ÏËÌ¤ÓˆÓ ·ÚıÚÒÛÂˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È ÌÂ

ÙÔÓ Ù›ÙÏÔ ÙÔ˘ ÚÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰Ô‡˜ ·Ú¿ÁÔÓÙ· (rheumatoid factor, RF) ÛÙÔÓ ÔÚfi

ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ.

OÈ Abrahamsen Î·È Û˘Ó151 ÌÂÏ¤ÙËÛ·Ó ÙËÓ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ Î·È ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÛÂ 8

ÂÓ‹ÏÈÎÂ˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ƒ∞ Î·È 8 ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞. ÃÚËÛÈÌÔÔ›ËÛ·Ó ÌÈÙÔÁfi-

Ó· fiˆ˜ Ë Ê˘ÙÔ·ÈÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË (PHA) Î·È ÙÔ ÌÈÙÔÁfiÓÔ Pokweed

(PWM) ·ÏÏ¿ Î·È ·ÓÙÈÁfiÓ· Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÙÔ Ì˘ÎÔ‚·ÎÙËÚ›‰ÈÔ ÙË˜

Ê˘Ì·Ù›ˆÛË˜ (purified protein derivative of tuberculin, PPD) Î·È ·fi ÙÔÓ

Ì‡ÎËÙ· Candida albicans. Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ‹Ù·Ó Û˘-

74

ÁÎÚ›ÛÈÌ· ÌÂ ÂÎÂ›Ó· ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ÁÈ· ÙÔ ›‰ÈÔ ÌÈÙÔÁfiÓÔ Î·È ¤‰ÂÈÍ·Ó

ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

∂›ÛË˜ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ ÙˆÓ Lance Î·È Û˘Ó152, ÙˆÓ Lockshin Î·È

Û˘Ó153 Î·È ÙˆÓ Silverman Î·È Û˘Ó154 ÛÂ ·ÛıÂÓÂ›˜ Ô˘ ¤·Û¯·Ó ·fi ÚÂ˘Ì·-

ÙÔÂÈ‰‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· Î·ıÒ˜ Î·È ÙÔ˘ Utsinger155 ÛÂ ÂÓ‹ÏÈÎÂ˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ Û˘-

ÛÙËÌ·ÙÈÎfi ÂÚ˘ıËÌ·ÙÒ‰Ë Ï‡ÎÔ (™∂§) ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘

·ÔÌÔÓÒıËÎ·Ó ·fi ÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ·˘ÙÒÓ ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ·ÚÔ˘Û›·Û·Ó

ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÛÂ Ê˘ÙÈÎ¤˜ ÏÂÎÙ›ÓÂ˜ fiˆ˜ Ë Ê˘ÙÔ·È-

ÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË (PHA) Î·È Ë ÎÔÓÎ·Ó·‚·Ï›ÓË A (Con-A).

OÈ Gershwin Î·È Û˘Ó156 ÛÂ ÌÈ· ÌÂÏ¤ÙË ÙÚÈ¿ÓÙ· ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ÓÂ·ÓÈÎ‹

È‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞) Ô˘ ‰ËÌÔÛÈÂ‡ıËÎÂ ÙÔ 1979 ‚Ú‹Î·Ó fiÙÈ ÛÂ Ê¿ÛË

ÂÓÂÚÁfiÙËÙ·˜ ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÌÂÙ¿ ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ fiˆ˜ Ë PHA, Ë Con-A, ÙÔ PWM Î·È Ë ÏÈÔ-

ÔÏ˘Û·Î¯·Ú›‰Ë LPS Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË. ™Â Ê¿ÛË ‡ÊÂÛË˜ Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

·ÓÙ·ÔÎÚ›ÓÔÓÙ·Ó ÌÂ ÙÚfiÔ ·ÚfiÌÔÈÔ ÌÂ ·˘Ù¿ ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘ Ô˘

·ÔÙÂÏÔ‡ÓÙ·Ó ·fi Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ ·È‰È¿ Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌË˜ ËÏÈÎ›·˜.

ªÂÙ·ÁÂÓ¤ÛÙÂÚÂ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ Ô˘ Ú·ÁÌ·ÙÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ÙËÓ ÂÚ›Ô‰Ô ÌÂÙ·-

Í‡ 1989 Î·È 1994157-161 ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡

·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ƒ∞ Â›¯·Ó ÌÈÎÚ‹ ‹ Î·È Î·ıfiÏÔ˘ ·¿ÓÙËÛË ÛÂ ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ·

(·fi ÂÓÙÂÚÔ‚·ÎÙËÚ›‰È·, ·fi ¯Ï·Ì‡‰È·, ·fi Ô˘ÚÂfiÏ·ÛÌ· Î.¿.) Ú¿ÁÌ·

Ô˘ ‰ÂÓ Û˘Ó¤‚·ÈÓÂ ÌÂ ÙËÓ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Â›¯·Ó ·ÔÌÔ-

ÓˆıÂ› ·fi ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙÈÎ‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· ÛÙ· ›‰È· ·ÓÙÈÁfiÓ·. ∂›ÛË˜,

ÛÂ fiÏÂ˜ ÙÈ˜ ÂÚÈÙÒÛÂÈ˜, Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ¤‰ÂÈ-

¯Ó·Ó ÂÏ¿¯ÈÛÙË ‹ Î·ÌÌ›· ·¿ÓÙËÛË.

O Yoshino162 ÛÂ ¤Ó· ·Ó·ÛÎÔÈÎfi ¿ÚıÚÔ ÙÔ 1993 ·Ó·Ê¤ÚÂÈ fiÙÈ ÛÂ

·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÈÎÚ‹˜ ËÏÈÎ›·˜ Ô˘ ·Ó‹ÎÔ˘Ó Î·È ÛÙÈ˜ ÙÚÂÈ˜ ÎÏÈÓÈÎ¤˜ ÌÔÚÊ¤˜ ÙË˜

¡π∞ (ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹, ÔÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ Î·È Û˘ÛÙËÌ·ÙÈÎ‹) Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹

·¿ÓÙËÛË Î·È Ô ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi˜ ÙˆÓ Δ Î·È μ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi ÙËÓ Â›-

‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ Î·È ·ÏÏÔ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Â›Ó·È ÌË Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ‹, ÔfiÙÂ ¤ÌÌÂÛ·

‰È·ÈÛÙÒÓÂÙ·È fiÙÈ ˘¿Ú¯ÂÈ ‰È·Ù·Ú·¯‹ ÛÙËÓ ÈÛÔÚÚÔ›· Î·È ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·

ÙÔ˘˜.

™’ fiÏÂ˜ ÙÈ˜ ÚÔ·Ó·ÊÂÚıÂ›ÛÂ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ Ë Ú·‰ÈÔ·Ó·-

ÛÔÏÔÁÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÌÂ [3H]-TdR. ¢È·Ê·›ÓÂÙ·È ÏÔÈfiÓ fiÙÈ ‰È¿ÊÔÚÔÈ ÂÚÂ˘ÓË-

Ù¤˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÒÓÙ·˜ ÙËÓ ›‰È· Ì¤ıÔ‰Ô Î·È ÔÈÎÈÏ›· ·fi ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡˜ ‰ÈÂ-

Á¤ÚÙÂ˜ Î·Ù¤ÏËÍ·Ó ÛÂ ·ÚfiÌÔÈ· Û˘ÌÂÚ¿ÛÌ·Ù· Î˘Ú›ˆ˜ ÁÈ· ÙË ƒ∞ ÙˆÓ ÂÓË-

Ï›ÎˆÓ Î·È ÁÈ· ÙÔ ™∂§.

°È· Ù· ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ Î·È È‰È·›ÙÂÚ· ÁÈ· ÙËÓ ·ÓÙ›-

75

ÛÙÔÈ¯Ë ÚÔ˜ ÙË ƒ∞ ÓfiÛÔ, ÙË ÓÂ·ÓÈÎ‹ È‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞), Ù· ‰Â‰ÔÌ¤-

Ó· Â›Ó·È fiˆ˜ ¤ÁÈÓÂ ‹‰Ë ·ÓÙÈÏËÙfi ÔÏ‡ ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤Ó·. £ÂˆÚËÙÈÎ¿ fiÌˆ˜

ı· ÂÚ›ÌÂÓÂ Î·ÓÂ›˜ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· ÚÔ˜ ÙË ƒ∞ ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ Â˘Ú‹Ì·Ù· ÁÂÁÔ-

Ófi˜ Ô˘ ˘Ô‰ËÏÒÓÂÙ·È ·fi Ù· Ì¤¯ÚÈ ÙÒÚ· ÂÏ¿¯ÈÛÙ· ‰Â‰ÔÌ¤Ó·. ΔÔ ÁÂÁÔÓfi˜

·˘Ùfi ·ÔÙ¤ÏÂÛÂ ÙÔ ÎÚÈÙ‹ÚÈÔ ÒÛÙÂ ÂÎÙfi˜ ·fi ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ

(ÔÌ¿‰· ÂÏ¤Á¯Ô˘ – ·Ó·ÊÔÚ¿˜) ÁÈ· Ó· ÂÈÏÂÁÔ‡Ó Î·È ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞ ˆ˜

ÂÈÏ¤ÔÓ ˘ÏÈÎfi ÁÈ· ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÙËÓ ÔÔ›·

Ú·ÁÌ·ÙÂ‡ÂÙ·È Ë ·ÚÔ‡Û· ‰È·ÙÚÈ‚‹ ‰Â‰ÔÌ¤ÓÔ˘ fiÙÈ Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿-

ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÁÓˆÛÙ¿ ÌÈÙÔÁfiÓ· ·ÔÙÂÏÂ› ÌÈ· ¿ÌÂÛË Ì¤ıÔ-

‰Ô ÁÈ· ÙÔÓ ¤ÏÂÁ¯Ô ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ¿˜ ÙÔ˘˜.

76

μ. ∂π¢π∫O ª∂ƒO™

77

À § π ∫ O – ª ∂ £ O ¢ O π

O ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›-

Ì·ÙÔ˜ ·ÓıÚÒÔ˘ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÂÚÈÏ¿Ì‚·ÓÂ ÙÚÂÈ˜ ÛÙfi¯Ô˘˜.

1. ΔÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

(CD69, CD71, CD25, HLA-DR)

2. ΔÔÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÊÂ-

Ófi˜ ÌÂ ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÌÂ ÙËÓ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË ÙË˜ BrdU ÁÈ·

ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘

ÔÛÔÛÙÔ‡ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ (.¯. Ki-

67)

3. ΔËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ·Ú·ÁˆÁ‹˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ Â›Ó·È

ÛËÌ·ÓÙÈÎ¤˜ ÁÈ· ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (.¯.

IL-2, IL-4, IFN-Á, IL-6)

À§π∫O

To ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·Ó ·fi ‰‡Ô ÔÌ¿‰Â˜ ·È‰ÈÒÓ:

∞′ ÔÌ¿‰·. 25 ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ ËÏÈÎ›·˜ 2-16 ÂÙÒÓ, Ô˘ ÚÔÛ¤Ú¯ÔÓÙ·Ó ÛÙÔ

∞ÈÌ·ÙÔÏÔÁÈÎfi ÂÚÁ·ÛÙ‹ÚÈÔ ÙË˜ ∞′ ¶·È‰È·ÙÚÈÎ‹˜ ∫ÏÈÓÈÎ‹˜ ÁÈ· ¤ÏÂÁ¯Ô Û˘Á-

ÁÂÓÔ‡˜ ·ÈÌÔÏ˘ÙÈÎ‹˜ ·Ó·ÈÌ›·˜. Δ· ·È‰È¿ ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ·˘Ù‹˜ ¯ÚËÛ›ÌÂ˘Û·Ó

ˆ˜ ÔÌ¿‰· ˘ÁÈÒÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ ÁÈ· ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ·ÊÂÓfi˜ Î·È ÁÈ·

ÙË Û‡ÁÎÚÈÛË ÙˆÓ Â˘ÚËÌ¿ÙˆÓ ÌÂ ÂÎÂ›Ó· ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ.

Δ· ‰ËÌÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ÛÙÔÈ¯Â›· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÙË˜ ∞′ ÔÌ¿‰·˜ (Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ)

Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 9.

™Â fiÏ· Ù· ·È‰È¿ – Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ Ë ·ÈÌÔÏË„›· Î·È Ë ÌÂÏ¤ÙË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈ-

ÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¤ÁÈÓÂ ÌÈ· ÊÔÚ¿. ™ÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ·, Î·È ·ÊÔ‡ ¤ÁÈÓÂ

Ë ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ ¿Ú¯ÈÛÂ Ë ÌÂÏ¤ÙË ÛÙ· ·È‰È¿ ÙË˜ μ′ÔÌ¿‰·˜.

μ′ ÔÌ¿‰·. 24 ·È‰È¿ ËÏÈÎ›·˜ 2,5-16 ÂÙÒÓ Ô˘ ¤·Û¯·Ó ·fi ¡Â·ÓÈÎ‹

π‰ÈÔ·ı‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞) Î·È Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·Ó ·fi ÙÔ ÂÈ‰ÈÎfi ¶·È‰ÔÚÂ˘-

79

80

¶›Ó·Î·˜ 9. ¢ËÌÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ÛÙÔÈ¯Â›· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÙË˜ ∞′ ÔÌ¿‰·˜ (˘ÁÈÂ›˜ – Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜)

A/· À°π∏ ¶∞π¢π∞ ºÀ§O ∏§π∫π∞(∞Ú¯ÈÎ¿ ÔÓfiÌ·ÙÔ˜) (¤ÙË)

1 ∑¡ ∞ 3,5

2 §¶ ∞ 5

3 °™ ∞ 3,5

4 ∫∫ ∞ 2

5 Ã¡ ∞ 16

6 Δ∫ £ 9

7 Δμ ∞ 8

8 °∞ ∞ 2

9 °∫ ∞ 7

10 ∞π ∞ 6

11 Δ∞ £ 2,5

12 °∫ £ 10

13 °∂ £ 7

14 ¶π ∞ 5,5

15 ¶¶ ∞ 12

16 ºª £ 14

17 Δª £ 8

18 Δ∂ ∞ 10,5

19 ∫¶ ∞ 10

20 ∫∞ ∞ 8

21 Δ∫ £ 4

22 ¶° ∞ 9

23 ¶• ∞ 2,5

24 ¶∂ £ 12

25 ∫μ ∞ 3,5

∞= ¿ÚÚÂÓ, £= ı‹Ï˘

Ì·ÙÔÏÔÁÈÎfi π·ÙÚÂ›Ô ÙË˜ ∞′ ¶·È‰È·ÙÚÈÎ‹˜ ∫ÏÈÓÈÎ‹˜ ÙÔ˘ πÔÎÚ·ÙÂ›Ô˘ °ÂÓÈ-

ÎÔ‡ ¡ÔÛÔÎÔÌÂ›Ô˘ £ÂÛÛ·ÏÔÓ›ÎË˜. ∏ ÂÈÏÔÁ‹ ÙË˜ NIA ·fi Ù· ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿

ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ¤ÁÈÓÂ ·ÊÂÓfi˜ ÁÈ·Ù› Â›Ó·È Ë Û˘¯ÓfiÙÂÚË ÚÂ˘Ì·ÙÔ¿-

ıÂÈ· ÙË˜ ·È‰ÈÎ‹˜ ËÏÈÎ›·˜ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÁÈ·Ù› ˘‹Ú¯Â Ë ÁÓÒÛË fiÙÈ ÛÙË ƒÂ˘-

Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· (ƒ∞) ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ ·ÏÏ¿ Î·È ÛÙË NIA (ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤Ó·

‰Â‰ÔÌ¤Ó·) Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ·

Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË.

ŸÏÔÈ ÔÈ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂÏÂÙ‹ıËÎ·Ó ‰‡Ô ÊÔÚ¤˜: 1. ™Â ÂÓÂÚÁfi Ê¿ÛË ÙË˜ Ófi-

ÛÔ˘ (¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ ‹ ˘ÔÙÚÔ‹) Î·È ÚÈÓ ·Ú¯›ÛÂÈ ÔÔÈ·‰‹ÔÙÂ Ê·ÚÌ·-

ÎÂ˘ÙÈÎ‹ ·ÁˆÁ‹. 2. OÈ ›‰ÈÂ˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ¤ÁÈÓ·Ó 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜

ıÂÚ·Â›·˜ ÌÂ ÌË ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹ ·ÓÙÈÊÏÂÁÌÔÓÒ‰Ë Î·È ·ÓÔÛÔÙÚÔÔÔÔÈËÙÈÎ¿

Ê¿ÚÌ·Î· (ÌÂıÔÙÚÂÍ¿ÙË, ÚÂ‰ÓÈ˙fiÓË).

ø˜ ÂÓÂÚÁfi˜ Ê¿ÛË ÙË˜ ¡π∞ ÔÚ›ÛÙËÎÂ Û‡ÌÊˆÓ· ÌÂ Ù· ‰ÈÂıÓ‹ ÎÚÈÙ‹ÚÈ·,

Ë ·ÚÔ˘Û›· ÊÏÂÁÌÔÓ‹˜ ÛÂ ÌÈ· ÙÔ˘Ï¿¯ÈÛÙÔÓ ¿ÚıÚˆÛË Ô˘ ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÂÙ·È

·fi Ô›‰ËÌ· Ì·Ï·ÎÒÓ ÌÔÚ›ˆÓ ‹ Î·È ‡‰Ú·ıÚÔ, fiÓÔ Î·Ù¿ ÙËÓ ÂÍ¤Ù·ÛË Î·È

ÂÚÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ÎÈÓËÙÈÎfiÙËÙ·˜ ‹ Î·È Û˘ÛÙËÌ·ÙÈÎÒÓ ÂÎ‰ËÏÒÛÂˆÓ (˘ÚÂÙfi,

ÂÍ¿ÓıËÌ·) Î·ıÒ˜ Î·È ·fi ÙËÓ ·ÚÔ˘Û›· ÙˆÓ Î·ıÈÂÚˆÌ¤ÓˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÔÍÂ›-

·˜ Ê¿ÛË˜ (·˘ÍËÌ¤ÓË Δ∫∂, CRP).

Δ· ‰ËÌÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ÛÙÔÈ¯Â›· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÙË˜ μ′ ÔÌ¿‰·˜ (·ÛıÂÓÒÓ) Û˘-

ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 10.

∏ ÌÂÏ¤ÙË ¤ÁÈÓÂ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÛÂ fiÏÔ˘˜

ÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ (24/24) Î·È ÛÂ 18/24 ¤ÁÈÓÂ Û˘Á¯ÚfiÓˆ˜ Î·È ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi.

™ÙÈ˜ ÂÚÈÙÒÛÂÈ˜ ·˘Ù¤˜ ˘‹Ú¯Â ‡‰Ú·ıÚÔ˜ ÛÂ Ì›· ÙÔ˘Ï¿¯ÈÛÙÔÓ ÌÂÁ¿ÏË ¿Ú-

ıÚˆÛË. ∏ ·ÈÌÔÏË„›· Î·È Ë ·ÚıÚÔÎ¤ÓÙËÛË Á›ÓÔÓÙ·Ó ÚÔÁÚ·ÌÌ·ÙÈÛÌ¤Ó·,

¿ÓÙÔÙÂ ÚˆÈÓ‹ ÒÚ· Î·È Ë ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ¿Ú¯È˙Â ·˘ıËÌÂÚfiÓ ÁÈ·Ù›

Â›Ó·È ÁÓˆÛÙfi fiÙÈ ÔÚÈÛÌ¤ÓÔÈ ·Ú¿ÁÔÓÙÂ˜ ÂËÚÂ¿˙Ô˘Ó Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ¯.

Â›Ó·È ÁÓˆÛÙfi fiÙÈ Ô ·ÚÈıÌfi˜ ÙˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (Î˘Ú›ˆ˜ ÙˆÓ CD4+) ÌÂÙ·‚¿Ï-

ÏÂÙ·È ÛÙ· ‰È¿ÊÔÚ· ¯ÚÔÓÈÎ¿ ‰È·ÛÙ‹Ì·Ù· ÙË˜ ËÌ¤Ú·˜ ÔfiÙÂ Ú¤ÂÈ Ë Ï‹„Ë

ÙÔ˘ ·›Ì·ÙÔ˜ Ó· Á›ÓÂÙ·È ÙËÓ ›‰È· ¿ÓÙÔÙÂ ÒÚ·.

81

82

¶›Ó·Î·˜ 10. ¢ËÌÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ÛÙÔÈ¯Â›· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÙË˜ μ′ ÔÌ¿‰·˜ (·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡Â·ÓÈÎ‹ π‰ÈÔ·ı‹∞ÚıÚ›ÙÈ‰·)

A/· ∞™£∂¡∂π™ ºÀ§O ∏§π∫π∞ ªOƒº∏ ∞¡∞ μ27 º∞™∏ £∂ƒ∞¶∂π∞(·Ú¯ÈÎ¿ ∂¡∞ƒ•∏™ ¡π∞ Δ∏™

ÔÓfiÌ·ÙÔ˜) ¡O™OÀ ¡O™OÀ(¤ÙË) (∂¡∞ƒ•∏ ‹

À¶OΔƒO¶∏)

1 Ã∂ £ 2,5 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

2 ∫ª £ 8 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂¡ ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

3 §• £ 15 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

4 Δ¢ £ 4,5 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂¡ ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

5 £∑ £ 3 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

6 ∫¢ ∞ 7 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

7 ΔÃ ∞ 6,5 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂¡ ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

8 ¶™ £ 7 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

9 ¶∞ £ 3 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂¡ ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

10 £∞ £ 3 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

11 ªÃ £ 7,5 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

12 ª¡ £ 12,5 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂¡ ª™∞º+ ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

13 μ¶ £ 4 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

14 æÃ £ 8 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ + - ∂À ª™∞º + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

15 Δª ∞ 13 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) - - ∂À ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

16 °∞ £ 8 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) - - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

17 O° £ 11 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) + - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

18 ¶º £ 11 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) - - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

19 ¶¡ ∞ 8 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) + - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

20 Δ¢ £ 4 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) + - ∂À ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

21 ™ª £ 16 ¶ÔÏ˘·ÚıÚÈÎ‹ RF(-) - - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

22 ∞Ã ∞ 13,5 ™˘ÛÙËÌ·ÙÈÎ‹ - - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

23 Δ∑ £ 10 ™˘ÛÙËÌ·ÙÈÎ‹ - - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

24 ºª £ 7 OÏÈÁÔ·ÚıÚÈÎ‹ - - ∂¡ ªΔÃ + ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹

ÂÂÎÙ·ıÂ›Û·

£ = ı‹Ï˘, ∞ = ¿ÚÚÂÓ, ¡π∞ = ¡Â·ÓÈÎ‹ π‰ÈÔ·ı‹˜ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰·, RF = ÚÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹˜ ·Ú¿ÁÔÓÙ·˜, ∞¡∞ = ·ÓÙÈ˘ÚËÓÈÎ¿

·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·, ∂¡ = ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘, ∂À = ¤Ó·ÚÍË ˘ÔÙÚÔ‹˜, ª™∞º = MË ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹ ·ÓÙÈÊÏÂÁÌÔÓÒ‰Ë Ê¿ÚÌ·Î·,

ªΔÃ = ªÂıÔÙÚÂÍ¿ÙË, ™ÙÂÚÔÂÈ‰‹ = ¶ÚÂ‰ÓÈ˙fiÓË

ª∂£O¢Oπ

1. ™˘ÏÏÔÁ‹ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·È ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡

• §‹„Ë ÌÂ ÊÏÂ‚ÔÎ¤ÓÙËÛË 10mL ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·È Û˘ÏÏÔÁ‹ ÙÔ˘ ÛÂ

Ë·ÚÈÓÈÛÌ¤Ó· ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· (50 πU ∏eparin-Na/mL)

• §‹„Ë ÙÔ˘Ï¿¯ÈÛÙÔÓ 1mL ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ÌÂ ·Ú·Î¤ÓÙËÛË ÙË˜ ¿Û¯Ô˘-

Û·˜ ¿ÚıÚˆÛË˜ Î·È ÚÔÛı‹ÎË 150ÌL ‰È·Ï‡Ì·ÙÔ˜ ˘·ÏÔ˘ÚÔÓÈ‰¿ÛË˜ (1000

IU bovine hyaluronidase/ 0,1M acetate buffer)

H Ï‹„Ë ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ (ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·È ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡)

Á›ÓÔÓÙ·Ó Î¿Ùˆ ·fi ¿ÛËÙÂ˜ Û˘Óı‹ÎÂ˜. °È· Ó· ·ÔÊÂ˘¯ıÂ› Ô Î›Ó‰˘ÓÔ˜ ÂÈ-

ÌfiÏ˘ÓÛË˜, Ë ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ Î·È Ë ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÁÈ· Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· Ú·ÁÌ·ÙÔÔÈÔ‡ÓÙ·Ó

ÛÂ ·ÔÛÙÂÈÚˆÌ¤ÓÔ ÂÚÈ‚¿ÏÏÔÓ ÛÂ ı¿Ï·ÌÔ Î¿ıÂÙË˜ ÓËÌ·ÙÈÎ‹˜ ÚÔ‹˜ (lami-

nar flow hood).

∞fi ÙÔ ‰Â›ÁÌ· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ :

– ¤Ó· Ì¤ÚÔ˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ

·ÓÙÈÁfiÓˆÓ (‹ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ‹ ÌÔÚ›ˆÓ, CDs) ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ (‚·ÛÈÎfi˜ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜) ÚÈÓ ÙË Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·

– ¤Ó· Ì¤ÚÔ˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ

·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ (CD69, CD71, CD25, HLA-

DR), ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘, ÁÈ· ÙÔ

ÔÛÔÛÙfi ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ BrdU Î·È ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ¤ÎÊÚ·-

ÛË˜ ÙÔ˘ Ki-67 ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔ-

ÁfiÓˆÓ Î·È

– ¤Ó· Ì¤ÚÔ˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÁÈ· ÙËÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈ-

ÓÒÓ (IL-2, IFN-Á, IL-4) ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

∂›ÛË˜, Ú¤ÂÈ Ó· ÙÔÓÈÛÙÂ› fiÙÈ, ÂÂÈ‰‹ Ë ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ μ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È Î˘Ú›ˆ˜ ÌÂ ÙË Ì¤ÙÚËÛË ÙÔ˘ ÙÂÏÈÎÔ‡ ÚÔ˚fiÓÙÔ˜ ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔ-

Ô›ËÛ‹˜ ÙÔ˘˜ ÚÔ˜ Ï·ÛÌ·ÙÔÎ‡ÙÙ·Ú·, ÙÈ˜ ·ÓÔÛÔÛÊ·ÈÚ›ÓÂ˜, ÙÔ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÔÓ

ÛÙËÓ ·ÚÔ‡Û· ‰È·ÙÚÈ‚‹ ÂÛÙÈ¿ÛÙËÎÂ Î˘Ú›ˆ˜ ÛÙÔÓ ¤ÏÂÁ¯Ô ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙË-

Ù·˜ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

83

2. ∂ÍÔÏÈÛÌfi˜

π. °È· ÙËÓ ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜:

– ŸÏ· Ù· ‰Â›ÁÌ·Ù· ·Ó·Ï‡ıËÎ·Ó ÛÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ EPICS XL

COULTER (∂ÈÎ. 20)

– ∏ ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·-

ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ Î·ıÒ˜ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ¤ÁÈÓÂ ÛÂ Multi Q-PREP

– ∏ ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÁÈ· DNA ·Ó¿Ï˘ÛË ¤ÁÈÓÂ ÛÂ DNA-

Workstation

¶ÚÈÓ ·Ú¯›ÛÂÈ Ë ÌÂÏ¤ÙË ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ Á›-

ÓÔÓÙ·Ó ÔÈÔÙÈÎfi˜ ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙÔ˘ ÔÚÁ¿ÓÔ˘ Ô ÔÔ›Ô˜ ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÂÈ Ù· ÂÍ‹˜:

a. ∂˘ı˘ÁÚ¿ÌÌÈÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER (LASER alignment) [FLOW-CHECK Fluorospheres, μ∂CKMAN COULTER, Miami, Florida]

∫·ıËÌÂÚÈÓ¿ Á›ÓÂÙ·È ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙˆÓ ÔÙÈÎÒÓ Î·È ˘‰Ú·˘ÏÈÎÒÓ Û˘ÛÙËÌ¿-

ÙˆÓ ÙÔ˘ ÔÚÁ¿ÓÔ˘ ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ë ÌÔÓ‹ÚË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ‰È¿Ù·ÍË Ô˘ ‰È¤Ú¯ÂÙ·È

·fi ÙÔ Ú‡Á¯Ô˜ ÙË˜ Î˘„¤ÏË˜ ÚÔ‹˜ Ó· ÚÔÛ›ÙÂÈ Î¿ıÂÙ· ÛÙË ‰¤ÛÌË LASER.

O ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ‰È·Ï‡Ì·ÙÔ˜ ÂÈ‰ÈÎÒÓ ÌÈÎÚÔÛÊ·ÈÚ›ˆÓ

(FLOW-CHECK Fluorospheres) ·fi ÔÏ˘ÛÙ˘Ú¤ÓÈÔ ‰È·Ì¤ÙÚÔ˘ 10Ìm (Û˘-

ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË 1 × 106 ÛÊ·ÈÚ›‰È·/mL) ÛËÌ·ÛÌ¤Ó· ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹

Ô˘ ÂÎ¤ÌÂÈ ÛÂ Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ 525nm–700nm Î·È ‰ÈÂÁÂ›ÚÂÙ·È ÛÙ· 488nm

·fi LASER ∞ÚÁÔ‡ (∂ÈÎ. 21).

∏ Â˘ı˘ÁÚ¿ÌÌÈÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ ÂÎÙÈÌ¿Ù·È ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ ·Ú¿ÌÂÙÚÔ HPCV

(∏alf Peak Coefficient of Variance). H HPCV Â›Ó·È ·Ô‰ÂÎÙ‹ fiÙ·Ó Â›Ó·È

<3% ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ Î·È <2% ÁÈ· DNA

ÂÊ·ÚÌÔÁ¤˜.163

84

∂ÈÎfiÓ· 20. ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹˜ ÚÔ‹˜ EPICS XL COULTER.

‚. ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ Â˘·ÈÛıËÛ›·˜ ÙˆÓ ÊˆÙÔÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÙÒÓ

[FLOW SET, μ∂CKMAN COULTER, Miami, Florida]

∂‚‰ÔÌ·‰È·›· Á›ÓÂÙ·È ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ¤ÓÙ·ÛË˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÊˆÙÔÔÏ-

Ï·Ï·ÛÈ·ÛÙÒÓ ÁÈ· ÙËÓ ÚÔÙ˘ÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ FSC Î·È SSC Î·ıÒ˜ Î·È ÙˆÓ ÛË-

Ì¿ÙˆÓ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ·fi Ù· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÌÂÓ· ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒ-

Ì·Ù·. ÃÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Û˘ÓıÂÙÈÎ¿ ÛÊ·ÈÚ›‰È· (Flow Set fluorospheres)

Î·ıÔÚÈÛÌ¤ÓÔ˘ ÌÂÁ¤ıÔ˘˜ (3.6 Ìm) Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹

Ô˘ ÂÎ¤ÌÂÈ ÛÂ Ì‹ÎÔ˜ Î‡Ì·ÙÔ˜ 525nm–700nm Î·È ‰ÈÂÁÂ›ÚÂÙ·È ÛÙ· 488nm

·fi LASER ∞ÚÁÔ‡.164

Á. ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ¯ÚˆÌ·ÙÈÎ‹˜ ·ÓÙÈÛÙ¿ıÌÈÛË˜ (Colour Compensation)

[CYTO-COMP, μ∂CKMAN COULTER, Miami, Florida]

T· Ê¿ÛÌ·Ù· ÂÎÔÌ‹˜ ÙˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È

ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙Ô˘Ó ÌÂÚÈÎ‹ ÂÈÎ¿Ï˘„Ë (EÈÎ 22).

85

∂ÈÎfiÓ·. 21. πÛÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÂÈ‰ÈÎÒÓ ÛÊ·ÈÚÈ‰›ˆÓ fiÔ˘ Î·Ù·ÁÚ¿ÊÔÓÙ·È Ù·HPCV ÁÈ· Î¿ıÂ ÊıÔÚÈfi¯ÚˆÌ·, ÁÈ· ÙÔÓ ¤ÏÂÁ¯Ô ÙË˜ ÛˆÛÙ‹˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÙÔ˘ ÔÚÁ¿ÓÔ˘.

232

[email protected]

[email protected]

248

0 FL1 Lin 1023

0FL3 Lin

1023

[Ungated] FS Lin-ADC (5000) [[email protected] AND [email protected]]FL1 Lin-ADC

[[email protected] AND [email protected]]FL2 Lin-ADC [[email protected] AND [email protected]]FL3 Lin-ADC

221

[email protected]

FC770(-)

0 FS Lin 1023

215

0FL2 Lin

[email protected]

1023

πnstitution: IPPOKRATIO HOSPITALProtocol: QC 1L Flow-Check pro

∞·ÈÙÂ›Ù·È ÏÔÈfiÓ ÌÈ· ‰È·‰ÈÎ·Û›· ÁÈ· ÙË ‰ÈfiÚıˆÛË ÙË˜ Ê·ÛÌ·ÙÈÎ‹˜ ÂÈÎ¿-

Ï˘„Ë˜ ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙÔ˘ Cyto-Comp system of reagents Kit Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È

·fi Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ‡˜ ·Ó¿ ‰‡Ô, ÙÂÛÛ¿ÚˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Û˘Ó‰Â-

‰ÂÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù· Î·È Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· ÙÔ˘˜ ÂÍ‹˜: FITC vs PE, PE

vs ECD, PE vs PC5, ECD vs PC5.165,166

II. °È· ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜:

– æ˘ÎÙÈÎ‹ Ê˘ÁfiÎÂÓÙÚÔ˜ 4° C

– £¿Ï·ÌÔ˜ Î¿ıÂÙË˜ ÓËÌ·ÙÈÎ‹˜ ÚÔ‹˜ (Laminar flow hood - biosafety cabi-

net)

– ∫Ï›‚·ÓÔ˜ CO2

3. ∞ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ·

π. °È· ÙËÓ ∫˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜:

ªÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· (MoAbs) ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤Ó· ÌÂ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù·

ÃÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ› ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Û˘Ó‰Â‰Â-

Ì¤ÓˆÓ ÌÂ Ê˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË (PE), ÈÛÔıÂÈ·Î˘·ÓÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË (FITC) Î·È

ÌÂ Ê˘ÎÔÂÚ˘ıÚ›ÓË-Î˘·Ó›ÓË 5 (PE-Cy5 ‹ PC5) ÙˆÓ ÂÙ·ÈÚÂÈÒÓ COULTER

[Miami, Florida] Î·È IMMUNOTECH [∏amburg, Germany]. ∏ ÂÈÏÔÁ‹

ÙˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ FITC, PE Î·È PC5 ¤ÁÈÓÂ ÂÂÈ‰‹ Ë ¯ÚˆÌ·ÙÈÎ‹ ÂÈÎ¿-

Ï˘„Ë ÙˆÓ Ê·ÛÌ¿ÙˆÓ ÂÎÔÌ‹˜ ·˘ÙÒÓ ÙˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ Â›Ó·È ÌË‰·ÌÈÓ‹.

86

EÈÎfiÓ·. 22. º¿ÛÌ·Ù· ÂÎÔÌ‹˜ ÙˆÓ Û˘ÓËı¤ÛÙÂÚˆÓ ÊıÔÚÈÔ¯ÚˆÌ¿ÙˆÓ (FITC, PE,ECD, PC5, PC7, APC) Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜.

500 600 700 800

ª‹ÎÔ Î‡Ì·ÙÔ (nm)

FITC PE ECD APC PC5 PC7

ŒÓÙ·

ÛË

ÊıÔ

ÚÈÛ

ÌÔ

‡

(Rela

tive F

luore

scence)

OÈ Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ› ÙˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıË-

Î·Ó ÁÈ· ÙËÓ ÌÂÏ¤ÙË ÙˆÓ ˘ÔÏËı˘ÛÌÒÓ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (‚·ÛÈÎfi˜ ·ÓÔ-

ÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜) ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· Î·È ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi Ê·›ÓÔÓÙ·È ÛÙÔÓ

›Ó·Î· 11.

OÈ Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ› ÙˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıË-

Î·Ó ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜

CD69 (ÚÒÈÌÔ˜ ‰Â›ÎÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜), CD71 (˘Ô‰Ô¯¤·˜ ÙË˜ ÙÚ·ÓÛÊÂ-

Ú›ÓË˜), CD25 (˘Ô‰Ô¯¤·˜ ÙË˜ ÈÓÙÂÚÏÂ˘Î›ÓË˜-2) Î·È HLA-DR (ÌfiÚÈÔ ÙÔ˘

M∏C) ÛÙ· CD3+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ê·›ÓÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 12.

87

¶›Ó·Î·˜ 11. ™˘Ó‰˘·ÛÌÔ› ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ (ÚˆÙfiÎÔÏÏÔ) ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfiÙˆÓ CDs (ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ‹ ‰ÂÈÎÙÒÓ ‹ ÌÔÚ›ˆÓ) ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ªO¡O∫§ø¡π∫∞ Ãƒ∏™πªOΔ∏Δ∞ ∂Δ∞πƒ∂π∞

FITC PE PE-Cy5 ∞Ó›¯ÓÂ˘ÛË/ª¤ÙÚËÛË

πÛÔÙ˘ÈÎfi πÛÔÙ˘ÈÎfi CD45* AÓ›¯ÓÂ˘ÛË ÌË ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ COULTER/

‰Â›ÁÌ· ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ IMMUNOTECH

ÂÏ¤Á¯Ô˘ (IgG1FITC/

(IgG1FITC/ IgG1PE)

IgG1PE)

CD2 CD19 CD45 μ, Δ Î·È ¡∫-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ IMMUNOTECH

CD2 CD20 CD45 μ, Δ Î·È ¡∫-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ COULTER

CD3 CD16CD56 CD45 Δ Î·È ¡∫-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ IMMUNOTECH

CD3 CD4 CD45 CD3+CD4+ T-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ COULTER

(‚ÔËıËÙÈÎÒÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ)

CD4 CD29 ‹ CD45 ªÓËÌÔÓÈÎÒÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ IMMUNOTECH

CD45RO

CD4 CD45RA CD45 ¶·Úı¤ÓˆÓ (naïve) Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ IMMUNOTECH

CD3 CD8 CD45 CD3+CD8+ T-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ COULTER

(Î·Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎÒÓ/Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎÒÓ)

CD8 CD4 CD45 CD4+ Î·È CD8+ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ COULTER

CD8 CD28 CD45 CD8+CD28+ (Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎÒÓ) IMMUNOTECH

Î·È CD8+CD28- (Î·Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎÒÓ)

Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

* ∏ ‡·ÚÍË ÙÔ˘ ‰Â›ÎÙË CD45 ÛÂ fiÏ· Ù· ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· Î¿ÓÂÈ ‰˘Ó·Ù‹ ÙËÓ ÙÔÔı¤ÙËÛË ÙÔ˘ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ·-

Ú·ı‡ÚÔ˘ (gate) ÌÂ ‚¿ÛË ÙË Û˘Û¯¤ÙÈÛË ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙÔ˘ CD45 Î·È SSC (Ï¿ÁÈÔ˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡).

°È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ (bromodeoxyuri-

dine, BrdU) Ô˘ ÂÓÛˆÌ·ÙÒıËÎÂ ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ DNA ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹-

ıËÎÂ ·ÓÙ›ÛˆÌ· Î·Ù¿ ÙË˜ BrdU Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓÔ ÌÂ ÈÛÔıÂÈ·Î˘·ÓÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂ-

ÛÎÂ˝ÓË (anti-BrdU FITC).167

°È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡

Ki-67 ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· Ki-67 ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ

ÈÛÔıÂÈ·Î˘·ÓÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË (Ki-67 FITC) Î·ıÒ˜ Î·È ÙÔ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ô

ÈÛÔÙ˘ÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (Negative Isotype control) IgG1 kappa ÔÓÙÈ-

ÎÔ‡.

°È· ÙËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÙË˜ ·Ú·ÁˆÁ‹˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ÌÂ

Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ÁÈ· ÙÔ

CD3 ÙÔ CD69 Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂ PE-Cy5 Î·È FITC ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· [μ∂CKMAN

COULTER, Miami, Florida] Î·È ÁÈ· ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2, IFN-Á, IL-4

Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤Ó· ÌÂ PE [R&D Systems, Abingdon, United Kingdom] Î·ıÒ˜

Î·È Ù· ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· ÈÛÔÙ˘ÈÎ¿ ‰Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘.

¢È·Ï‡Ì·Ù· ÚÔ·Ú·ÛÎÂ˘‹˜ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ

·. °È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈ-ÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì·Î·È ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi:

°È· ÙËÓ ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ¤ÙÔÈÌ· ‰È·-

Ï‡Ì·Ù· ÙÔ˘ ÂÌÔÚ›Ô˘ [IMMUNOPREP Reagent System, COULTER] ÁÈ·

ÙË Ï‡ÛË ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÙË ÌÔÓÈÌÔÔ›ËÛË ÙˆÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

88

¶›Ó·Î·˜ 12. ™˘Ó‰˘·ÛÌÔ› ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ (ÚˆÙfiÎÔÏÏÔ) ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ-‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ªO¡O∫§ø¡π∫∞ ∂Δ∞πƒ∂π∞FITC PE PE-Cy5

πÛÔÙ˘ÈÎfi ‰Â›ÁÌ· πÛÔÙ˘ÈÎfi ‰Â›ÁÌ·

ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÂÏ¤Á¯Ô˘ CD45 COULTER/IMMUNOTECH

(IgG1FITC/IgG1PE) (IgG1FITC/IgG1PE)

CD3 CD69 CD45 IMMUNOTECH

CD3 CD71 CD45 IMMUNOTECH

CD3 CD25 CD45 COULTER

CD3 HLA-DR CD45 COULTER

ΔÔ IMMUNOPREP Reagent

System Â›Ó·È ÌÈ· ÁÚ‹ÁÔÚË Î·È ‹È·

Ì¤ıÔ‰Ô˜ Ï‡ÛË˜ ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÒÓ ¯ˆÚ›˜

Ï‡ÛÂÈ˜ Ô˘ ‰ÂÓ ÂËÚÂ¿˙ÂÈ ÙËÓ

ÌÔÚÊÔÏÔÁ›· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Î·È ‰È·ÙËÚÂ› ÙËÓ ·ÎÂÚ·ÈfiÙËÙ· ÙË˜

Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÂÈÊ¿ÓÂÈ·˜ (··Ú·›ÙË-

ÙË ÚÔ¸fiıÂÛË ÁÈ· ÙË ÌÂÏ¤ÙË ÙˆÓ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹

ÚÔ‹˜).168, 169 ∞ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ÙÚ›·

·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ· Ô˘ ‰È·ÙËÚÔ‡ÓÙ·È

ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT,

20-25° C):

IMMUNOPREP A: ÂÚÈ¤¯ÂÈ Ì˘ÚÌËÎÈÎfi ÔÍ‡ (Formic acid) Î·È ·ÔÙÂÏÂ›

Ï˘ÙÈÎfi Ì¤ÛÔ ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

IMMUNOPREP B: ÂÚÈ¤¯ÂÈ ·ÓıÚ·ÎÈÎfi Ó¿ÙÚÈÔ, ¯ÏˆÚÈÔ‡¯Ô Ó¿ÙÚÈÔ, ıÂÈ˚-

Îfi Ó¿ÙÚÈÔ (Sodium Carbonate, Sodium Chloride, So-

dium Sulpfate) Î·È ÛÙ·ıÂÚÔÔÂ› ÙÔÓ ÏËı˘ÛÌfi ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÁÂÓÈÎ¿ ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

IMMUNOPREP C: ÂÚÈ¤¯ÂÈ ·Ú·ÊÔÚÌ·Ï‰Â˛‰Ë 1% (Paraformaldehyde)

Î·È ÌÔÓÈÌÔÔÈÂ› (fixation) ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË

‚. °È· ÙÔÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘Ù-Ù¿ÚˆÓ ·ÊÂÓfi˜ ÌÂ ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÌÂ ÙËÓ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛËBrdU ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÌÂ ÙÔÓÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÔÏ-Ï·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ fiˆ˜ ÙÔ ∫›-67:

°È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔ‡ ÙÔ˘ DNA Î·È ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ Î˘Ù-

Ù·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ (ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔ-

ÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË) ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ¤ÙÔÈÌ· ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ· ÙÔ˘ ÂÌÔÚ›Ô˘

[DNA-Prep Reagents kit, COULTER]

ΔÔ DNA-Prep Reagents kit ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ‰‡Ô ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ·:

DNA-Prep LPR (Lysing and Permeabilizing Reagent): Ï˘ÙÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì· Ô˘

ÂÚÈ¤¯ÂÈ <0.1% Î˘·ÓÈÔ‡¯Ô Î¿ÏÈÔ Î·È <0.1% ¡aN3

89

DNA-Prep Stain: ‰È¿Ï˘Ì· ¯ÚÒÛË˜ Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ 50Ìg/mL Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›-

‰ÈÔ (<0.5% propidium iodide), RNAse (4 KU/mL) Î·È

<0.1% ¡aN3

°È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ (bromodeoxyuridi-

ne, BrdU) Ô˘ ÂÓÛˆÌ·ÙÒıËÎÂ ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ DNA ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıË-

Î·Ó:

– ¢È¿Ï˘Ì· ¯ÚÒÛË˜ (Staining Buffer)

1x DPBS + 3% FBS (Fetal Bovine Serum, heat inactivated) + 0.09%

NaN3

– BrdU Flow Kit [BD Pharmigen , San Diego, California], ÙÔ ÔÔ›Ô ÂÚÈ-

Ï·Ì‚¿ÓÂÈ:

Fluorochrome-conjugated anti-BrdU Antibody: Stock ‰È¿Ï˘Ì· ÙÔ˘ ·ÓÙÈ-

BrdU FITC ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ ÙÔ ÔÔ›Ô ‰È·Ï‡ÂÙ·È 1:50 ÌÂ 1xBD Perm/Wash

Buffer

μD Cytofix/Cytoperm Buffer: ÂÚÈ¤¯ÂÈ ·Ú·ÊÔÚÌ·Ï‰Â˛‰Ë Î·È ·ÔÚÚ˘-

·ÓÙÈÎfi Û·ÔÓ›ÓË. ¢È·ÙËÚÂ› ÙËÓ ÌÔÚÊÔÏÔÁ›· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘, ÛÙ·ıÂÚÔ-

ÔÈÂ› ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ¤˜ ÚˆÙÂ˝ÓÂ˜ (fixation reagent) Î·È Î¿ÓÂÈ ‰È·ÂÚ·Ù‹

ÙË Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÁÈ· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ¯ÚÒÛË (permeabilization

reagent)

BD Perm/Wash Buffer: 10x stock ‰È¿Ï˘Ì· (Â·Ó·‰È·Ï˘ÙÔÔÈÂ›Ù·È ÌÂ

·ÈÔÓÈÛÌ¤ÓÔ ∏2O) Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ FBS (fetal bovine serum) Î·È ·ÔÚÚ˘-

·ÓÙÈÎfi Û·ÔÓ›ÓË

BD Cytoperm Plus Buffer: ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È ÁÈ· ÙËÓ ÂÓ›Û¯˘ÛË ÙË˜ ¯ÚÒ-

ÛË˜ Î·È Û·Ó ‰Â˘ÙÂÚÂ‡ÔÓ ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈÔ ÁÈ· ·‡ÍËÛË ÙË˜ ‰È·ÂÚ·ÙfiÙËÙ·˜

ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜

– BrdU: ¢È¿Ï˘Ì· 10 mg/mL BrdU (32.5mM) ÛÂ 1x DPBS

– DNase: ¢È¿Ï˘Ì· 1 mg/mL ‰ÂÔÍ˘ÚÈ‚Ô˘ÓÔ˘ÎÏÂ¿ÛË˜ ÛÂ 1x DPBS

– 7-∞∞D (7-·ÌÈÓÔ-·ÎÙÈÓÔÌ˘Î›ÓË) Ô˘ Â›Ó·È ÌÈ· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÙÔ˘ ÔÏÈÎÔ‡

DNA

°È· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡

Ki-67 ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ¤ÙÔÈÌ· ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ· ÙÔ˘ ÂÌÔÚ›Ô˘ [πntraPrep

Permeabilization Reagent, IMMUNOTECH ∏amburg, Germany].

To πntraPrep Permeabilization Reagent ·ÔÙÂÏÂ›Ù·È ·fi ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹-

ÚÈ· Ô˘ Î·ıÈÛÙÔ‡Ó Ù· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·ÓÙÈÁfiÓ· fiˆ˜ ÙÔ Ki-67 ÚÔÛÈÙ¿, ÂÈ-

ÙÚ¤ÔÓÙ·˜ ¤ÙÛÈ ÙÔÓ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓÔÙ˘ÈÎfi ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi Î˘ÙÙ·ÚÔÏ·ÛÌ·ÙÈ-

ÎÒÓ Î·È ˘ÚËÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ. ∞˘Ùfi ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È

Î¿ÓÔÓÙ·˜ ‰È·ÂÚ·Ù‹ ÙËÓ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (‰ËÌÈÔ˘ÚÁÔ‡ÓÙ·È Ô¤˜)

90

¯ˆÚ›˜ fiÌˆ˜ Ó· ÂËÚÂ¿˙ÂÙ·È Ë Û˘ÓÔÏÈÎ‹ ÌÔÚÊÔÏÔÁ›· ÙÔ˘ Î˘ÙÙ¿ÚÔ˘ Î·È Î·-

Ù¿ Û˘Ó¤ÂÈ· ‰ÂÓ ÂËÚÂ¿˙ÔÓÙ·È Ù· ÛÎÂ‰·ÛÙÈÎ¿ ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÈÎ¿ ÙÔ˘ Ô˘

ÌÔÚÂ› Ó· ·ÏÏÔÈÒÛÔ˘Ó Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜.

¶ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÂÈ ‰˘Ô ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈ·:

Reagent 1: ÂÚÈ¤¯ÂÈ 5.5% ÊÔÚÌ·Ï‰Â˛‰Ë Î·È ÌÔÓÈÌÔÔÈÂ› ÙÔÓ ÏËı˘ÛÌfi

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (Fixation Reagent)

Reagent 2: ·ÔÚÚ˘·ÓÙÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì· Û·ÔÓ›ÓË˜ ÛÂ PBS (PBS-Buffered

saponin-based) Î·È 0.1% NaN3, Ô˘ ÚÔÎ·ÏÂ› Ï‡ÛË ÙˆÓ ÂÚ˘-

ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È Î·ıÈÛÙ¿ ‰È·ÂÚ·Ù‹ ÙË ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (Permeabilization Reagent)

Á. °È· ÙËÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó:

ƒ˘ıÌÈÛÙÈÎ¿ ‰È·Ï‡Ì·Ù·

– ¢È¿Ï˘Ì· PBS (Phosphate buffered saline) ÌÂ 0.5% ·Ï‚Ô˘Ì›ÓË (Bovine

Serum Albumin, BSA) Î·È 0.1% ¡·¡3.

– ¢È¿Ï˘Ì· ∏anks’BSS (∏anks Buffered salt Solution, HBSS) Ô˘ ‰ÂÓ Â-

ÚÈ¤¯ÂÈ Mg2+ Î·È Ca2+ [GIBCO Europe, Basel Switzerland].

– πntraPrep Permeabilization Reagent (Reagent 1 Î·È Reagent 2)

[IMMUNOTECH].

°È· ÙË ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹ ‰È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (cell stimulation)

– ∂ÛÙ¤Ú·˜ ÙË˜ ÊÔÚÌfiÏË˜ ƒª∞ (Phorbol-12-myristate-13-acetate)

∞Ó·Û‡ÛÙ·ÛË ÛÂ DMSO (Dimethyl

sulfoxide) Î·È ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ‰È·Ï‡Ì·ÙÔ˜ 0.1

mg/mL (stock ‰È¿Ï˘Ì·) ÙÔ ÔÔ›Ô ‰È·¯ˆÚ›-

˙ÂÙ·È ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ (aliquots ÙˆÓ

20ÌL) Ô˘ Ê˘Ï¿ÛÛÔÓÙ·È ÛÙÔ˘˜ –20° C.

AÚ·ÈÒÓÔ˘ÌÂ 1:100 ÌÂ PBS (+ Na¡3)

ÒÛÙÂ Ë ÙÂÏÈÎ‹ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË ÙÔ˘ ƒª∞ Ô˘

ı· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ÛÔ˘ÌÂ Ó· Â›Ó·È 25ng/mL.

– πÔÓÔÌ˘Î›ÓË (Ionomycin)

∞Ó·Û‡ÛÙ·ÛË ÛÂ 0.5 mg/mL ÛÂ DMSO Î·È ‰È·Ù‹ÚËÛË ÛÙÔ˘˜ –20° C.

AÚ·ÈÒÓÔ˘ÌÂ 1:10 ÌÂ PBS (+ Na¡3) ÒÛÙÂ Ë ÙÂÏÈÎ‹ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË Ó· Â›-

Ó·È 1mg/mL.

91

Ca2+ IÓÔÌ˘Î›ÓË

PMA

°È· ÙËÓ ·Ó·ÛÙÔÏ‹ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÙÔ˘ Û˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜ Golgi

(block the Golgi apparatus)

∞Ó·ÛÙ¤ÏÏÂÙ·È Ë ¤ÎÎÚÈÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈ-

ÓÒÓ ÌÂ Ô˘Û›Â˜ ·Ó·ÛÙÔÏÂ›˜ ÙË˜ ÚˆÙÂ˚ÓÈÎ‹˜

ÌÂÙ·ÊÔÚ¿˜ Ô˘ “ÌÏÔÎ¿ÚÔ˘Ó” ÙÔ Û‡ÛÙËÌ·

Golgi ÒÛÙÂ Ó· ·ÚÂÌÔ‰›˙ÂÙ·È Ë ¤ÍÔ‰Ô˜ ÙˆÓ

Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ·fi ÙÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ Î·È Ó· ÂÁÎÏˆ-

‚›˙ÔÓÙ·È Ì¤Û· ÛÂ ·˘Ùfi, ÌÂ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙËÓ

·‡ÍËÛË ÙË˜ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛ‹˜ ÙÔ˘˜ ÛÙÔ Î˘ÙÙ·Úfi-

Ï·ÛÌ· ÚÔÎÂÈÌ¤ÓÔ˘ Ó· ÂÈÙÂ˘¯ıÂ› Ô ÚÔÛ-

‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙÔ˘˜.

– MoÓÂÓÛ›ÓË (ªÔnensin)

AÚ·ÈÒÓÔ˘ÌÂ 7,158 mg ÌÔÓÂÓÛ›ÓË˜ ÛÂ 1 mL ·Èı·ÓfiÏË˜ (96%) Î·È ÙÔ

‰È¿Ï˘Ì· Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÂÈ ‰È·¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ (aliquots ÙˆÓ

20ÌL) Ô˘ Ê˘Ï¿ÛÛÔÓÙ·È ÛÙÔ˘˜ –20° C.

AÚ·ÈÒÓÔ˘ÌÂ ÌÂ PBS (+ Na¡3) ÒÛÙÂ Ë ÙÂÏÈÎ‹ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË ÛÙËÓ Î·Ï-

ÏÈ¤ÚÁÂÈ· Ó· Â›Ó·È 2,5Ìª

– ªÚÂÊÂÏ‰›ÓË ∞ (Brefeldin A, BFA)170

∞Ó·Û‡ÛÙ·ÛË ÛÂ DMSO Î·È ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· stock ‰È·Ï‡Ì·ÙÔ˜ 5 mg/mL ÙÔ

ÔÔ›Ô ‰È·¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÂ aliquots (20ÌL), Ô˘ Ê˘Ï¿ÛÛÔÓÙ·È ÛÙÔ˘˜ –20° C.

AÚ·ÈÒÓÔ˘ÌÂ 1:10 ÌÂ PBS(+ Na¡3) ÒÛÙÂ Ë ÙÂÏÈÎ‹ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË Ó· Â›-

Ó·È 10 Ìg/mL.

ππ. °È· ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ:

ŸÏ· Ù· ˘ÏÈÎ¿ Î·È Ù· ‰È·Ï‡Ì·Ù· Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ÛÙËÓ Î·ÏÏÈ¤Ú-

ÁÂÈ· ‹Ù·Ó ·ÔÛÙÂÈÚˆÌ¤Ó· ÌÂ ˘ÁÚ‹ ·ÔÛÙÂ›ÚˆÛË (fiÔ˘ ÂÈÙÚÂfiÙ·Ó) ‹ ÌÂ

·ÔÛÙÂ›ÚˆÛË –Î˘Ú›ˆ˜ ÙˆÓ ˘ÁÚÒÓ ‰È·Ï˘Ì¿ÙˆÓ– ÌÂ ¤Ú·ÛÌ¿ ÙÔ˘˜ ·fi Ê›Ï-

ÙÚ· 0.45 Ìm.

ƒ˘ıÌÈÛÙÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì· DPBS

ÃÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÙÔ Ú˘ıÌÈÛÙÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì· Dulbecco’s phosphate buf-

fered saline solution ¯ˆÚ›˜ Ca2+ Î·È Mg2+ [GIBCO BRL, Life Technolo-

gies Ltd., Europe, Basel Switzerland]

92

ƒ˘ıÌÈÛÙÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì· Ï‡ÛË˜ (Wash Buffer)

°È· Ï‡ÛÂÈ˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÙÔ Ú˘ıÌÈÛÙÈÎfi ‰È¿Ï˘Ì· PBS ÌÂ 0.5%

·Ï‚Ô˘Ì›ÓË (Bovine Serum Albumin, BSA) Î·È 0.1% ¡·¡3. ¢È·ÙËÚÂ›Ù·È

ÛÙÔ˘˜ 4° C.

¢È¿Ï˘Ì· ‰È·¯ˆÚÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÃÚËÛÈÌÔÔ›ËıËÎÂ ÙÔ ‰È¿Ï˘Ì· HISTOPAQUE-1077 (solution of poly-

sucrose and sodium diatrizoate) ˘ÎÓfiÙËÙ·˜ 1.077 ± 0.001 g/mL [SIGMA

DIAGNOSTICS, Saint Louis, Missouri, USA].

¢È¿Ï˘Ì· ∏anks’BSS (∏anks Buffered salt Solution, HBSS) Ô˘ ‰ÂÓ ÂÚÈ¤¯ÂÈ

Mg2+ Î·È Ca2+ [GIBCO BRL, Life Technologies Ltd., Europe, Basel

Switzerland].

¶Ï‹ÚÂ˜ Î·ÏÏÈÂÚÁËÙÈÎfi Ì¤ÛÔ (Complete medium, CM) ÙÔ ÔÔ›Ô ÂÚÈ¤¯ÂÈ:

– £ÚÂÙÈÎfi ˘ÏÈÎfi RPMI-1640 [GIBCO Europe, Basel Switzerland]

– ¢È¿Ï˘Ì· ¶ÂÓÈÎÈÏÏ›ÓË˜-™ÙÚÂÙÔÌ˘Î›ÓË˜ (100 πU/mL penicillin, 100Ìg/mL

streptomycin) [GIBCO Europe, Basel Switzerland]

– 2mM L-ÁÏÔ˘Ù·Ì›ÓË˜ (Glutamine) [GIBCO Europe, Basel Switzerland]

– 5×10-5M 2-ÌÂÚÎ·ÙÔ·Èı·ÓfiÏË˜ [SIGMA DIAGNOSTICS, Saint Louis,

Missouri, USA]

– 10% ∞μ ·ÓıÚÒÈÓÔ ÔÚfi (ÚÔ¤Ú¯ÂÙ·È ·fi ˘ÁÈÂ›˜ ÂÓ‹ÏÈÎÂ˜ ·ÈÌÔ‰fiÙÂ˜ Ô˘

ÚÔÛ¤ÊÂÚ·Ó ·›Ì· ÂıÂÏÔÓÙÈÎ¿ ÛÙÔ ΔÌ‹Ì· ∞ÈÌÔ‰ÔÛ›·˜. §‹„Ë 7-10 mL ·›-

Ì·ÙÔ˜ ·fi Î¿ıÂ ÂıÂÏÔÓÙ‹ ÛÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ ¯ˆÚ›˜ ·ÓÙÈËÎÙÈÎfi Î·È ÛÙË Û˘Ó¤-

¯ÂÈ· ·ÎÔÏÔ˘ıÂ› Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 400 x g ÁÈ· 10 ÏÂÙ¿ ÒÛÙÂ Ó· ·Ô¯ˆ-

ÚÈÛÙÂ› Ô ÔÚfi˜. OÈ ÔÚÔ› ·fi ÙÔ˘˜ ‰È¿ÊÔÚÔ˘˜ ·ÈÌÔ‰fiÙÂ˜ ·Ó·ÌÈÁÓ‡ÔÓÙ·Ó

(pooled human serum) Î·È ÙÔ Ì›ÁÌ· ·ÊÔ‡ ‰È·¯ˆÚÈÛÙÂ› ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙË-

ÙÂ˜ (aliquots ÙÔ˘ 1mL) Ê˘Ï¿ÛÛÂÙ·È ÛÙËÓ Î·Ù¿„˘ÍË (–20° C). ¶ÚÈÓ ·fi

ÙËÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛ‹ ÙÔ˘˜ ·Ô„‡¯ÔÓÙ·È Î·È ·ÔÎÙÔ‡Ó ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆ-

Ì·Ù›Ô˘.

– 10% oÚfi AB ·fi ¤Ì‚Ú˘· ÌÔÛ¯·ÚÈÒÓ (FCS) [GIBCO Europe, Basel

Switzerland], Ô ÔÔ›Ô˜ ·ÊÔ‡ ‰È·¯ˆÚÈÛÙÂ› ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ (aliquots

ÙÔ˘ 1mL) Ê˘Ï¿ÛÛÂÙ·È ÛÙËÓ Î·Ù¿„˘ÍË (–20° C).

ŸÏÔÈ ÔÈ ÔÚÔ› ÚÈÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈËıÔ‡Ó ıÂÚÌ·›ÓÔÓÙ·È (heat inactivated)

ÛÂ ˘‰·ÙfiÏÔ˘ÙÚÔ ÛÙÔ˘˜ 56° C ÁÈ· 30 ÏÂÙ¿ ÒÛÙÂ Ó· ·‰Ú·ÓÔÔÈËıÔ‡Ó, ‰ËÏ·-

‰‹ Ó· Î·Ù·ÛÙÚ·ÊÂ› ÙÔ Û‡ÛÙËÌ· ÙÔ˘ Û˘ÌÏËÚÒÌ·ÙÔ˜ Î·È Ó· ÌËÓ ¤¯Ô˘Ó ÌÈÙÔ-

ÁÔÓÈÎ‹ ‰Ú¿ÛË (nonmitogenic).

93

ªÈÙÔÁfiÓ·

– º˘ÙÔ·ÈÌÔÛ˘ÁÎÔÏÏËÙ›ÓË (Phytohemagglutinin, PHA) [SIGMA DIAG-

NOSTICS, Saint Louis, Missouri, USA]

§ÂÎÙ›ÓË Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÂÙ·È ·fi ÙÔ Ê˘Ùfi Phaseolus vulgaris. ∞fi ÙËÓ Ï˘ÔÊÈ-

ÏËÌ¤ÓË ÌÔÚÊ‹ ÌÂ ·Ó·Û‡ÛÙ·ÛË ÌÂ PBS ÚÔÎ‡ÙÂÈ ‰È¿Ï˘Ì· Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆ-

ÛË˜ 5mg/mL (stock ‰È¿Ï˘Ì·) Ô˘ ¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ (ali-

quots) Î·È Ê˘Ï¿ÛÛÂÙ·È ÙÔ˘˜ –20° C.

– ∫ÔÓÎ·Ó·‚·Ï›ÓË ∞ (Concanavalin A, Con A) [SIGMA DIAGNOSTICS,

Saint Louis, Missouri, USA]

§ÂÎÙ›ÓË Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÂÙ·È ·fi ÙÔ Ê˘Ùfi Canavalia ensiformis. °›ÓÂÙ·È ·Ó·-

Û‡ÛÙ·ÛË ÌÂ PBS Î·È ÙÔ ‰È¿Ï˘Ì· Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜ 5mg/mL (stock ‰È¿Ï˘-

Ì·) Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÂÈ ¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ (aliquots) Î·È Ê˘-

Ï¿ÛÛÂÙ·È ÙÔ˘˜ –20° C.

– ªÈÙÔÁfiÓÔ Pokeweed (PWM) [SIGMA DIAGNOSTICS, Saint Louis,

Missouri, USA]

¶ÚÔ¤Ú¯ÂÙ·È ·fi ÙÔ Ê˘Ùfi Phytolacca americana. °›ÓÂÙ·È ·Ó·Û‡ÛÙ·ÛË

ÌÂ PBS Î·È ÙÔ ‰È¿Ï˘Ì· Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜ 5mg/mL (stock ‰È¿Ï˘Ì·) Ô˘ ÚÔ-

Î‡ÙÂÈ ¯ˆÚ›˙ÂÙ·È ÛÂ ÌÈÎÚ¤˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜ (aliquots) Î·È Ê˘Ï¿ÛÛÂÙ·È ÙÔ˘˜

–20° C.

4. ∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜

∏ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·fi Ù· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ Î·È Ù· ·È‰È¿

Ô˘ ¤·Û¯·Ó ·fi ¡Â·ÓÈÎ‹ π‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞) ÂÚÈÏ¿Ì‚·ÓÂ Ù·

ÂÍ‹˜ ÛÙ¿‰È·:

∞ÔÌfiÓˆÛË ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜

O ·Ô¯ˆÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·fi Ù· ÂÚ˘ıÚÔÎ‡ÙÙ·Ú· Î·È Ë

·ÔÌfiÓˆÛË ÌÔÓÔ˘Ú‹ÓˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ (Peripheral blood lym-

phocytes mononuclear cells, PBLMCs) ÌÂÁ¿ÏË˜ Î·ı·ÚfiÙËÙ·˜ ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂ-

Ù·È ÌÂ ‰È·¯ˆÚÈÛÙÈÎ‹ Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ‰È·‚¿ıÌÈÛË˜ ˘ÎÓfiÙËÙ·˜ (gradient

centrifugation) fiÔ˘ ÙÔ ‰Â›ÁÌ· ·›Ì·ÙÔ˜ ÙÔÔıÂÙÂ›Ù·È ÛÂ ‰È¿Ï˘Ì· ‰È·‚¿ıÌÈ-

ÛË˜ ˘ÎÓfiÙËÙ·˜ ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Û¯ËÌ·Ù›˙Ô˘Ó ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎ¿ ÛÙÚÒÌ·Ù·

(˙ÒÓÂ˜) ÏfiÁˆ ÙË˜ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎ‹˜ ÙÔ˘˜ ˘ÎÓfiÙËÙ·˜ (∂ÈÎ. 23).171,172

94

¢È·‰ÈÎ·Û›·:

1. ™Â ÎˆÓÈÎfi ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË˜

ÙˆÓ 25mL ÚÔÛı‹ÎË 5mL HISTO-

PAQUE-1077 (‰È¿Ï˘Ì· ÊÈÎfiÏË˜) Ô˘

‚Ú›ÛÎÂÙ·È ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘

(RT)

2. ¶ÚÔÛÂÎÙÈÎ‹ ÂÈÛÙÔ›‚·ÛË 5mL ·-

Ú·ÈˆÌ¤ÓÔ˘ 1:1 ÌÂ HBSS Ë·ÚÈÓÈÛÌ¤ÓÔ˘

ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ¿Óˆ ·fi ÙÔ

ÛÙÚÒÌ· ÙË˜ ÊÈÎfiÏË˜

3. º˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 400 x g ÁÈ· 30 ÏÂÙ¿

ÛÂ „˘ÎÙÈÎ‹ Ê˘ÁfiÎÂÓÙÚÔ (4° C) ÒÛÙÂ Ó·

‰È·¯ˆÚÈÛıÔ‡Ó Ù· ÌÔÓÔ‡ÚËÓ· ÏÂ˘ÎÔ-

Î‡ÙÙ·Ú· (Î˘Ú›ˆ˜ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Î·È ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·) Ô˘ Û¯ËÌ·Ù›˙Ô˘Ó

¤Ó· ÓÂÊÂÏÒ‰Â˜ ÛÙÚÒÌ· ¿¯Ô˘˜ 2-3mm ·ÎÚÈ‚Ò˜ ¿Óˆ ·fi ÙÔ ÛÙÚÒÌ·

ÙË˜ ÊÈÎfiÏË˜ ÂÓÒ Ù· ÔÏ˘ÌÔÚÊÔ‡ÚËÓ· ÏÂ˘ÎÔÎ‡ÙÙ·Ú· Î·Ù·ÎÚËÌÓ›˙Ô-

ÓÙ·È Î¿Ùˆ ·fi ÙË ÊÈÎfiÏË Ì·˙› ÌÂ Ù· ÂÚ˘ıÚ¿. ∞ÎÚÈ‚Ò˜ Î¿Ùˆ ·fi ÙÔ Ï¿-

95

∂ÈÎfiÓ· 23. ∞ÔÌfiÓˆÛË ÌÔÓÔ‡ÚËÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂÙ¿ ·fi‰È·¯ˆÚÈÛÙÈÎ‹ Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ‰È·‚¿ıÌÈÛË˜ ˘ÎÓfiÙËÙ·˜ ÛÂ ÊÈÎfiÏË.

∂Ú˘ıÚÔÎ‡ÙÙ·Ú·

√˘‰ÂÙÂÚfiÊÈÏ·

§ÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

ªÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·∏ˆÛÈÓfiÊÈÏ·

1.077

¶˘ÎÓfiÙËÙ· (g/mL)·

∫·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È

ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ ˘ÎÓfiÙËÙ·

¢È·¯ˆÚÈÛÙÈÎ‹ Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË

‰È·‚¿ıÌÈÛË ˘ÎÓfiÙËÙ·

‚

ªÔÓÔ‡ÚËÓ· Î‡ÙÙ·Ú· (Ú>1.07)

™˘ÛˆÌ. ∂Ú˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (Ú>1.08)√˘‰ÂÙÂÚfiÊÈÏ· (Ú>1.08)

¶Ï¿ÛÌ· (Ú=1.00)

ºÈÎfiÏË (Ú=1.077)

∂Ú˘ıÚÔÎ‡ÙÙ·Ú·

ªÔÓÔ‡ÚËÓ· Î‡ÙÙ·Ú·

√˘‰ÂÙÂÚfiÊÈÏ·

ºÈÎfiÏË

¶Ï¿ÛÌ·

º˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË

400g ÁÈ· 30min

μ·ÛÂfiÊÈÏ·

1.060 1.070 1.080 1.090 1.100 1.110

¶Ï¿ÛÌ·

§ÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·Î·È ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·

∂Ú˘ıÚÔÎ‡ÙÙ·Ú·Î·È Ô˘‰ÂÙÂÚfiÊÈÏ·

¢È¿Ï˘Ì·‰È·‚¿ıÌÈÛË˘ÎÓfiÙËÙ·

ÛÌ· ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È Ù· ·ÈÌÔÂÙ¿ÏÈ· Î·È ÙÔ ÛÙÚÒÌ· ÙË˜ ÊÈÎfiÏË˜ ÌÔÚÂ› Ó·

ÂÚÈ¤¯ÂÈ ÎÔÎÎÈÔÎ‡ÙÙ·Ú·

4. ¶ÚÔÛÂÎÙÈÎ‹ ·ÔÌ¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂ›ÌÂÓÔ˘ Ï¿ÛÌ·ÙÔ˜ Î·È Û˘ÏÏÔÁ‹

ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ· È¤Ù·˜ Pasteur ÙË˜ ÛÙÈ‚¿‰·˜ ÙˆÓ ÌÔÓÔ˘Ú‹ÓˆÓ (ÏÂ˘Î‹

˙ÒÓË) ÛÂ ÎˆÓÈÎfi ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ ÙˆÓ 15mL

5. ¶ÚÔÛı‹ÎË 10mL ‰È·Ï‡Ì·ÙÔ˜ HBSS ÛÙÔ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ Î·È ‹È· ·Ó¿‰Â˘ÛË

6. º˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 250 x g ÁÈ· 10 ÏÂÙ¿

7. ∂·Ó¿ÏË„Ë ÙË˜ ‰È·‰ÈÎ·Û›·˜ Ï‡ÛË˜ (ÛÙ¿‰È· 5 Î·È 6) ÁÈ· ‰‡Ô ·ÎfiÌË

ÊÔÚ¤˜

8. ªÂÙ¿ ÙÔ Ù¤ÏÔ˜ ÙˆÓ Ï‡ÛÂˆÓ ·ÊÔ‡ ·ÔÌ·ÎÚ˘ÓıÂ› ÙÔ ˘ÂÚÎÂ›ÌÂÓÔ ˘ÁÚfi,

ÙÔ ›˙ËÌ· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â·Ó·ÈˆÚÂ›Ù·È ÛÂ Ï‹ÚÂ˜ Î·ÏÏÈÂÚÁËÙÈÎfi ˘ÏÈÎfi

¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ë ÙÂÏÈÎ‹ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË Ó· Â›Ó·È 1×106 Î‡ÙÙ·Ú·/mL Î·ÏÏÈÂÚÁË-

ÙÈÎÔ‡ Ì¤ÛÔ˘

∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ‰ÈÛÎ›· ÌÂÙ¿ ·fi ‰È¤ÁÂÚÛË ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ·

Δ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Ô˘ ·ÔÌÔÓÒıËÎ·Ó

(ÂÓ·ÈÒÚËÌ· Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓË˜ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË˜) Î·ÏÏÈÂÚÁ‹ıËÎ·Ó ÛÂ

‰ÈÛÎ›· 96 ı¤ÛÂˆÓ ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜ ÌÂ ‹ ¯ˆÚ›˜ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘.

¢È·‰ÈÎ·Û›·:

1. ¶ÚÔÛı‹ÎË 200ÌL ·ÈˆÚ‹Ì·ÙÔ˜ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÌÈÎÚÔÈ¤ÙÙ· ÔÏÏ·ÏÒÓ

Î·Ó·ÏÈÒÓ ÛÂ Î¿ıÂ ı¤ÛË

2. ¶ÚÔÛı‹ÎË 20ÌL Ô˘ ÂÚÈ¤¯Ô˘Ó ÙËÓ ÂÈı˘ÌËÙ‹ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘

(PHA, ConA, PWM, ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ Û˘ÁÎÂÓÙÚÒÛÂÈ˜) ‹ 20ÌL Ï‹ÚÔ˘˜ Î·Ï-

ÏÈÂÚÁËÙÈÎÔ‡ Ì¤ÛÔ˘ (¯ÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È ˆ˜ ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘)

3. ΔÔÔı¤ÙËÛË ÙˆÓ ‰ÈÛÎ›ˆÓ ÛÂ ÎÏ›‚·ÓÔ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›·˜ 37° C ÛÂ ÂÚÈ‚¿Ï-

ÏÔÓ 5% CO2

4. 3 ÒÚÂ˜ ÚÈÓ ÙÔ Ù¤ÏÔ˜ ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÛÂ ¤Ó· Ì¤ÚÔ˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ Á›-

ÓÂÙ·È ÚÔÛı‹ÎË ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ (BrdU)

5. ªÂÙ¿ ÙÔ Ù¤ÏÔ˜ ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ (fiÏ· Ù· ‰Â›ÁÌ·Ù· Â›Ó·È ‰ÈÏ¿) Ù· Î‡Ù-

Ù·Ú· ÌÂÙ¿ ·fi Ï‡ÛË (Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 400x g ÛÂ DPBS ÁÈ· 10 ÏÂ-

Ù¿) Û˘ÏÏ¤ÁÔÓÙ·È Î·È Â·Ó·ÈˆÚÔ‡ÓÙ·È ÛÂ HBSS ÁÈ· ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ÂÂÍÂÚ-

Á·Û›· Î·È ·Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜.

ŒÏÂÁ¯Ô˜ ‚ÈˆÛÈÌfiÙËÙ·˜

O ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ‚ÈˆÛÈÌfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Á›ÓÂÙ·È ÌÂ Ì¤ÙÚËÛË

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Ï¿Î· ¡eubauer ÌÂÙ¿ ·fi ¯ÚÒÛË ÌÂ Î˘·Ófi ÙË˜ ÙÚ˘¿ÓË˜

(trypan blue dye). Δ· ˙ˆÓÙ·Ó¿ Î‡ÙÙ·Ú· ‰ÂÓ ÚÔÛÏ·Ì‚¿ÓÔ˘Ó ÙËÓ ¯ÚˆÛÙÈÎ‹

96

ÂÓÒ Ù· ÓÂÎÚ¿ ÙËÓ ÚÔÛÏ·Ì‚¿ÓÔ˘Ó (Ë ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÙÔ˘˜ Â›Ó·È ‰È·ÂÚ·Ù‹ ÁÈ·

ÙÈ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜) Î·È ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È Î·Ù¿ ÙËÓ ·Ú·Ù‹ÚËÛË ÌÂ ÙÔ ÔÙÈÎfi ÌÈÎÚÔ-

ÛÎfiÈÔ ÁÈ·Ù› ÂÌÊ·Ó›˙ÔÓÙ·È Ó· ¤¯Ô˘Ó Á·Ï¿˙ÈÔ Î˘ÙÙ·ÚfiÏ·ÛÌ· (ÌÏ¤ Î‡ÙÙ·-

Ú·).

ŒÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ‚ÈˆÛÈÌfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Á›ÓÂÙ·È Î·È ÌÂ ÙË ¯Ú‹-

ÛË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ ÌÂ ÙË Ì¤ıÔ‰Ô ÙË˜ ·ÓÓÂÍ›ÓË˜ V (∞nnexin V).

ÃÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È ·ÓÙ›ÛˆÌ· ÁÈ· ÙËÓ ·ÓÓÂÍ›ÓË V (ÚˆÙÂ˝ÓË ÌÂÁ¤ıÔ˘˜ 35-36

kDa) ÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ ÊıÔÚÈfi¯ÚˆÌ· FITC ÛÂ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ Ì›· ÓÔ˘ÎÏÂÔÙÈ-

‰ÈÎ‹ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ fiˆ˜ ÙÔ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ (Propidium Iodide)

Ô˘ ·ÚÂÌ‚¿ÏÂÙ·È ÛÙËÓ ¤ÏÈÎ· ÙÔ˘ DNA Î·È ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È Ù· ˙ÒÓÙ· ·fi Ù·

ÓÂÎÚ¿ Î·È ·ÔÙˆÙÈÎ¿ Î‡ÙÙ·Ú· (∂ÈÎ. 24). ∏ ÚˆÙÂ˝ÓË ·ÓÓÂÍ›ÓË V ·ÚÔ˘-

Û›· ÈfiÓÙˆÓ ·Û‚ÂÛÙ›Ô˘ Û˘Ó‰¤ÂÙ·È ÂÎÏÂÎÙÈÎ¿ ÌÂ Ù· ·ÚÓËÙÈÎ¿ ÊÔÚÙÈÛÌ¤Ó· Ìfi-

ÚÈ· ÊˆÛÊÔÏÈÈ‰›ˆÓ fiˆ˜ Ë ÊˆÛÊ·ÙÈ‰˘ÏÔÛÂÚ›ÓË (PS) Ô˘ ÂÓÒ ‚Ú›ÛÎÂÙ·È

ÛÙËÓ ÂÛˆÙÂÚÈÎ‹ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÏfiÁˆ ÙË˜ ‰È·Ù·Ú·-

¯‹˜ ÙË˜ ‰È¿Ù·ÍË˜ ÙˆÓ ÊˆÛÊÔÏÈÈ‰›ˆÓ Ô˘ ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÂÈ Ù· ÚÒÈÌ· ÛÙ¿‰È·

ÙË˜ ·fiÙˆÛË˜ ÂÌÊ·Ó›˙ÂÙ·È ÛÙËÓ ÂÍˆÙÂÚÈÎ‹ ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜. ªÂ

ÙË Ì¤ıÔ‰Ô ÙË˜ ·ÓÓÂÍ›ÓË˜ V Â›Ó·È ÂÊÈÎÙ‹ Ë Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË ÔÛÔÙÈÎÔÔ›ËÛË ÙË˜

Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ‚ÈˆÛÈÌfiÙËÙ·˜ Î·ıÒ˜ Î·È ‰È·ÊfiÚˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ

(Real time flow cytometric assay).173,174

97

∂ÈÎfiÓ· 24. ¢È¿ÎÚÈÛË ÙˆÓ ˙ÒÓÙˆÓ ·fi Ù· ÓÂÎÚ¿ Î·È ·ÔÙˆÙÈÎ¿ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙË Ì¤ıÔ‰Ô ÙË˜ ·ÓÓÂÍ›ÓË˜ V.

102 103 10410110Ô

10Ô

101∞

102

103

104

∞nnexin V

ΣÒÓÙ·

¡ÂÎÚ¿

∞ÔÙˆÙÈÎ¿

PI

5. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

™ÙËÓ ·ÚÔ‡Û· ÌÂÏ¤ÙË ÁÈ· ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿-

ÙˆÓ ÂÊ·ÚÌfiÛÙËÎÂ ÙÚÈÏfi˜ ¿ÌÂÛÔ˜ ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌfi˜.175,176 Δ· ‰Â‰ÔÌ¤Ó·

·Ó·Ï‡ıËÎ·Ó ÌÂ ÙÔ ÂÈ‰ÈÎfi ÏÔÁÈÛÌÈÎfi System II Software Ô˘ ‰È·ı¤ÙÂÈ Ô Î˘Ù-

Ù·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹˜ ÚÔ‹˜ EPICS XL COULTER. ªÂÙÚ‹ıËÎ·Ó ÂÚ›Ô˘ 30000

ÏÂ˘ÎÔÎ‡ÙÙ·Ú·/‰Â›ÁÌ· Î·È ·ÎÔÏÔ˘ı‹ıËÎÂ Ë ·Ú·Î¿Ùˆ ‰È·‰ÈÎ·Û›·:

∂ÈÏÔÁ‹ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ÏËı˘ÛÌÔ‡

O ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi˜ ÏËı˘ÛÌfi˜ ÂÈÏ¤Á¯ıËÎÂ ·Ú¯ÈÎ¿ ‚¿ÛÂÈ ÙˆÓ ·Ú·-

Ì¤ÙÚˆÓ ÚfiÛıÈÔ˘ (FSC) Î·È Ï¿ÁÈÔ˘ (SSC) ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡ ÁÈ· ÙÔÓ ·ÔÎÏÂÈ-

ÛÌfi ÙˆÓ Ô˘‰ÂÙÂÚÔÊ›ÏˆÓ, ÌÔÓÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ, ·ÈÌÔÂÙ·Ï›ˆÓ Î·È Û˘ÛÛˆÌ·ÙˆÌ¿-

ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÒÓ (debris) Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ ¤ÓÙ·ÛË ÙÔ˘ ÌÔÓÔÎÏˆ-

ÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ CD45 PE-Cy5 ÛÂ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ ÙËÓ ·Ú¿ÌÂÙÚÔ SSC

(ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·Ú¿ı˘ÚÔ - lymphocyte gate). H ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ Î·ı·-

ÚfiÙËÙ· ÂÏ¤Á¯ıËÎÂ ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙÔ˘ Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ‡ CD45/CD14.177,178

∂È‰ÈÎfiÙÂÚ· Ë ‰È·‰ÈÎ·Û›· ¤¯ÂÈ ˆ˜ ÂÍ‹˜:

ΔÔÔıÂÙÂ›Ù·È ÁÈ· ·Ó¿Ï˘ÛË ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ Ô˘

ÂÚÈ¤¯ÂÈ ÙÔÓ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi CD45/CD14 Î·È ÂÈÏ¤ÁÂÙ·È Ô ÏËı˘ÛÌfi˜ Ô˘ ı¤-

ÏÔ˘ÌÂ Ó· ÌÂÏÂÙ‹ÛÔ˘ÌÂ (ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·Ú¿ı˘ÚÔ-lymphocyte gate) ¯ÚË-

ÛÈÌÔÔÈÒÓÙ·˜ ÙËÓ Û˘Û¯¤ÙÈÛË ÚfiÛıÈÔ˘ Î·È Ï¿ÁÈÔ˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡. ™ÙË Û˘Ó¤-

¯ÂÈ· ÌÂ ÙËÓ ÌÂÏ¤ÙË ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ CD45 Î·È CD14 Î·È ÙÔ˘ Û˘Ó-

‰˘·ÛÌÔ‡ CD45/SSC ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È Ë Î·ı·ÚfiÙËÙ· ÙÔ˘ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ·Ú·-

ı‡ÚÔ˘ Î·È Î·ıÔÚ›˙ÂÙ·È Ë ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ¿ ÙÔ˘ ÛÂ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·. Δ· ÏÂÌÊÔ-

Î‡ÙÙ·Ú· Â›Ó·È CD45+bright CD14-negative Î·È ¤¯Ô˘Ó ¯·ÌËÏfi SSC. ¢ÂÓ Û˘ÌÂ-

ÚÈÏ·Ì‚¿ÓÔÓÙ·È ÛÙÔ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·Ú¿ı˘ÚÔ Ù· ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú· (CD45+dim

Î·È ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚÔ SSC) Î·È Ù· ‚·ÛÂfiÊÈÏ· (CD45+dim ÌÂ ÌÈÎÚfiÙÂÚÔ SSC).

¢Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘

∂ÎÙfi˜ ·fi Ù· ˘fi ÂÍ¤Ù·ÛË ‰Â›ÁÌ·Ù· Ú¤ÂÈ Ó· ·Ó·Ï˘ıÔ‡Ó Î·È Ù·

‰Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘, ‰ËÏ·‰‹ ÙÔ ·ÚÓËÙÈÎfi Î·È ÙÔ ıÂÙÈÎfi.

∞ÚÓËÙÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘

∂›Ó·È ··Ú·›ÙËÙË Î·Ù¿ ÙË Ì¤ÙÚËÛË, Ë ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛË ÈÛÔÙ˘ÈÎÒÓ

‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÂÏ¤Á¯Ô˘ (isotypical immunoglobulins as isotype control) ˆ˜ ·Ú-

ÓËÙÈÎÔ‡ Ì¿ÚÙ˘Ú· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (negative control) ÁÈ· ÙËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÙË˜ ÌË ÂÈ‰È-

Î‹˜ Û‡Ó‰ÂÛË˜ ÙˆÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ÛÙÔ˘˜ Fc ˘Ô‰Ô¯Â›˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

ø˜ ·ÚÓËÙÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÂÈÏ¤Á¯ıËÎÂ ÙÔ «mouse IgG1FITC/

98

IgG1PE» ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· ÁÈ· ÙÔÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ıÂÙÈÎfiÙËÙ·˜ Î·È

ÙËÓ ÂÍ·›ÚÂÛË ÙÔ˘ ÌË ÂÈ‰ÈÎÔ‡ Û‹Ì·ÙÔ˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡. ΔÔ ÌË ÂÈ‰ÈÎfi Û‹Ì· Ú¤-

ÂÈ Ó· Â›Ó·È ≤ 2% (positive analysis >2% per fluorochrome).

∂›ÛË˜ ·fi Ù· ÈÛÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· ‰ÈÏ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÒÓÙ·˜ ÙÈ˜

·Ú·Ì¤ÙÚÔ˘˜ FL1 (fluorescence channel 1 ÁÈ· FITC) Î·È FL2 (fluorescen-

ce channel 2 ÁÈ· PE) ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÔÓÙ·È Ù· ÔÛÔÛÙ¿ ÙˆÓ ˘ÔÏËı˘ÛÌÒÓ ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ˘˜ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡˜ ‰Â›ÎÙÂ˜.

£ÂÙÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘

Δ· ıÂÙÈÎ¿ ‰Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (positive controls) Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÔ‡-

ÓÙ·È Â›Ó·È ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· Ô˘ ·Ó·ÁÓˆÚ›˙Ô˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÈÎ¤˜ Úˆ-

ÙÂ˝ÓÂ˜ ÔÈ ÔÔ›Â˜ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ÛÂ ÌÂÁ¿ÏÂ˜ ÔÛfiÙËÙÂ˜.

ø˜ ıÂÙÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÙÔ CD45 - ÌÈ· ÊˆÛÊÔÙ˘-

ÚÔÛÈÓÈÎ‹ ÎÈÓ¿ÛË ÙË˜ ÂÈÊ¿ÓÂÈ·˜ ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÓˆÛÙ‹ ˆ˜ ÎÔÈÓfi ÏÂ˘-

ÎÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ, Leucocyte Common Antigen - Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓÔ ÌÂ PE-

Cy5 (CD45 PE-Cy5) ÁÈ·Ù› ·Ó·ÁÓˆÚ›˙ÂÈ ·ÓÙÈÁÔÓÈÎfi Â›ÙÔÔ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Â-

Ù·È ÛÂ ÌÂÁ¿Ï· ÔÛÔÛÙ¿ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·.

¶ÔÈÔÙÈÎfi˜ ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂˆÓ

°È· Ó· Â›Ó·È ·ÍÈfiÈÛÙÂ˜ ÔÈ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ ı·

Ú¤ÂÈ:

– H ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ Î·ı·ÚfiÙËÙ· (lymphocyte purity), ‰ËÏ·‰‹ ÙÔ ÔÛÔ-

ÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙËÓ ÂÈÏÂÁÌ¤ÓË ÂÚÈÔ¯‹/·Ú¿ı˘ÚÔ (gate) ÁÈ· Ù·

ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ó· Â›Ó·È ≥ 90%

– ∏ ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ· ÛÂ ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· (lymphocyte recovery), ‰ËÏ·‰‹ ÙÔ

ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ Ô˘ Â›Ó·È Ì¤Û· ÛÙËÓ ÂÚÈÔ-

¯‹ (gate) Ó· Â›Ó·È ≥ 95%

– ΔÔ ¿ıÚÔÈÛÌ· ÙˆÓ CD3+(Δ-Î‡ÙÙ·Ú·), CD19+(μ-Î‡ÙÙ·Ú·) Î·È CD3-

CD16+CD56+ (¡∫-Î‡ÙÙ·Ú·) Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· Â›Ó·È ›ÛÔ ÌÂ 100% ± 5%

(Ì¤Û· ÛÙÔ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·Ú¿ı˘ÚÔ- lymphocyte gate)

– ΔÔ ¿ıÚÔÈÛÌ· ÙË˜ ÂÎ·ÙÔÛÙÈ·›·˜ ·Ó·ÏÔÁ›·˜ ÙˆÓ CD3+CD4+ Î·È

CD3+CD8+ Ó· Â›Ó·È ›ÛÔ ÌÂ ÙËÓ ÂÎ·ÙÔÛÙÈ·›· ·Ó·ÏÔÁ›· ÙˆÓ CD3+ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ± 5% (Ì¤Û· ÛÙÔ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ·Ú¿ı˘ÚÔ- lymphocyte gate)

– ∏ ÛÙ·ıÂÚ‹ ·fiÎÏÈÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ CD3+ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ·Í‡ ‰È·-

‰Ô¯ÈÎÒÓ ÌÂÙÚ‹ÛÂˆÓ Ó· Â›Ó·È <3% (SD < 3%)

99

100

º˘Á

ÔÎ¤ÓÙÚ

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(PH

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mg/m

l)

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37ÆC

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¶ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÁÈ· Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË

·. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ179,180

1) ΔÔÔı¤ÙËÛË ÛÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· 12 × 75 mm 100ÌL ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ ‹ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡

2) ¶ÚÔÛı‹ÎË 10ÌL ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ (MoAb) ÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ˘ ÌÂ

ÊıÔÚÈfi¯ÚˆÌ· ‹ 10ÌL ÈÛÔÙ˘ÈÎÔ‡ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘ (∏ ·Ó·ÏÔÁ›· ·˘Ù‹

Â›Ó·È Î·Ù¿ÏÏËÏË ÁÈ· Â›Â‰· 3000-10000Î‡ÙÙ·Ú·/ÌL‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜)

3) ∫·Ï‹ ·Ó¿‰Â˘ÛË ÁÈ· 5 sec ÛÂ ·Ó·‰Â˘Ù‹Ú· Vortex ÒÛÙÂ Ó· ‰È·¯ˆÚÈÛÙÔ‡Ó

Ù· Û˘Ó·ıÚÔ›ÛÌ·Ù· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÂÌÔÓˆÌ¤Ó· Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙÔ ‰Â›ÁÌ·

Î·È Ó· ÂÈÙÂ˘¯ıÂ› Î·Ï‡ÙÂÚË Û‡Ó‰ÂÛË ÌÂ ÙÔ MoAb

4) ∂Ò·ÛË ÁÈ· 10 ÏÂÙ¿ ÛÙÔ ÛÎÔÙ¿‰È ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT: 20-

25° C)

5) §‡ÛË ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙË Û˘ÛÎÂ˘‹ multi Q-PREP ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ·

ÙÔ˘ IMMUNOPREP Reagent System (Reagent A=600ÌL, Reagent

B=265ÌL, Reagent C=100ÌL)

6) ∞ÎÔÏÔ˘ıÂ› Ë ÙÔÔı¤ÙËÛË ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÁÈ· ·Ó¿Ï˘ÛË ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

ÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÈÊ·ÓÂ›·˜ ˆ˜ ÔÛÔ-

ÛÙfi (%) ıÂÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÔÛÔÛÙfi (%) ‰ËÏ·‰‹ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿-

˙Ô˘Ó ÙÔ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ‰Â›ÎÙË) Î·È ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔ-

Ô›ËÛË˜ ˆ˜ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ (Mean Fluorescence Intensity, MFI)

OÈ ‰È·‰ÈÎ·Û›Â˜ Ô˘ ·ÎÔÏÔ˘ıÔ‡ÓÙ·È ÁÈ· ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂÙ¿ ·fi Î·Ï-

ÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ Â›Ó·È ·ÎÚÈ‚Ò˜ ›‰ÈÂ˜ ÌÂ ÙÈ˜ ·Ú·¿Óˆ. ™ÙÔ

·Ú¯ÈÎfi ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ ÙÔÔıÂÙÔ‡ÓÙ·È 100ÌL ·fi ÙÔ ÂÓ·ÈÒÚËÌ· Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘

ÚÔÎ‡ÙÂÈ ÌÂÙ¿ ÙÔ ¤Ú·˜ ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ (Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË 1×106 Î‡ÙÙ·-

Ú·/mL).

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤Ú-

ÁÂÈ· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Û¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ (Relative Mean

Fluorescence Intensity, RMFI) Ô˘ ·ÓÙÈÎ·ÙÔÙÚ›˙ÂÈ ÙË ‰È·ÊÔÚ¿ ÌÂÙ·Í‡

‰ÈÂÁÂÚÌ¤ÓˆÓ – ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ Î·È ÌË ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (∂ÈÎ. 26).

101

‚. ¶ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

Δ· Â›Â‰· ÙÔ˘ DNA Î·ıÒ˜ Î·È ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›-

ÛÎÔÓÙ·È ÛÙË Ê¿ÛË Û‡ÓıÂÛË˜ DNA (S-Ê¿ÛË) ÚÔÛ‰ÈÔÚ›ÛıËÎ·Ó ÌÂ ÙË ¯Ú‹-

ÛË ÙË˜ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û·˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ‹˜ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ (Propidium Iodide, PI)

·ÏÏ¿ Î·È ÌÂ ÙË ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ 7-·ÌÈÓÔ-·ÎÙÈÓÔÌ˘Î›ÓË (7-AAD) ÛÂ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ

ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· anti-BrdU FITC.

¶ÔÛÔÙÈÎ‹ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ ÌÂ ¯ÚÒÛË ƒπ

∏ Ì¤ÙÚËÛË ÙÔ˘ ÔÏÈÎÔ‡ DNA Î·È Ô ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ‰È·ÊfiÚˆÓ Ê¿-

ÛÂˆÓ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘, ‚·Û›˙ÂÙ·È ÛÙËÓ ÈÎ·ÓfiÙËÙ· ÙÔ˘ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô˘

ÚÔ›‰ÈÔ˘ Ó· ‰ÂÛÌÂ‡ÂÙ·È ÛÙÔÈ¯ÂÈÔÌÂÙÚÈÎ¿ ÛÙË ‰ÈÏ‹ ¤ÏÈÎ· ÙÔ˘ DNA ¤ÙÛÈ

ÒÛÙÂ ÙÔ DNA Ô˘ ¤¯ÂÈ Û˘Ó‰¤ÛÂÈ ÙÔ ÊıÔÚÈfi¯ÚˆÌ· Î·È ÊıÔÚ›˙ÂÈ Ó· ·ÓÙÈÎ·-

ÙÔÙÚ›˙ÂÈ ÙËÓ ÂÚÈÂÎÙÈÎfiÙËÙ· ÙÔ˘ DNA ÛÙÔÓ ˙ËÙÔ‡ÌÂÓÔ ÏËı˘ÛÌfi.181,182

∏ ‰È·‰ÈÎ·Û›· Û˘Ó‰˘·ÛÌÔ‡ ¯ÚÒÛË˜ ÙÔ˘ DNA ÌÂ ƒπ Î·È ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡

·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ¤¯ÂÈ ˆ˜ ÂÍ‹˜:

1) ΔÔÔı¤ÙËÛË ÛÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· 12 × 75 mm 100ÌL ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ ‹ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ‹ ÂÓ·ÈˆÚ‹Ì·ÙÔ˜ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·.

2) ¶ÚÔÛı‹ÎË 10ÌL ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ ÁÈ· ÙÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ·ÓÙÈ-

102

∂ÈÎfiÓ· 26. ™˘ÁÎÚÈÙÈÎ‹ ·ÂÈÎfiÓËÛË ÙˆÓ ÈÛÙÔÁÚ·ÌÌ¿ÙˆÓ ÂÓfi˜ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ÙÔ˘ CD25 ÚÈÓ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· Î·È ÌÂÙ¿ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓÔ PHA 5Ìg/mL.

31

23

15

7

0.1 1 10 100 1000

G2a-RD1

CD25 LYMPHS

Count

MFI ÙÔ˘ CD25 (IL-2R)

ÚÈÓ ÙË Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·

MFI ÙÔ˘ CD25 (IL-2R)

ÌÂÙ¿ ÙË Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·

103

∂ÈÎfiÓ· 27. ¶ÚˆÙfiÎÔÏÏÔ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË˜ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜.

ÁfiÓÔ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ FITC ‹ 10ÌL ÈÛÔÙ˘ÈÎÔ‡

‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘

3) ∫·Ï‹ ·Ó¿‰Â˘ÛË ÁÈ· 5 sec ÛÂ ·Ó·‰Â˘Ù‹Ú· Vortex


25° C)

5) ¶ÚÔÛı‹ÎË 100ÌL ·fi ÙÔ ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈÔ DNA-Prep LPR ÁÈ· Ï‡ÛË ÙˆÓ

ÂÚ˘ıÚÒÓ Î·È ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ÙÔ˘ ˘Ú‹-

Ó· ÒÛÙÂ Ó· Á›ÓÔ˘Ó ‰È·ÂÚ·Ù¤˜ ÁÈ· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ¯ÚÒÛË ‰ÈfiÙÈ Â›Ó·È ÁÓˆ-

ÛÙfi ˆ˜ ÙÔ ƒπ ‰ÂÓ ‰È·ÂÚÓ¿ ·fi ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË ÙˆÓ ˙ÒÓÙˆÓ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

6) ¶ÚÔÛı‹ÎË 2mL ·fi ÙÔ ·ÓÙÈ‰Ú·ÛÙ‹ÚÈÔ DNA-Prep Stain ÁÈ· ¯ÚÒÛË ÙÔ˘

ÔÏÈÎÔ‡ DNA Î·È ÙË ‰È¿Û·ÛË ÙˆÓ ‰›ÎÏˆÓˆÓ RNA –Ô˘ ÌÔÚÂ› Ó·

˘¿Ú¯Ô˘Ó Î·È Ô˘ ‚¿ÊÔÓÙ·È ÌÂ ƒπ– ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ· ÙË˜ ÚÈ‚ÔÓÔ˘ÎÏÂ¿ÛË˜

(RNAse)

7) ∂Ò·ÛË ÁÈ· 30 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘

8) ∞ÎÔÏÔ˘ıÂ› ÙÔÔı¤ÙËÛË ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÁÈ· ·Ó¿Ï˘ÛË ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚË-

Ù‹ ÚÔ‹˜

∫·Ù¿ ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ Ú¤ÂÈ

Ó· ¤¯Ô˘ÌÂ ˘fi„Ë Ì·˜ fiÙÈ:

• ∏ ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ DNA Ú¤ÂÈ Ó· Á›ÓÂÙ·È ÛÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ fiÔ˘

¤¯ÂÈ Á›ÓÂÈ ÔÏ‡ Î·Ï‹ Â˘ı˘ÁÚ¿ÌÌÈÛË ÙË˜ ‰¤ÛÌË˜ LASER ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ

HPCV <2% (Î˘Ú›ˆ˜ ÁÈ· ÙÔÓ ÎfiÎÎÈÓÔ ÊıÔÚÈÛÌfi).

• ªÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ· ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ·Ó·ÊÔÚ¿˜ (·ÓıÚÒÈÓ· Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ ÏÂÌÊÔ-

Î‡ÙÙ·Ú· ‹ ÂÚ˘ıÚÔÎ‡ÙÙ·Ú· fiÚÓÈı·˜) ÙÔÔıÂÙÂ›Ù·È Ë ÎÔÚ˘Ê‹ ÙË˜

G0/G1–Ê¿ÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÛÙÔ ¤Ó· ¤ÌÙÔ ÙÔ˘ ·ÚÈıÌÔ‡ ÙˆÓ

Û˘ÓÔÏÈÎÒÓ Î·Ó·Ï›ˆÓ (ÁÈ· 1024 Î·Ó¿ÏÈ· Ë G0/G1 ÛÙÔ Î·Ó¿ÏÈ 200) ÒÛÙÂ

ÌÂÙ¿ Ó· ÌÔÚÂ› Ó· ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛıÂ› Ë G2/M–Ê¿ÛË.

• ™˘ÛÛˆÌ·ÙÒÌ·Ù· Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÔÚÂ› Ó· ‰ÒÛÔ˘Ó „Â˘‰‹ ·oÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ¯.

‰˘Ô Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙËÓ G0/G1 ¤¯Ô˘Ó ÂÚÈÂ¯fiÌÂÓÔ DNA ›‰ÈÔ ÌÂ ¤Ó· Î‡ÙÙ·ÚÔ

ÛÙËÓ G2/M. °È· ÙÔÓ ÏfiÁÔ ·˘ÙfiÓ ÌÂÙÚ¿ÌÂ Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓ· Î·È ÙÔÓ ¯ÚfiÓÔ Ô˘

··ÈÙÂ›Ù·È ÁÈ· Ó· ÂÚ¿ÛÂÈ ¤Ó· Î‡ÙÙ·ÚÔ ·fi ÙË ‰¤ÛÌË LASER (ÌÂÁ·Ï‡-

ÙÂÚÔ˜ Ô ¯ÚfiÓÔ˜ ÁÈ· ‰˘Ô Î‡ÙÙ·Ú· ·fi fiÙÈ ÁÈ· ¤Ó·).

∏ ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ÚˆÙÔÁÂÓÒÓ ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ Á›ÓÂÙ·È ÌÂ ÙÔ

ÂÈ‰ÈÎfi ÏÔÁÈÛÌÈÎfi M-CYCLE (ªulti-Cycle for Windows Software, Phoenix

Flow Systems) Î·È Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ ÔÛÔÛÙfi Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

(%) Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Î¿ıÂ Ê¿ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ (G0/G1, S Î·È

G2/M-Ê¿ÛË) ÂÓÒ ·Ú¿ÏÏËÏ· ÌÔÚÂ› Ó· ˘ÔÏÔÁÈÛÙÂ› Î·È ÙÔ ÂÚÈÂ¯fiÌÂÓÔ

DNA ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÙÔÓ ‰Â›ÎÙË DI (DNA Index).

104

¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ BrdU

O ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜

‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË˜ (bromo-

deoxyuridine, BrdU) Ô˘ ÂÓÛˆ-

Ì·ÙÒıËÎÂ ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ

DNA ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â-

ÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ˘ÁÈÒÓ ·È-

‰ÈÒÓ Î·È ·È‰ÈÒÓ Ô˘ ¤·Û¯·Ó

·fi ¡π∞ (∞ Î·È μ ÔÌ¿‰· ·ÓÙ›-

ÛÙÔÈ¯· ÙÔ˘ ˘ÏÈÎÔ‡ ÙË˜ ·ÚÔ‡-

Û·˜ ÌÂÏ¤ÙË˜) ÌÂÙ¿ ÙË ‰È¤ÁÂÚÛ‹

ÙÔ˘˜ ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›·

ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘, ‰›ÓÂÈ ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ·

ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Ô˘ ÂÈÛ¤Ú¯ÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË

ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ (Ê¿ÛË Û‡ÓıÂÛË˜ DNA). ∞˘Ùfi ÂÈÙ˘Á¯¿ÓÂÙ·È ÌÂ ÙË

‚Ô‹ıÂÈ· ÙÔ˘ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ˘ ÌÂ ÙË ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÈÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹

ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ Î·Ù¿ ÙË˜ BrdU (anti- BrdU

FITC) ÛÂ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ ÌÈ· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÙÔ˘ ÔÏÈÎÔ‡ DNA fiˆ˜ Ë ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ 7-

·ÌÈÓÔ-·ÎÙÈÓÔÌ˘Î›ÓË (7-AAD).183,184

∏ ‰È·‰ÈÎ·Û›· Ô˘ ·ÎÔÏÔ˘ı‹ıËÎÂ Â›Ó·È Ë ÂÍ‹˜:

1) ∂ÓÛˆÌ¿ÙˆÛË ÙË˜ BrdU in vitro ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË ‰È·Ï‡Ì·ÙÔ˜ 1mM BrdU ÛÂ 1x DPBS ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· ÙË˜

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ó· ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Ô‡Ó 10ÌL/mL Î·ÏÏÈÂÚÁËÙÈÎÔ‡

Ì¤ÛÔ˘.

ÃÚËÛÈÌÔÔ›ËÛË Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·fi ÙÔÓ ›‰ÈÔ ÏËı˘ÛÌfi ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ Â›‰Ú·-

ÛË BrdU ˆ˜ ·ÚÓËÙÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (negative staining control)

ii. ¶·Ú·ÌÔÓ‹ ÁÈ· ÙÚÂÈ˜ ÒÚÂ˜ ÛÂ ÎÏ›‚·ÓÔ CO2 ÛÙÔ˘˜ 37° C ÁÈ· Ó· ÂÓÛˆ-

Ì·ÙˆıÂ› Ë ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ Û˘Óı¤ÙÔ˘Ó DNA

2) ÃÚÒÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÂÈÊ·ÓÂÈ·Î¿ ·ÓÙÈÁfiÓ·

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË 50ÌL ·fi ÙÔ ÂÓ·ÈÒÚËÌ· Î˘ÙÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ÂÓÛˆÌ·-

ÙÒÛÂÈ BrdU ÛÂ Î·Ù¿ÏÏËÏ· ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· ÁÈ· ·Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

ÙÚ›· ÚÔ‹˜

ii. ¶ÚÔÛı‹ÎË 10ÌL ·fi ÙÔ ÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ·ÓÙ›-

ÛˆÌ· ÁÈ· ÙÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ Ô˘ ı¤ÏÔ˘ÌÂ Ó· ÚÔÛ‰ÈÔÚ›ÛÔ˘ÌÂ

iii. ∫·Ï‹ ·Ó¿‰Â˘ÛË

iv. ∂Ò·ÛË ÁÈ· 15 ÏÂÙ¿

105

104

103

102

101

10

0 50 0100 0150 200 250

7-∞∞DB

rdU

(F

ITC

)

M

G2

Go

G1

S-Ê¿ÛË

v. ¶Ï‡ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ 1 mL ·fi ÙÔ ‰È¿Ï˘Ì· ¯ÚÒÛË˜ (staining

buffer) Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 200-300 x g ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿

Î·È ·ÔÌ¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂÈÌ¤ÓÔ˘

3) ∂ÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (fix and permeabilize cells) ÌÂ ‰È¿Ï˘Ì· BD

Cytofix/Cytoperm Buffer

i. ∂·Ó·ÈÒÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ ÌÂ 100ÌL BD

Cytofix/Cytoperm Buffer

ii. ∂Ò·ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· 15-30 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘

iii. ¶Ï‡ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ 1 mL ·fi 1x BD Perm/Wash Buffer Î·È ÛÙË

Û˘Ó¤¯ÂÈ· Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 200-300 x g ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ Î·È ·ÔÌ¿-

ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂÈÌ¤ÓÔ˘

4) ∂Ò·ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ BD Cytoperm Plus Buffer

i. ∞Ó·Û‡ÛÙ·ÛË ÙÔ˘ ÂÓ·ÈˆÚ‹Ì·ÙÔ˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ

ÛÂ 100ÌL BD Cytoprem Buffer

ii. ∂Ò·ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· 10 ÏÂÙ¿ ÛÙÔÓ ¿ÁÔ




5) ∂·Ó·ÛÙ·ıÂÚÔÔ›ËÛË (Re-Fixation) ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

i. ∂·Ó·ÈÒÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ ÌÂ 100ÌL BD Cyto-

fix/Cytoprem Buffer

ii. ∂Ò·ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘




6) ∂ÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ D¡¿ÛË (DNase) ÁÈ· ÙËÓ ¤ÎıÂÛË ÙË˜ ÂÓ-

ÛˆÌ·ÙˆÌ¤ÓË˜ BrdU25

i. ∂·Ó·‰È¿Ï˘ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ ÌÂ 100ÌL ‰È¿Ï˘Ì·

D¡¿ÛË˜ (300Ìg/mL ÛÂ DPBS) ¤ÙÛÈ ÒÛÙÂ Ó· ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯Ô‡Ó 30Ìg

D¡¿ÛË˜/ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ

ii. ∂Ò·ÛË ÁÈ· ÌÈ· ÒÚ· ÛÙÔ˘˜ 37° C




7) ÃÚÒÛË ÙË˜ BrdU Î·È ÙˆÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ ÌÂ ÊıÔÚ›˙ÔÓÙ· ÌÔ-

ÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù·

i. ∂·Ó·ÈÒÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ 50ÌL BD Perm/Wash Buffer ÙÔ

106

ÔÔ›Ô ÂÚÈ¤¯ÂÈ ÙÔ ·ÓÙÈ-BrdU FITC ·ÓÙ›ÛˆÌ· Î·È/‹ ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒ-

Ì·Ù· ¤Ó·ÓÙÈ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ

ii. ∂Ò·ÛË ÁÈ· 20 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (20-25° C)


Û˘Ó¤¯ÂÈ· Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 200-300 x g ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ ÁÈ· ·ÔÌ¿-

ÎÚ˘ÓÛË ÙË˜ ÂÚ›ÛÛÂÈ·˜ ÙÔ˘ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ ÌÂ ÙËÓ ·Ô-

Ì¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂÈÌ¤ÓÔ˘

8) ÃÚÒÛË ÙÔ˘ ÔÏÈÎÔ‡ DNA ÁÈ· ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË 20ÌL ·fi ÙÔ ‰È¿Ï˘Ì· ÙË˜ 7-AAD

9) ¶ÚÔÂÙÔÈÌ·Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÁÈ· ·Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË 1mL ·fi ÙÔ staining buffer ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÎÈ

ii. ∞Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔ-

ÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó ÙËÓ ‚ÚˆÌÔ-‰Â-

ÔÍ˘-Ô˘ÚÈ‰›ÓË.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ % ÔÛÔÛÙfi Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆ-

Ì¿ÙˆÛ·Ó ÙË BrdU Î·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜.

Á. ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67

∏ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ÚÔÛ-

‰ÈÔÚ›ÛıËÎÂ ÛÙ· CD3+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÛÂ ÂÈÏÂÁÌ¤ÓË ÂÚÈÔ¯‹ ÁÈ· Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡Ù-

Ù·Ú· ÌÂ ‚¿ÛË ÙÔ CD45, ÌÂÙ¿ ·fi Î·Ù¿ÏÏËÏË ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÁÈ· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚÈ· Û‡Ó‰ÂÛË Î·È ¯ÚÒÛË ÌÂ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· Ki-67 FITC. ∏ ‰È·‰È-

Î·Û›· ÂÚÈÏ·Ì‚¿ÓÂÈ Ù· ÂÍ‹˜ ÛÙ¿‰È·:

– ™‹Ì·ÓÛË ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ

– ªÔÓÈÌÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ ÏËı˘ÛÌÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (fixing cells)

– ¢È·ÂÚ·ÙfiÙËÙ· ÙË˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È Ï‡ÛË ÙˆÓ ÂÚ˘-

ıÚÒÓ

– ∂Ó‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ¯ÚÒÛË ÁÈ· ÙÔ Ki-67

°È· Ù·˘Ùfi¯ÚÔÓË Ù·˘ÙÔÔ›ËÛË ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡ Î·È ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ ·ÓÙÈ-

ÁfiÓÔ˘ ÚÔËÁÂ›Ù·È Ë ¯ÚÒÛË ÁÈ· ÙÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ·

Ë fiÏË ‰È·‰ÈÎ·Û›· ÁÈ· ÙÔ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi.185

∂È‰ÈÎfiÙÂÚ·, Ë ‰È·‰ÈÎ·Û›· ¯ÚÒÛË˜ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÛÂ Û˘Ó‰˘·-

ÛÌfi ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ (fiˆ˜ ÙÔ Ki-67) ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈ-

ÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ÊıÔÚ›˙Ô˘ÛÂ˜ ¯ÚˆÛÙÈÎ¤˜ ¤¯ÂÈ ˆ˜ ÂÍ‹˜:

1) ΔÔÔı¤ÙËÛË˜ ÛÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· 12 × 75 mm 100ÌL ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ ‹ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ‹ ÂÓ·ÈˆÚ‹Ì·ÙÔ˜ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·. °È· Î¿ıÂ ‰Â›ÁÌ· ¯ÚÂÈ¿˙ÔÓÙ·È ‰˘Ô ÛˆÏËÓ¿ÚÈ·:

107

– ¤Ó· Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ Ù· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ÁÈ· ÂÈÊ·ÓÂÈ·Î¿ Î·È

ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·ÓÈÁfiÓ· (assay tube)

– ¤Ó· Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ Ù· ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· ÈÛÔÙ˘ÈÎ¿ ‰Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (con-

trol tube)

2) ¶ÚÔÛı‹ÎË 20ÌL ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ ÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ ÊıÔÚÈfi-

¯ÚˆÌ· ÁÈ· ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ ‹ 20ÌL ÈÛÔÙ˘ÈÎÔ‡ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘



25° C)

5) ¶ÚÔÛı‹ÎË 100ÌL IntraPrep Reagent 1 ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ



25° C)

8) ¶ÚÔÛı‹ÎË 4mL PBS

9) º˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ ÛÙÈ˜ 300 x g ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘

(RT: 20-25° C)

10) ∞ÔÌ¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂÈÌ¤ÓÔ˘ ÌÂ ·Ó·ÚÚfiÊËÛË

11) ¶ÚÔÛı‹ÎË ÛÂ Î¿ıÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ 100ÌL IntraPrep Reagent 2

12) ◊È· ·Ó¿‰Â˘ÛË (without vortexing)

13) ∂Ò·ÛË ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT: 20-25° C)

14) ¶ÚÔÛı‹ÎË 20ÌL ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ ÁÈ· ÙÔ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈÔ ·ÓÙÈ-

ÁfiÓÔ ‹ 20ÌL ÈÛÔÙ˘ÈÎÔ‡ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜

15) ∞Ó¿‰Â˘ÛË ÁÈ· 5 sec ÛÂ ·Ó·‰Â˘Ù‹Ú· Vortex


25° C)

17) ¶ÚÔÛı‹ÎË 4mL PBS

18) º˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ ÛÙÈ˜ 300 x g ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘

(RT: 20-25ÔC)

19) ∞ÔÌ¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂÈÌ¤ÓÔ˘ ÌÂ ·Ó·ÚÚfiÊËÛË

20) ∂·Ó·ÈÒÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ 500ÌL PBS Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ 0.5% ÊÔÚ-

Ì·Ï‰Â˛‰Ë

21) ∞ÎÔÏÔ˘ıÂ› Ë ·Ó¿Ï˘ÛË ÙÔ˘ ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ Î·È Ù·

·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ ÔÛÔÛÙfi (%) ıÂÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÙÔ

Ki-67.

‰. ∂Ó‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

∏ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Â›Ó·È ÌÈ· ·ÍÈfiÈÛÙË Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌÔ‡

ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ·fi ¤Ó·Ó Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·-

108

ÚÈÎfi ÏËı˘ÛÌfi ˆ˜ ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛ‹˜ ÙÔ˘. ∏ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ‚·Û›˙ÂÙ·È

ÛÙËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÌÂÙ¿ ·fi ‰È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ÌÂ ÙË

¯Ú‹ÛË ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ Û˘Ó‰Â‰ÂÌ¤ÓˆÓ ÌÂ ÊıÔÚÈÔ¯ÚÒÌ·Ù·.9,186

™ÙËÓ ·ÚÔ‡Û· ÌÂÏ¤ÙË ÂÈÏ¤¯ıËÎÂ Ë Ì¤ıÔ‰Ô˜ ·˘Ù‹ ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈ-

ÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ·fi ¤Ó·Ó Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ÂÓÂÚÁÔ-

ÔÈËÌ¤ÓÔ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎfi ÏËı˘ÛÌfi ÏfiÁˆ ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ ÏÂÔÓÂÎÙËÌ¿ÙˆÓ ÙË˜

fiˆ˜:

– ∞ÓÈ¯ÓÂ‡ÔÓÙ·È ‰‡Ô ‹ ÂÚÈÛÛfiÙÂÚÂ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÛÙÔ ›‰ÈÔ Î‡ÙÙ·ÚÔ ÛÂ

‰È¿ÛÙËÌ· Ï›ÁˆÓ ˆÚÒÓ

– ∂Ê·ÚÌfi˙ÂÙ·È ÛÂ ÔÏÈÎfi ·›Ì· ¯ˆÚ›˜ ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓÂ˜ ·ÔÌÔÓÒÛÂÈ˜ Î˘ÙÙ·-

ÚÈÎÒÓ ÏËı˘ÛÌÒÓ

– Ã·Ú·ÎÙËÚ›˙ÂÙ·È ·fi ˘„ËÏ‹ Â˘·ÈÛıËÛ›· Î·È ·ÎÚ›‚ÂÈ· ÏfiÁˆ ÙË˜ ¯Ú‹ÛË

ÂÈ‰ÈÎÒÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ

– ∞ÓÙ·Ó·ÎÏ¿ ÌÂ ÈÛÙfiÙËÙ· ÙÈ˜ in vivo Û˘Óı‹ÎÂ˜

∂È‰ÈÎfiÙÂÚ·, ÌÂÙÚ‹ıËÎÂ Ë ·Ú·ÁˆÁ‹ IL-2, IFN-Á Î·È IL-4 ·fi Ù· Δ-

Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ CD69 (CD3+

CD69+ Î‡ÙÙ·Ú·) Ô ÔÔ›Ô˜ ·ÔÙÂÏÂ› ÚÒÈÌÔ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜. H Ù·˘-

Ùfi¯ÚÔÓË Ì¤ÙÚËÛË ÙÔ˘ CD69 ÂÈ‚Â‚·ÈÒÓÂÈ fiÙÈ Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó

ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓË Ô˘ Ì·˜ ÂÓ‰È·Ê¤ÚÂÈ (IL-2, IFN-Á ‹ IL-4) Â›Ó·È ·˘Ù¿ Ô˘

··ÓÙÔ‡Ó ÛÙo ‰ÈÂÁ¤ÚÙË (ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Δ-Î‡ÙÙ·Ú·).187

∏ ‰È·‰ÈÎ·Û›· Ô˘ ·ÎÔÏÔ˘ı‹ıËÎÂ Â›Ó·È Ë ÂÍ‹˜ (∂ÈÎ. 28):

1) ¢È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÙÔ˘ ÂÛÙ¤Ú· ÙË˜ ÊÔÚÌfiÏË˜

(ƒª∞) ˆ˜ ÌË ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ‰ÈÂÁ¤ÚÙË

°È· Î¿ıÂ ‰Â›ÁÌ· ¯ÚÂÈ¿˙ÔÓÙ·È ‰‡Ô ÛˆÏËÓ¿ÚÈ· :

– ¤Ó· Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ Ù· ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎ¿ ·ÓÙÈÛÒÌ·Ù· ÁÈ· ÂÈÊ·ÓÂÈ·Î¿

Î·È ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·ÓÈÁfiÓ· (assay tube)

– ¤Ó· Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ Ù· ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· ÈÛÔÙ˘ÈÎ¿ ‰Â›ÁÌ·Ù· ÂÏ¤Á¯Ô˘

(control tube)

i. ΔÔÔı¤ÙËÛË ÛÂ ÛˆÏËÓ¿ÚÈÔ 12 × 75 mm 150ÌL Ë·ÚÈÓÈÛÌ¤ÓÔ˘ ÂÚÈ-

ÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜

ii. ¶ÚÔÛı‹ÎË 20ÌL ∏BSS Ô˘ ÂÚÈ¤¯Ô˘Ó 1Ìª ÌÔÓÂÓÛ›ÓË, 10Ìg/mL

BFA Î·È 25ng/mL PMA, 1mg/ml ÈÔÓÔÌ˘Î›ÓË (stimulated sample) ‹

20ÌL ∏μSS Ô˘ ‰ÂÓ ÂÚÈ¤¯Ô˘Ó ƒª∞ Î·È ÈÔÓÔÌ˘Î›ÓË (unstimulated

sample)

iii. ∂Ò·ÛË ÁÈ· 4 ÒÚÂ˜ ÛÂ ÎÏ›‚·ÓÔ (5% CO2, 37° C)

2) ÃÚÒÛË ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ

i. ∂Ò·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÌÂ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· CD3 PE-Cy5

109

ÁÈ· 15 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT:20-25° C) ÛÙÔ ÛÎÔÙ¿‰È

3) ªÔÓÈÌÔÔ›ËÛË ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË 100ÌL ·fi ÙÔ Reagent 1 (πntra-Prep kit) Ô˘ ÂÚÈ¤¯ÂÈ

‰È¿Ï˘Ì· ÊÔÚÌ·Ï‰Â˛‰Ë˜ (5% v/v) Î·È ÂÒ·ÛË ÁÈ· 15 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚ-

ÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT:20-25° C) ÛÙÔ ÛÎÔÙ¿‰È

ii. ¶ÚÔÛı‹ÎË 2mL PBS-BSA Î·È Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 400 x g ÁÈ· 10 ÏÂ-

Ù¿

iii. ∞ÔÌ¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂ›ÌÂÓÔ˘ Î·È Â·Ó·ÈÒÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ

100ÌL PBS-BSA

4) §‡ÛË ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ÔÒÓ ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË

ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ (Î·ı›ÛÙ·Ù·È ‰È·ÂÚ·Ù‹ Ë ÌÂÌ‚Ú¿ÓË)

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË 100ÌL ·fi ÙÔ Reagent 2 (πntra-Prep kit) ÁÈ· ÂÂÍÂÚÁ·-

Û›· ÙˆÓ ‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÌÂ Î·Ù¿ÏÏËÏÔ ‰È¿Ï˘Ì· ·ÔÚÚ˘·ÓÙÈÎÔ‡ (saponin

buffer) ÒÛÙÂ Ó· ÂÈÙÂ˘¯ıÂ› Ï‡ÛË ÙˆÓ ÂÚ˘ıÚÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ·‡ÍËÛË

ÙË˜ ‰È·ÂÚ·ÙfiÙËÙ·˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÈÎ‹˜ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÁÈ· ÙËÓ Ú·ÁÌ·ÙÔÔ›ËÛË ÙË˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·˜ Ì¤ÙÚËÛË˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔ-

ÎÈÓÒÓ

ii. ∂Ò·ÛË ÁÈ· 5 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT:20-25° C) ÛÙÔ

ÛÎÔÙ¿‰È

5) EÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ¯ÚÒÛË ÙÔ˘ ÚÒÈÌÔ˘ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69 Î·È ÙˆÓ

Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È

i. ¶ÚÔÛı‹ÎË ÛÂ Î¿ıÂ ‰Â›ÁÌ· 25ÌL CD69 FITC Î·È 25ÌL ·ÓÙÈ-IFN-Á

PE ‹ ·ÓÙÈ-IL-2 PE

ii. ∂Ò·ÛË ÁÈ· 20 ÏÂÙ¿ ÛÂ ıÂÚÌÔÎÚ·Û›· ‰ˆÌ·Ù›Ô˘ (RT:20-25° C) ÛÙÔ

ÛÎÔÙ¿‰È

iii. ¶Ï‡ÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÚÔÛı‹ÎË ÛÙ· ‰Â›ÁÌ·Ù· 2mL PBS-BSA Î·È

Ê˘ÁÔÎ¤ÓÙÚËÛË ÛÙÈ˜ 400 x g ÁÈ· 10 ÏÂÙ¿

iv. ∞ÔÌ¿ÎÚ˘ÓÛË ÙÔ˘ ˘ÂÚÎÂ›ÌÂÓÔ˘ Î·È Â·Ó·ÈÒÚËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ

100ÌL PBS-BSA ÁÈ· ·Ó¿Ï˘ÛË ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜

6) ∞Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜

H Ì¤ÙÚËÛË ÙË˜ ¤ÓÙ·ÛË˜ ÙÔ˘ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ¤¯Ô˘Ó ‰Â-

ÛÌÂ‡ÛÂÈ ÙÔ ÂÈ‰ÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· ÁÈ· IL-2, IFN-Á Î·È IL-4 ¤ÁÈÓÂ ÌÂ ÙË Ì¤ıÔ‰Ô

ÙÔ˘ ÙÚÈÏÔ‡ ¿ÌÂÛÔ˘ ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÛÙÔÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ Coulter

EPIX XL.

∏ ÂÈÏÔÁ‹ ÙÔ˘ ÏËı˘ÛÌÔ‡ ÙˆÓ Δ-ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Á›ÓÂÙ·È ÌÂ ÙÔ

CD3+PE-Cy5 (fluorescence channel 3, FL3) Î·È ÙËÓ ·Ú¿ÌÂÙÚÔ ÙÔ˘ Ï¿ÁÈ-

Ô˘ ÛÎÂ‰·ÛÌÔ‡ (Side scatter, SSC). ŒÙÛÈ ·ÔÎÏÂ›ÔÓÙ·È ·fi ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË Ù·

110

ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú· Î·È Ù· ¡∫-Î‡ÙÙ·Ú·. ™ÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÌÂ ÙË ‚Ô‹ıÂÈ· ÙˆÓ ·Ú·-

Ì¤ÙÚˆÓ FL1 (fluorescence channel 1) ÁÈ· ÙÔ CD69 Î·È FL2 (fluorescence

channel 2) ÁÈ· ÙÈ˜ IL-2, IFN-Á ‹ IL-4 ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÔÓÙ·È ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ

ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ Δ-Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Â˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›-

ÓÂ˜. ∞Ó¿ÏÔÁ· ÌÂ ÙÔ Â›‰Ô˜ ÙË˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓË˜ Ô˘ ÂÎÎÚ›ÓÔ˘Ó Ù· Δ-ÏÂÌÊÔÎ‡Ù-

Ù·Ú· ÌÔÚÔ‡Ó Ó· ¯·Ú·ÎÙËÚÈÛÙÔ‡Ó Ù‡Ô˘ 1 (CD3+CD69+/IL-2+ ‹ IFN-

Á+) ‹ Ù‡Ô˘ 2 (CD3+CD69+/IL-4+).

111

∂ÈÎfiÓ· 28. ™Ù¿‰È· ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÁÈ· ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ÌÂ Î˘Ù-Ù·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜.

¢È¤ÁÂÚÛËÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

∂ÂÍÂÚÁ·Û›· Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÙËÓ·ÔÊ˘Á‹ ÌË ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

ÃÚÒÛË ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ

ªÔÓÈÌÔÔ›ËÛË Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Î·È ·‡ÍËÛËÙË ‰È·ÂÚ·ÙfiÙËÙ· ÙËÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ‹ ÌÂÌ‚Ú¿ÓË

ÃÚÒÛË ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ

∂Ó‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ¯ÚÒÛË‰ÂÈÁÌ¿ÙˆÓ ÂÏ¤Á¯Ô˘

∞Ó¿Ï˘ÛË ÌÂÎ˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹

°È· ÙËÓ ÂÍ·›ÚÂÛË ÙÔ˘ ÌË ÂÈ‰ÈÎÔ‡ Û‹Ì·ÙÔ˜ ·fi ÙËÓ ·Ó¿Ï˘ÛË ¯ÚËÛÈÌÔ-

ÔÈ‹ıËÎÂ ÈÛÔÙ˘ÈÎfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘ (stimulated and unstimulated isotype

control) Î·ıÒ˜ Î·È ‰Â›ÁÌ· ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÂÓÂÚÁÔÔÈËÙ‹ PMA.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ ÙÔ % ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤-

ÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (CD3+CD69+) Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IFN-Á ‹ IL-4.

112

μ π O ™ Δ ∞ Δ π ™ Δ π ∫ ∏ ∞ ¡ ∞ § À ™ ∏

Δ· ‰ËÌÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ÛÙÔÈ¯Â›· Î·ıÒ˜ Î·È Ù· ÂÚÁ·ÛÙËÚÈ·Î¿ Â˘Ú‹Ì·Ù· ÙˆÓ

‰‡Ô ÔÌ¿‰ˆÓ ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ (˘ÁÈ‹ ·È‰È¿-ÔÌ¿‰· ∞ Î·È ·È‰È¿ Ô˘ ¿Û¯Ô˘Ó

·fi ¡π∞-ÔÌ¿‰· μ) Ô˘ ·ÔÙÂÏÔ‡Ó ÙÔ ˘ÏÈÎfi ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ Î·Ù·ÁÚ¿ÊËÎ·Ó

·Ú¯ÈÎ¿ ËÏÂÎÙÚÔÓÈÎ¿ ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÂÓfi˜ ·Î¤ÙÔ˘ Ê‡ÏÏˆÓ ÂÚÁ·Û›·˜ (spread-

sheet/EXCEL Microsoft) ÔfiÙÂ ‰È·ÌÔÚÊÒıËÎÂ ÌÈ· ‚¿ÛË ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ (data

base) ÒÛÙÂ Ó· Â›Ó·È ‰˘Ó·Ù‹ Ë ·Ó¿ÎÏËÛË ÙˆÓ ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ ÁÈ· ¤ÏÂÁ¯Ô ÙË˜

ÂÁÎ˘ÚfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ Î·Ù·ÁÚ·ÊÒÓ. ™ÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· fiÏ· Ù· ‰Â‰ÔÌ¤Ó· ÌÂÙ·Ê¤ÚıË-

Î·Ó ÛÂ ¤Ó· ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎfi ·Î¤ÙÔ ÁÈ· ÙË ‚ÈÔÛÙ·ÙÈÛÙÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘Û‹ ÙÔ˘˜. ÃÚËÛÈ-

ÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÙÔ ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎfi ·Î¤ÙÔ SPSS 11.0 for Windows software (LEAD

Technologies, Inc).

O ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ Î·ÓÔÓÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ Î·Ù·ÓÔÌÒÓ (normal distribution

goodness of fit) ÙˆÓ ÔÛÔÙÈÎÒÓ ÌÂÙ·‚ÏËÙÒÓ (quantitative variables) ¤ÁÈÓÂ

ÌÂ ÙË ‰ÔÎÈÌ·Û›· Kolmogorov-Smirnov. μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ Î·Ì›· ·fi ÙÈ˜ ·Ú·Ì¤-

ÙÚÔ˘˜ Ô˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›ÛıËÎ·Ó ‰ÂÓ ·ÎÔÏÔ˘ıÂ› Î·ÓÔÓÈÎ‹ Î·Ù·ÓÔÌ‹. ø˜ ÂÎ

ÙÔ‡ÙÔ˘ ÂÊ·ÚÌfiÛıËÎÂ Ë ÌË ·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ (non parametric) Kru-

skall-Wallis one way ANOVA ÁÈ· ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙˆÓ ÌÂÙ·‚ÔÏÒÓ ÙˆÓ ·Ú·-

Ì¤ÙÚˆÓ Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· fiÔ˘ ÂÌÊ·Ó›˙ÔÓÙ·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¤˜ ‰È·ÊÔÚ¤˜ ÔÈ

·ÎÚÈ‚Â›˜ ÙÈÌ¤˜ ÙÔ˘ p ˘ÔÏÔÁ›˙ÔÓÙ·Ó ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙË˜ ÌË ·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹˜ ‰Ô-

ÎÈÌ·Û›·˜ Mann-Whitney U test (·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ë ÙË˜ ‰ÔÎÈÌ·Û›·˜ t-Student Ô˘

ÂÊ·ÚÌfi˙ÂÙ·È ÁÈ· ÔÛÔÙÈÎ¤˜ ÌÂÙ·‚ÏËÙ¤˜ Ô˘ ·ÎÔÏÔ˘ıÔ‡Ó Î·ÓÔÓÈÎ‹ Î·Ù·-

ÓÔÌ‹). ΔÔ paired Wilcoxon signed ranks test ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÛÙËÓ ÔÌ¿‰·

ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÌÂ NIA ÁÈ· ÙË Û‡ÁÎÚÈÛË ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ Ô˘ ÚÔ¤Î˘„·Ó ÌÂÙ¿ ÙË

ıÂÚ·Â›· ÌÂ ÙÈ˜ ‚·ÛÈÎ¤˜ ÙÈÌ¤˜. ΔÔ Spearman’s r-test ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ ÁÈ·

Ó· ˘ÔÏÔÁÈÛÙÔ‡Ó ÔÈ Û˘Û¯ÂÙÈÛÌÔ›.

∞fi ÙÈ˜ ·Ú·Ì¤ÙÚÔ˘˜ ÂÚÈÁÚ·ÊÈÎ‹˜ ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎ‹˜ (descriptive stati-

stics) Ô˘ ·ÊÔÚÔ‡Ó ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙË˜ ÎÂÓÙÚÈÎ‹˜ Ù¿ÛË˜ ·ÏÏ¿ Î·È ÙË ÌÂÙ·‚ÏË-

ÙfiÙËÙ· ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (median) Î·È ÙÔ Â‡ÚÔ˜

ÙÈÌÒÓ (range): ÌÈÎÚfiÙÂÚË ÙÈÌ‹ – Ì¤ÁÈÛÙË ÙÈÌ‹ (min – max) ÁÈ· ÙËÓ ·fi‰ÔÛË

ÙˆÓ ·ÔÙÂÏÂÛÌ¿ÙˆÓ.

113

™Ù·ÙÈÛÙÈÎ¿ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¤˜ ıÂˆÚ‹ıËÎ·Ó ÔÈ ‰È·ÊÔÚ¤˜ ÛÙÈ˜ ÔÔ›Â˜ ÙÔ p

‹Ù·Ó < 0,05 (p<0,05) ÂÓÒ ÌÂ NS ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÂÙ·È Ë ÌË ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎ¿ ÛËÌ·ÓÙÈ-

Î‹ ‰È·ÊÔÚ¿.

H ·Ó¿Ï˘ÛË ÙˆÓ ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ Ô˘ ÚÔ¤Î˘„·Ó ·fi ÙËÓ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË

¤ÁÈÓÂ ·fi ÙÔ ÂÈ‰ÈÎfi ÏÔÁÈÛÌÈÎfi Multi-CYCLE AV software (Phoenix Flow

Systems, San Diego, CA, USA).

114

∞ ¶ O Δ ∂ § ∂ ™ ª ∞ Δ ∞

™ÙËÓ ·ÚÔ‡Û· ÌÂÏ¤ÙË ¤ÁÈÓÂ ÚÔÛ¿ıÂÈ· ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfi-

ÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÔÓÙ·˜:

·) ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ CD69, CD71, CD25

Î·È HLA-DR

‚) ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·-

ÛÌÔ‡ (ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÌÂÙ¿

·fi ¯ÚÒÛË ÌÂ ƒπ, ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó

BrdU, ÔÛÔÛÙfi Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·-

Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67)

Á) ÙÈ˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈÂ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ Ô˘ ·Ú¿ÁÔÓÙ·È ·fi Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤-

Ó· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

·Ú¯ÈÎ¿ ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ Ô˘ ¯ÚËÛ›ÌÂ˘ÛÂ ˆ˜ ÔÌ¿‰· Ì·ÚÙ‡-

ÚˆÓ ÁÈ· ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ·ÏÏ¿ Î·È ÁÈ· ÙËÓ Û‡ÁÎÚÈÛË ÙˆÓ Â˘ÚË-

Ì¿ÙˆÓ ÌÂ ÂÎÂ›Ó· ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ

Ô˘ ¤·Û¯·Ó ·fi NIA fiÔ˘ ˘‹Ú¯·Ó ÂÓ‰Â›ÍÂÈ˜ ÁÈ· ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈ-

ÎfiÙËÙ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È Ì’ ·˘Ù‹ ÙË ÛÂÈÚ¿.

115

1. ÀÁÈ‹ ·È‰È¿ – Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ (ÔÌ¿‰· ∞)

·1) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì·

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙÔ˘ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ

ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ (‚·ÛÈÎfi˜ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜)

ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ ÚÈÓ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ % ÔÛÔÛÙfi ıÂÙÈ-

ÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ (ÔÛÔÛÙfi % ‰ËÏ·‰‹ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔÓ Û˘ÁÎÂ-

ÎÚÈÌ¤ÓÔ ÂÈÊ·ÓÂÈ·Îfi ‰Â›ÎÙË) Î·È Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 13. ™Ù· ÛÙÈ-

ÎÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· (·-Î) ÙË˜ ÂÈÎfiÓ·˜ 27 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ÔÈ ‰È¿ÊÔÚÔÈ ˘ÔÏËı˘-

ÛÌÔ› ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

116

¶›Ó·Î·˜ 13. μ·ÛÈÎfi˜ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ (n=25)

¶ÔÛÔÛÙfi ıÂÙÈÎÒÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ∂ÈÊ·ÓÂÈ·Î¿ ·ÓÙÈÁfiÓ·

¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

(Median) (Range: min – max)(CDs)

% %

CD19+ 11,2 6 – 22

CD20+ 10,6 5 – 18

CD2+ 72 65 – 85

CD3+ 64 56 – 80

CD3+CD4+ 38 31 – 49

CD4+CD29+ 21 15 – 36

CD4+CD45RA+ 22 16 – 32

CD3+CD8+ 23 18 – 38

CD8+CD28+ 12,5 7,8 – 16

CD8+CD28- 9,2 4,3 – 11

CD3–CD16+CD56+ 7,4 5,5 – 13

117

∂ÈÎfiÓ· 29

1000

1000

100

10

1.1

1000

100

10

1.1

1000

100

10

1.1

1000

100

10

1.1

1000

100

10

1.1

800

600

400

200

0

FS

.1 1 10 10 1000

SS LOG

.1 1 10 10 1000

CD19-FITC

.1 1 10 10 1000

G1-FITC

.1 1 10 10 1000

CD20-FITC

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

(64 ×

64)

(64 ×

64)

(64 ×

64)

(64 ×

64)

(64 ×

64)

1

3

2

4

D

G

1 2

3 4

1 2

3 4

1 2

3 4

1 2

3 4

F

BFH

G1-R

D1

CD

2-R

D1

CD

2-R

D1

CD

4-R

D1

CD

8-R

D1

· ‚

Á ‰

Â ˙

ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·

CD2+

CD19+

CD3+CD4+

CD3+CD8+

CD2+

CD20+

118

∂ÈÎfiÓ· 29. ÀÔÏËı˘ÛÌÔ› ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ˘ÁÈÔ‡˜ ·È‰ÈÔ‡. (·) ™ÙÈÎÙfiÁÚ·ÌÌ· fiÔ˘ ‰È·ÎÚ›ÓÔÓÙ·È ÔÈ ÙÚÂÈ˜ Î‡ÚÈÔÈ ÏËı˘ÛÌÔ› ÙˆÓ ÏÂ˘ÎÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂ ¯¿Ú·ÍË ÙË˜ ÂÚÈÔ¯‹˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ. (‚) ÈÛÔÙ˘È-Îfi ‰Â›ÁÌ· ÂÏ¤Á¯Ô˘. (Á) CD19+ μ Î‡ÙÙ·Ú·, CD2+ T Î‡ÙÙ·Ú·. (‰) CD20+ μ Î‡ÙÙ·-Ú·, CD2+ T Î‡ÙÙ·Ú·. (Â) CD3+CD4+ ‚ÔËıËÙÈÎ¿ Δ Î‡ÙÙ·Ú·. (˙) CD3+CD8+ Î·-Ù·ÛÙ·ÏÙÈÎ¿/Î˘ÙÙ·ÚÔÙÔÍÈÎ¿ Δ Î‡ÙÙ·Ú·. (Ë) CD4+CD29+ ‹ CD4+CD45RO+ ÌÓË-ÌÔÓÈÎ¿ “memory” Δ Î‡ÙÙ·Ú·. (ı) CD4+CD45RA+ ·Úı¤Ó· “naïve” Δ Î‡ÙÙ·Ú·. (È) CD4+, CD8+ Δ Î‡ÙÙ·Ú·. (Î) CD3–CD16+CD56+¡∫ Î‡ÙÙ·Ú·.

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD4-FITC

CD8-FITC CD3-FITC

CD4-FITC

(64 ×

64)

1

3

2

4

D

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

(64 ×

64)

1

3

2

4

D

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

(64 ×

64)

1

3

2

4

D

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

(64 ×

64)

1

3

2

4

D

CD

29-R

D1

CD

45R

A-R

D1

CD

56-R

D1

CD

4-R

D1

Ë ı

È Î

ªÓËÌÔÓÈÎ¿ CD4+

¶·Úı¤Ó· CD4+

CD4+

CD8+CD3+

¡∫

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÚÈÓ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Ì¤ÛË

¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ (Mean Flurescence Intensity, MFI) Î·È Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È

ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 14. ™ÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 30 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ÔÈ ÏËı˘ÛÌÔ› ÙˆÓ

CD3+CD25+ Î·È CD3+HLA-DR+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

119

¶›Ó·Î·˜ 14. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÛÙ· CD3+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈ-ÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ (n=25)

¢Â›ÎÙÂ˜ ª¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ (·fiÏ˘ÙÔ˜ ·ÚÈıÌfi˜)ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ

(CDs) (Median) (Range: min – max)

CD3+ CD69+ 1,2 0,8 – 1,6

CD3+ CD71+ 1,4 0,6 – 1,8

CD3+ CD25+ 2,2 1,8 – 3,1

CD3+ HLA-DR+ 3,7 2,8 – 4,2

∂ÈÎfiÓ· 30. ∞ÂÈÎfiÓÈÛË ÙˆÓ CD3+CD25+ Î·È CD3+HLA-DR+ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓΔ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ˘ÁÈÔ‡˜ ·È‰ÈÔ‡ ÛÙÔ ‰ÂÍÈfi ¿Óˆ ÙÂÙ·ÚÙËÌfiÚÈÔ ÙÔ˘ÛÙÈÎÙÔÁÚ¿ÌÌ·ÙÔ˜ (·) Î·È (‚) ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·.

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

1

3

2

4D

CD

25

·

CD3+CD25+

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

1

3

2

4D

HLA

-DR

‚

CD3+∏LA-DR+

·2) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ

O ¤ÏÂÁ¯Ô˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈ-

ÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ ÌÂ ÙË Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÂÈÙÂ‡¯ıËÎÂ ÌÂ ÙÔÓ

ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·ÔÌÔ-

ÓÒıËÎ·Ó ·fi ÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ‰ÈÂÁ¤ÚıËÎ·Ó ÌË ÂÈ‰ÈÎ¿

ÌÂ ‰È¿ÊÔÚ· ÌÈÙÔÁfiÓ· (PHA, ConA, PWM) ÛÂ Î·Ù¿ÏÏËÏÂ˜ Û˘ÁÎÂÓÙÚÒÛÂÈ˜

ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜. ™ÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 31 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÂÙ·È Ô ÏËı˘ÛÌfi˜

ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›· ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfi-

ÓÔ˘ ƒ∏∞ (5Ìg/mL).

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71,

CD25 Î·È HLA-DR ÌÂÙ¿ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÚÔ˘Û›·

ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ (5Ìg/mL) Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 15. Δ· ·ÔÙÂÏ¤-

ÛÌ·Ù· ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Û¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔ-

ÚÈÛÌÔ‡ (Relative Mean Flurescence Intensity, RMFI) Ô˘ ·ÓÙÈÎ·ÙÔÙÚ›˙ÂÈ

ÙË ‰È·ÊÔÚ¿ ÌÂÙ·Í‡ ‰ÈÂÁÂÚı¤ÓÙˆÓ ÌÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· Î·È ÌË ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

120

∂ÈÎfiÓ· 31. ™ÙÈÎÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· fiÔ˘ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙ¿ ·fi 72ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›· ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ (5Ìg/mL). (·) ∂ÈÏÔÁ‹ ÙÔ˘ ÏË-ı˘ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ‚¿ÛË ÙÈ˜ ·Ú·Ì¤ÙÚÔ˘˜ FS Î·È SS. (‚) ™˘Ó‰˘·ÛÌfi˜CD45/RT-SC ÁÈ· ÙËÓ ÂÈÏÔÁ‹ “gating” ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD45

(128 ×

128)

SS

LO

G

‚

1000

800

600

400

200

0

FS

.1 1 10 10 1000

SS LOG

(64 ×

64)

·

™ÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 32 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ ÚÒÈÌÔ˘

‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69 ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙËÓ

ÚÔÛı‹ÎË ÙˆÓ ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ PHA (5Ìg/mL) Î·È ConA (5Ìg/mL) Ô˘ ‰ÈÂÁÂ›-

ÚÔ˘Ó Ù· Δ Î‡ÙÙ·Ú· Î·È PWM (10Ìg/mL) Ô˘ ‰ÈÂÁÂ›ÚÔ˘Ó Ù· μ Î·È Δ Î‡ÙÙ·-

Ú·, ÂÓÒ ÛÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 33 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ÔÈ ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÙˆÓ ‰ÂÈ-

ÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25 Î·È HLA-DR ÌÂÙ¿ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË

ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ (5Ìg/mL). ™Ù· ÛÙÈÎÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· ÙË˜ ÂÈÎfiÓ·˜ 34 ·ÂÈÎÔ-

Ó›˙ÔÓÙ·È Ù· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜

CD69, CD71, CD25 Î·È HLA-DR ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÌÂ ƒ∏∞

(5Ìg/mL) ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜.

121

¶›Ó·Î·˜ 15. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÛÙ· CD3+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈ-ÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ (n=25) ÌÂÙ¿ ·fi 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›·ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ (5Ìg/mL).

¢Â›ÎÙÂ˜ ™¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ (·fiÏ˘ÙÔ˜ ·ÚÈıÌfi˜)ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ

(CDs) (Median) (Range: min – max)

CD3+ CD69+ 6,12 5,7 – 6,8

CD3+ CD71+ 4,3 3,6 – 5,4

CD3+ CD25+ 9,7 8,2 – 11,7

CD3+ HLA-DR+ 11,4 10,3 – 13,6

122

∂ÈÎfiÓ· 33. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25 Î·È HLA-DR ÛÙ· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙ¿ ·fi Â›‰Ú·ÛË ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ¯ÚfiÓÔ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜.

120

100

80

60

40

20

00 12 24 48 72

ÃÚfiÓÔ (ÒÚÂ)

% C

D3 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

CD69

CD71

CD25

HLA-DR

∂ÈÎfiÓ· 32. ¢È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ ÚÒÈÌÔ˘ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69 ÛÙ·CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂ ‹ ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ ÛÂ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡˜ ¯ÚfiÓÔ˘˜Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜.

120

100

80

60

40

20

00 12 24 48 72

ÃÚfiÓÔ (ÒÚÂ)

% C

D3 +

CD

69 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

¯ˆÚ›

ÌÈÙÔÁfiÓÔ

PHAConA

PWM

123

EÈÎfiÓ· 34. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25 Î·È HLA-DR ÛÙ· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙ¿ 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÌÂ ƒ∏∞ (5Ìg/mL).

1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

1 2

3 4

D

CD

69

CD3+CD69+1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

1 2

3 4

H

CD

25

CD3+CD25+1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

1 2

3 4

H

HLA

-DR

CD3+HLA-DR+1000

100

10

1.1

.1 1 10 10 1000

CD3-FITC

(64 ×

64)

1 2

3 4

H

CD

71

CD3+CD71+

‚1) ∫·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜

O Î·ıÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ

Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÚ›· ÚÔ‹˜ ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ ·ÓÙÈÎ·ÙÔ-

ÙÚ›˙ÂÈ ÙËÓ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙ· ÌÈÙÔÁfiÓ·

Î·È Î·Ù¿ Û˘Ó¤ÂÈ· ÙËÓ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ¿ ÙÔ˘˜. O ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙË˜ Ê¿ÛË˜

·˘Ù‹˜ ÂÈÙÂ‡¯ıËÎÂ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›-

ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ Ô˘ ·ÔÙÂÏÂ› ÙËÓ Ê¿ÛË Û‡Ó-

ıÂÛË˜ ÙÔ˘ DNA.

ΔÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÚÔÛ‰ÈÔÚ›-

ÛıËÎÂ ·ÊÂÓfi˜ ÌÂ ÙËÓ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙË˜ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û·˜ ¯ÚˆÛÙÈ-

Î‹˜ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ (ƒπ) Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ÔÛÔ-

ÛÙÔ‡ ÙˆÓ CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó ‚ÚˆÌÔ‰ÂÔÍ˘Ô˘ÚÈ‰›ÓË

(BrdU) ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙÔ˘ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÛÒÌ·ÙÔ˜ ·ÓÙÈ-BrdU ÛÂÛËÌ·-

ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ ÙË ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÈÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË (FITC)

ÛÂ Û˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ ÙË ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ 7-·ÌÈÓÔ-·ÎÙÈÓÔÌ˘Î›ÓË (7-∞∞D).

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÌÂÙ¿ ÙË ¯ÚÒÛË ÌÂ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ (ƒπ) Î·È DNA

·Ó¿Ï˘ÛË ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ % ÔÛÔÛÙfi CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó

ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË Î·È Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 16. μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ, ÌÂÙ¿ ·fi 72

ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›· ƒ∏∞ (5Ìg/mL) ÙÔ 29% ÙˆÓ CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 19,3% ¤ˆ˜ 49,1%. ™ÙËÓ

ÂÈÎfiÓ· 35 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È Û¯ËÌ·ÙÈÎ¿ ÔÈ ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜

Î·Ù¿ ÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›· ‹ fi¯È ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ. Δ· ÚˆÙÔ-

ÁÂÓ‹ ‰Â‰ÔÌ¤Ó· Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÔ˘Ó ·fi ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ·Ó·Ï‡Ô-

ÓÙ·È ÂÚ·ÈÙ¤Úˆ ·fi ÂÈ‰ÈÎfi ÏÔÁÈÛÌÈÎfi (MultiCycle AV software) Î·È ·-

ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È ÛÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 36.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÌÂÙ¿ ÙËÓ ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙË˜

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÌÂ BrdU ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ ÔÛÔÛÙfi CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘

‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË Î·È Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 17. ¢È·ÈÛÙÒıËÎÂ

fiÙÈ, ÌÂÙ¿ ·fi 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÌÂ ƒ∏∞ Î·È ÚÔÛı‹ÎË BrdU ÙÈ˜ ÙÂÏÂ˘-

Ù·›Â˜ ÙÚÂÈ˜ ÒÚÂ˜ ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜, ÔÛÔÛÙfi 38,7% ÙˆÓ CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU Î·È ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi

23,4% ¤ˆ˜ 49,3%.

™ÙÔ ÛÙÈÎÙfiÁÚ·ÌÌ· ÙË˜ ÂÈÎfiÓ·˜ 37 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È Ù· CD3+ Δ Î‡ÙÙ·-

Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙÈ˜ G0, S Î·È G2/M Ê¿ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘.

124

125

¶›Ó·Î·˜ 16. CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÂ S-Ê¿ÛË ÌÂÙ¿ 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤Ú-ÁÂÈ·˜ ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ Î·È ÌÂ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÙˆÓ ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ PHA,ConA Î·È PWM ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25)

¢È¿ÚÎÂÈ· % ¶ÔÛÔÛÙfi CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓÎ·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÃˆÚ›˜ ÌÈÙÔÁfiÓÔ* PHA* ConA* PWM*

(ÒÚÂ˜) (5Ìg/mL) (5Ìg/mL) (10 Ìg/mL)

0 1,2 1,1 0,9 0,8

(0 – 1,8) (0 – 2,2) (0 – 1,2) (0 – 1,4)

24 1,6 14 15 12

(0 – 3,8) (9,8 – 35,9) (3,1 – 39 ) (3,98 – 28,5)

48 2 22 19 17

(0 – 5,9) (11,4 – 42,7) (9,48 –35,9) (4,11 – 41)

72 5 29 24 22

(0 – 8,8) (19,3 – 49,1) (15,2 – 47) (10,7 – 38)

96 3 19 17 15

(0 – 3,5) (7,4 – 29,2) (8,1 – 30,2) (7,9 – 23,8)

* ∞Ó·ÁÚ¿ÊÂÙ·È Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (median) ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ % ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔ-

ÓÙ·È ÛÂ S-Ê¿ÛË Î·È ·ÎÔÏÔ˘ıÂ› ÛÂ ·Ú¤ÓıÂÛË ÙÔ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ: ÌÈÎÚfiÙÂÚË – Ì¤ÁÈÛÙË ÙÈÌ‹ (range:

min – max)

∂ÈÎfiÓ· 35. ¢È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÙˆÓ CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ·ÚÔ˘Û›· ‹ fi¯È ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ ÛÂ ‰È·ÊÔÚÂÙÈÎÔ‡˜ ¯ÚfiÓÔ˘˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜.

50

40

30

20

10

0

0 24 48 72 96

ÃÚfiÓÔ (ÒÚÂ)

% C

D3 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

ÛÂ S

-Ê¿

ÛË ¯ˆÚ› ÌÈÙÔÁfiÓÔ

PHA

ConA

PWM

126

∂ÈÎfiÓ· 36. πÛÙÔÁÚ¿ÌÌ·Ù· Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÔ˘Ó ·fi ÙË DNA ·Ó¿Ï˘ÛË ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-ÙÚ›· ÚÔ‹˜ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ¯Ú‹ÛË ÙÔ˘ ÏÔÁÈÛÌÈÎÔ‡ M-Cycle. (·) ÚÈÓ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·(t=0), (‚) ÌÂÙ¿ 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›· ƒ∏∞ (t=72h).

0 1023FL3 Lin

438

D

Counts

0 600

CELL CYCLE

DATA

Mean G1 = CV G1% G1

Mean G2 CV G2 % G2

% S

Mean G1CV G1% G1

G2/G1 % Tot

Ghi Sq.

Mean G2 = CV G2% G2

% S

G2/G1

Ghi Sq.

DNA Content

FL3 Lin DNA Content

256

224

192

160

128

96

64

32

0

140

120

100

80

60

40

20

0

0 64 128 192 256 320 384 448 512

Cell

Num

ber

Cell

Num

ber

Counts

so

11.899.5

=

=

=

=

=

=

=

12.4.5

.0

.4

79.5

153.2

1.928

97.1

13.2

49.2

178.9

13.019.8

31.0

1.843

99.4

.5

==

=

===

=

=

=

=

·

‚

¶›Ó·Î·˜ 17. CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU Î·È ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÂ S-Ê¿ÛËÌÂÙ¿ 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ Î·È ÌÂ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎËÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ PHA ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25)

% ¶ÔÛÔÛÙfi CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU

¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ(Median) Range (min – max)

ÃˆÚ›˜ ÌÈÙÔÁfiÓÔ 1,6 0,4 – 3,4

MÂ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ 38,7 23,4 – 49,3


ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67

∏ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ‰ËÏÒ-

ÓÂÈ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡

(‰ÂÓ ÂÎÊÚ¿˙ÂÙ·È ÛÙ· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Î·Ù¿ÛÙ·ÛË ËÚÂÌ›·˜).

¶ÚÔÛ‰ÈÔÚ›ÛıËÎÂ ÛÙ· CD3+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· 72 ˆÚÒÓ

·ÚÔ˘Û›· ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ (5Ìg/mL) Î·È Î·Ù¿ÏÏËÏË ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÁÈ·

ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Û‡Ó‰ÂÛË Î·È ¯ÚÒÛË ÌÂ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· Ki-67 ÛÂ-

ÛËÌ·ÛÌ¤ÓÔ ÌÂ ÙË ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ ÈÛÔıÂÈÔÎ˘·ÓÈÎ‹ ÊÏÔ˘ÔÚÂÛÎÂ˝ÓË

(FITC). Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ % ÔÛÔÛÙfi CD3+ ıÂÙÈÎÒÓ Δ

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÙÔ Ki-67 Î·È Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 18 Î·È ÛÙËÓ ÂÈÎfiÓ·

38.

127

∂ÈÎfiÓ· 37. CD3+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙÈ˜ G0, S Î·È G2/M Ê¿ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ Î˘Ù-Ù·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂÙ¿ ·fi ¯ÚÒÛË ÌÂ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· ·ÓÙÈ-BrdU FITC ÛÂÛ˘Ó‰˘·ÛÌfi ÌÂ ÙË ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ 7-∞∞D.

¢È·ÈÛÙÒıËÎÂ fiÙÈ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ıÂÙÈÎÒÓ CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÙÔ

∫i-67 ·˘Í¿ÓÂÙ·È ‚·ıÌÈ·›· ÌÂ ÙËÓ ·‡ÍËÛË ÙË˜ ‰È¿ÚÎÂÈ·˜ ‰È¤ÁÂÚÛË˜ ÙˆÓ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ ÌÂ ƒ∏∞. ªÂÙ¿ ÙÔ ¤Ú·˜ 72 ˆÚÒÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ‚Ú¤ıËÎÂ ÔÛÔÛÙfi

72,7% ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ıÂÙÈÎÒÓ ÁÈ· ÙÔ ∫i-67 ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi

67,1% ¤ˆ˜ 85,8% .

∂›ÛË˜, ÙÔ % ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ CD3+ ıÂÙÈÎÒÓ ÁÈ· ÙÔ Ki-67 Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

¤¯Ô˘Ó ıÂÙÈÎ‹ Û˘Û¯¤ÙÈÛË ÌÂ ÙÔ % ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓ-

ÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU Î·È ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÂ S-Ê¿ÛË (r=0.86)

128

¶›Ó·Î·˜ 18. CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ıÂÙÈÎ¿ ÁÈ· ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡∫i-67 ¯ˆÚ›˜ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ Î·È ÌÂ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ PHA(5Ìg/mL) ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25)

% ¶ÔÛÔÛÙfi ıÂÙÈÎÒÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

∫·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·ÁÈ· ÙÔ Ki-67

¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ(Median) Range (min – max)

ÃˆÚ›˜ ÌÈÙÔÁfiÓÔ 14,6 1,9 – 16

MÂ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ 72,7 67,1 – 85,8

∂ÈÎfiÓ· 38. CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ Ki-67 (·) ÚÈÓ ÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·(t=0) Î·È (‚) ÌÂÙ¿ 72 ÒÚÂ˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ·ÚÔ˘Û›· ƒ∏∞ (t=72h).

Á) ∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi Î·Ù¿ÏÏËÏË

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË Ó· ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·

Ì¤ÙÚËÛ‹ ÙÔ˘˜

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ·fi ÙËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÙˆÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈ-

ÓÒÓ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ ÔÛÔÛÙ¿ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ

CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Ê¤ÚÔ˘Ó ÙÔÓ ÚÒÈÌÔ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69

Î·È Û˘Ó‰¤Ô˘Ó ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ¿ ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›ÛˆÌ· ÙË˜ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ë˜

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓË˜ (·ÓÙÈ IL-2, ·ÓÙÈ IFN-Á, ·ÓÙÈ IL-4).

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 19. μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ 18,3%

ÙˆÓ CD3+CD69+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2 Î·È 24,2% ·Ú¿ÁÔ˘Ó IFN-Á

(Ù‡Ô˘ Δ1 Î‡ÙÙ·Ú·) ÂÓÒ 1,4% ÙˆÓ CD3+CD69+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-

4 (Ù‡Ô˘ Δ2 Î‡ÙÙ·Ú·). Δ· Â˘Ú‹Ì·Ù· ·˘Ù¿ ‰Â›¯ÓÔ˘Ó fiÙÈ ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿

˘ÂÚÈÛ¯‡ÂÈ Ë Ù‡Ô˘ Δ1 ·ÓÔÛÈ·Î‹ ·¿ÓÙËÛË.

™ÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 39 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+D69+ Δ

Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2 ‹ IFN-Á ‹ IL-4 Î·È ÛÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 40 ·ÂÈÎÔÓ›˙Â-

Ù·È Û¯ËÌ·ÙÈÎ¿ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+D69+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2, IFN-Á ‹ IL-4 ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙË ‰È¿Ú-

ÎÂÈ· ‰È¤ÁÂÚÛË˜ ÌÂ ƒª∞.

129

¶›Ó·Î·˜ 19. EÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+D69+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2 ‹ IFN-Á‹ IL-4, ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25)

¶ÔÛÔÛÙfi CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓEÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·

¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓÎ˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓË

(Median) Range (min – max)% %

IL-2 18,3 13,3 – 22,8

IFN-Á 24,2 16,4 – 32,14

IL-4 1,4 0,8 – 2,6

130

∂ÈÎfiÓ· 40. ¶ÔÛÔÛÙfi CD3+CD69+ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘ÓÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2, IFN-Á Î·È IL-4 ÛÂ ‰È·‰Ô¯ÈÎ¿ ¯ÚÔÓÈÎ¿ ‰È·ÛÙ‹Ì·Ù· ‰È¤ÁÂÚÛË˜ÌÂ ƒª∞.

50

40

30

20

10

02 4 8 12 24

XÚfiÓÔ (ÒÚÂ)

πL-2

πFN-Á

πL-4

%C

D3 +

CD

69 +

Î‡ÙÙ

·Ú·

∂ÈÎfiÓ· 39. ∂ÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Δ Î‡ÙÙ·Ú· (CD3+CD69+) Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·-ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2, IFN-Á Î·È IL-4.

D32.3%

D40.0%

D183.1%

D214.5%

D197.9%

D21.2%

D157.5%

D229.1%

D312.3%

D41.4%

103

100 101 102 103 100 101 102 103

102

101

100

103

102

101

100

IL-2

D30.9%

D40.0%

103

100 101 102 103

102

101

100

IL-4

IFN-Á

CD

3 +

CD

69+

CD

3 +

CD

69+

CD

3 +

CD

69+

2. ∞ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ÓÂ·ÓÈÎ‹ È‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· -¡π∞ (ÔÌ¿‰· μ)

·1) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ Î·È ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜

Î·È ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ·fi ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfi-

ÓˆÓ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA

ÛÂ ÂÓÂÚÁfi Ê¿ÛË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ ÚÈÓ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ·ÓÙÈÚÂ˘Ì·ÙÈÎ‹˜ ·ÁˆÁ‹˜ Î·È

¯ˆÚ›˜ ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È ·Ó·Ï˘ÙÈÎ¿ ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 20

Î·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 21 ·Ó·ÁÚ¿ÊÔÓÙ·È Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ·fi ÙËÓ ÂÚÈÁÚ·ÊÈÎ‹

ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎ‹ ÙÔ˘˜ (‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹, Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ). Δ· ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù·

ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È ·Ó·Ï˘ÙÈÎ¿ ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 22 Î·È Û˘ÓÔÙÈ-

Î¿ ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 23.

O ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿-

˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25 Î·È HLA-DR ¤ÁÈÓÂ

ÌÂÙ¿ ·fi ‰È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÌÂ ÙÔ ÌÈ-

ÙÔÁfiÓÔ ƒ∏∞ (5Ìg/mL)* ÛÂ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· 72 ˆÚÒÓ ÂÓÒ ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi

‰ÂÓ ¯ÚÂÈ¿ÛÙËÎÂ ÁÈ·Ù› fiˆ˜ ‰È·ÈÛÙÒıËÎÂ Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÛÙËÓ ÏÂÈÔÓfi-

ÙËÙ¿ ÙÔ˘˜ ‹Ù·Ó ‹‰Ë ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó·. Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÁÈ· ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· Î·È ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È

ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 24 Î·È ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ÛÙÈ˜ ÂÈÎfiÓÂ˜ 41 Î·È 42.

μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ ÂÚÈÛÛfiÙÂÚÔ ·fi 85% ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi

˘ÁÚfi ‹Ù·Ó Δ Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂ ·˘ÍËÌ¤ÓÔ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó Î˘Ú›ˆ˜ ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ HLA-DR, CD25 Î·È CD69 Î·È

ÛÂ ÌÈÎÚfiÙÂÚÔ ÔÛÔÛÙfi ÙÔÓ ‰Â›ÎÙË CD71 ÂÓÒ Ù· μ Î‡ÙÙ·Ú· ‹Ù·Ó Û¯Â‰fiÓ

131

* ∏ ‰È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÌÂ

¡π∞ ¤ÁÈÓÂ ÌfiÓÔ ÌÂ ÙÔ ÌÈÙÔÁfiÓÔ ƒ∏∞ ÛÂ Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË 5Ìg/mL (‚¤ÏÙÈÛÙË Û˘ÁÎ¤ÓÙÚˆÛË

ÌÂÙ¿ ·fi ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜ Û˘ÁÎÂÓÙÚÒÛÂÈ˜) ‰ÈfiÙÈ ÌÂ ‚¿ÛË ‚È‚ÏÈÔÁÚ·ÊÈ-

Î¤˜ ·Ó·ÊÔÚ¤˜33,34 ·ÏÏ¿ Î·È fiˆ˜ Ê¿ÓËÎÂ ·fi ÙËÓ ·ÚÔ‡Û· ÌÂÏ¤ÙË ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ

˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ, ·ÔÙÂÏÂ› ÙÔÓ Î·Ï‡ÙÂÚÔ ‰ÈÂÁ¤ÚÙË ÙÔ˘ ÏËı˘ÛÌÔ‡ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Ì·˜

ÂÓ‰È·Ê¤ÚÂÈ. ∞˘Ùfi ‚Ô‹ıËÛÂ ÛÙËÓ ÂÍÔÈÎÔÓfiÌËÛË ‰Â›ÁÌ·ÙÔ˜ ·ÊÂÓfi˜ ‰ÈfiÙÈ ÚfiÎÂÈÙ·È ÁÈ·

·È‰È¿ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÁÈ·Ù› Ù· ·È‰È¿ ·˘Ù¿ Â›Ó·È Î·Ù·ÔÓËÌ¤Ó· ·fi Û˘ÓÂ¯Â›˜ ·ÈÌÔÏË„›Â˜

ÁÈ· ÙÈ˜ ÂÍÂÈ‰ÈÎÂ˘Ì¤ÓÂ˜ ÂÍÂÙ¿ÛÂÈ˜ Ô˘ ¯ÚÂÈ¿˙ÔÓÙ·È ÒÛÙÂ Ó· ÂÏ¤Á¯ÂÙ·È Ë ÔÚÂ›· ÙË˜ ÓfiÛÔ˘.

∏ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ ‰È‹ÚÎËÛÂ 72 ÒÚÂ˜ Ô˘ ıÂˆÚÂ›Ù·È Ë ‚¤ÏÙÈ-

ÛÙË ‰È¿ÚÎÂÈ· ÂÒ·ÛË˜ ÁÈ·Ù› ÛÂ ·˘Ù‹ ÙË ¯ÚÔÓÈÎ‹ ‰È¿ÚÎÂÈ· ¤¯Ô˘ÌÂ Ù· ˘„ËÏfiÙÂÚ· Â›Â‰·

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ Î·È ÙÈ˜ ÌÂÁ·Ï‡ÙÂÚÂ˜ ÙÈÌ¤˜ ÁÈ· ÙËÓ S Î·È ÙËÓ G2/M Ê¿ÛË. Δ· ‰Â‰ÔÌ¤Ó· ·˘-

Ù¿ Û˘ÌÊˆÓÔ‡Ó Î·È ÌÂ ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓÂ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ Ô˘ ‚·Û›˙ÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ ÎÏ·ÛÛÈÎ‹ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔ-

ÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô188.

132

¶›Ó

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20

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n=24

)

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˜C

D19

CD

20C

D2

CD

3C

D3+

CD

4+C

D3+

CD

8+C

D4+

CD

29+

CD

4+C

D45

RA

+C

D8+

CD

28+

CD

8+C

D28

-N

K

1Ã

∂13

,611

80,4

75,5

49,7

24,2

3118

148

7,2

2∫

ª17

,815

,572

6851

,418

,842

149

75,

2

3§

•11

10,8

82,2

77,7

58,2

22,3

3917

118

6

4Δ

¢8,

67,

988

,482

,262

,328

,248

1713

117,

6

5£

∑9,

28,

875

,570

48,8

21,4

2919

117

4,4

6∫

¢16

,615

,581

,474

,355

,518

,635

16,6

12,2

5,5

10

7Δ

Ã8,

27,

890

81,6

61,2

24,5

4020

15,2

7,8

8,6

8¶

™13

,211

,778

,470

,847

,717

,428

19,9

10,4

6,2

5,4

9¶

∞23

,218

,875

65,3

44,5

20,2

3311

,712

8,1

9,2

10£

∞14

,812

,682

,378

,557

,319

,937

14,2

10,8

9,2

8,3

11ª

Ã9,

28,

479

7248

,721

,231

,619

,812

,69,

26,

6

12ª

¡18

,416

,580

,276

,649

3028

20,4

13,8

7,6

7,2

13μ

¶21

2064

,261

,444

,519

,328

,818

10,4

8,4

5,5

14æ

Ã8,

77,

286

,678

5538

22,4

2011

,25,

79,

2

15Δ

ª9,

69

8881

,258

,828

,419

,619

,29,

38

7,4

16°

∞11

,810

,278

,869

,638

19,2

17,2

25,5

12,6

1110

,2

17O

°14

,813

,776

,271

,244

,427

,713

3114

,712

5,8

18¶

º13

12,4

79,8

6949

,231

,317

,419

,910

,88,

78,

7

19¶

¡17

,816

,284

72,8

38,4

19,9

1124

,813

,69,

26,

2

20Δ

¢18

,317

,470

64,4

4830

,218

,821

,211

,38,

811

21™

ª14

,212

,869

6044

,524

,812

,517

,710

,76,

67,

2

22∞

Ã16

,613

,570

62,7

39,9

19,4

17,5

22,3

12,7

7,9

6,4

23Δ

∑17

,516

,472

,871

52,2

33,6

1818

,68,

79,

24,

8

24º

ª21

2168

6044

,926

,821

2210

,810

,26,

3

·Ó‡·ÚÎÙ·. ∂›ÛË˜ ˘‹Ú¯Â ·‡ÍËÛË ÛÙËÓ ÂÎ·ÙÔÛÙÈ·›· ·Ó·ÏÔÁ›· ÙˆÓ ÂÓÂÚ-

ÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ ÌÓËÌÔÓÈÎÒÓ CD4+T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Ê¤ÚÔ˘Ó ÙÔÓ Ê·ÈÓfiÙ˘Ô

CD4+CD45RO+ ÂÓÒ Ù· CD4+CD45R∞+ ·Úı¤Ó· (naïve) Δ Î‡ÙÙ·Ú·

ÛÙËÓ Ô˘Û›· ‹Ù·Ó ·fiÓÙ·. ∞ÓÙ›ıÂÙ· ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ÔÈ ‰‡Ô ˘ÔÏËı˘-

ÛÌÔ› ˘‹Ú¯·Ó ÛÂ ›ÛË ·Ó·ÏÔÁ›·.

Δ· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi fiÛÔÓ ·ÊÔÚ¿ ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›-

ËÛË˜ ÛÙ· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Â›¯·Ó Î·Ï‹ Û˘Û¯¤ÙÈÛË ÌÂ ·˘Ù¿ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡

·›Ì·ÙÔ˜ (r = 0.83).

·2) ¶ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ˆ˜ Û¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

(Relative Mean Flurescence Intensity, RMFI) Î·È Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·-

Î· 25 Î·È ÛÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 43. μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·-

Â›·˜, Ù· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜

CD69 Î·È CD71 ‹Ù·Ó ÛÙ· ›‰È· Â›Â‰· fiˆ˜ Î·È ÚÈÓ ÙËÓ ıÂÚ·Â›· ÂÓÒ Ù·

CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ CD25+ Î·È HLA-DR+

‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÂÏ·ÙÙˆÌ¤Ó· ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· (p < 0.01).

133

¶›Ó·Î·˜ 21. μ·ÛÈÎfi˜ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ (n=24) ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·



(Median) Range (min – max)(CDs)

% %

CD19 14,5 8,2 – 23,2

CD20 12,7 7,2 – 21

CD2 78,9 64,2 – 90

CD3 71,1 60 – 82,2

CD3+CD4+ 48,9 38 – 62,3

CD4+CD29+ 28 11 – 48

CD4+CD45RA+ 19,5 11,7 – 31

CD3+CD8+ 23,25 17,4 – 38

CD8+CD28+ 11,25 8,7 – 15,2

CD8+CD28- 8,05 5,5 – 12

CD3–CD16+CD56+ 7,2 4,4 – 11

134

¶›Ó·Î·˜ 22. ™˘ÁÎÂÓÙÚˆÙÈÎfi˜ ›Ó·Î·˜ % ıÂÙÈÎÒÓ ÁÈ· ‰È¿ÊÔÚ· ÂÈÊ·ÓÂÈ·Î¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· ÏÂÌÊÔÎ˘Ù-Ù¿ÚˆÓ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞ (n=24) ÚÈÓ ÙËÓ ıÂÚ·Â›·

∞/· ∞ÛıÂÓÂ›˜ CD19 CD20 CD2 CD3 CD3+ CD4+ CD4+ CD3+CD4+ CD29+ CD45RA+ CD8+

1 Ã∂ 1,14 0,96 92 90 67,2 58 9,2 24,2

2 ∫ª 0,78 0,48 90 96 61,4 52 10,6 17,8

3 §• 0,96 0,54 98 89,3 67 49 9,8 22,3

4 Δ¢ 1,14 0,62 94,5 89 62,3 49,4 10,7 28,3

5 £∑ 0,94 0,70 96,8 96,2 58,8 55 12,4 21,4

6 ∫¢ 1,08 0,52 95 93 61,2 61 15,2 28,6

7 ΔÃ 1,12 0,49 94,9 91,4 57,7 58 9,8 24,5

8 ¶™ 0,92 0,64 97,6 96,2 64,5 49 16,1 27,4

9 ¶∞ 0,80 0,84 93 90,8 57,3 52,8 11,3 20,2

10 £∞ 0,64 0,65 90 89,2 68,7 57,4 9,4 24,9

11 ªÃ 0,97 0,92 95,8 94,4 59 49,6 9,8 21,2

12 μ¶ 1,18 0,72 94,2 89,2 64,5 62,8 16,5 20

13 æÃ 0,67 0,49 92 91,2 67 53 11,3 19,3

14 Δª 0,66 0,92 95,9 93 64,4 63,7 11,7 20,4

15 °∞ 1,18 0,47 93,2 91 59,4 57,4 9,2 28,6

16 O° 1,10 0,80 98 96,2 68,7 49,7 16,4 19,2

17 ¶¡ 0,94 0,74 97,6 93 58,8 52,4 11,2 21,3

18 Δ¢ 0,78 0,65 95 90,8 62 49 9,8 28,4

¶›Ó·Î·˜ 23. μ·ÛÈÎfi˜ ·ÓÔÛÔÊ·ÈÓfiÙ˘Ô˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ (n=18) ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·



(Median) Range (min – max)(CDs)

% %

CD19 0,94 0,64 – 1,18

CD20 0,65 0,47 – 0,92

CD2 95 90 – 98

CD3 91,4 89 – 96,2

CD3+CD4+ 62 57,3 – 68,7

CD4+CD29+ 52,8 49 – 63,7

CD4+CD45RA+ 11,2 9,2 – 16,5

CD3+CD8+ 21,4 17,8 – 28,6

135

¶›Ó·Î·˜ 24. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂ-ÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ (RMFI) Î·È ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ (MFI) ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ ÙË ıÂ-Ú·Â›·

™¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ª¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË¢Â›ÎÙÂ˜ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ ÊıÔÚÈÛÌÔ‡

ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ¶ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ∞ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi(CDs) ÌÂ ƒ∏∞* ¯ˆÚ›˜ ƒ∏∞*

(n=24) (n=18)

CD3+ CD69+ 6,6 5,4

(5,2 – 7,4) (3,7 – 9,1)

CD3+ CD71+ 4,4 6,3

(3,7 – 4,9) (2,8 – 7,3)

CD3+ CD25+ 14,8 9,2

(12,2 – 16) (7,4 – 11,8)

CD3+ HLA-DR+ 18,3 14,6

(16,5 – 26,7) (13,6 – 19,3)

* ∞Ó·ÁÚ¿ÊÂÙ·È Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (median) ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ Î·È ·ÎÔÏÔ˘ıÂ› ÛÂ ·Ú¤ÓıÂÛË ÙÔ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ:

ÌÈÎÚfiÙÂÚË – Ì¤ÁÈÛÙË ÙÈÌ‹ (range: min – max), n= ·ÚÈıÌfi˜ ·ÛıÂÓÒÓ

¶›Ó·Î·˜ 25. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈ-ÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ (n=24) ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·

¢Â›ÎÙÂ˜ ™¯ÂÙÈÎ‹ Ì¤ÛË ¤ÓÙ·ÛË ÊıÔÚÈÛÌÔ‡ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ

(CDs) (Median) Range (min – max)

CD3+ CD69+ 5,8 4,6 – 7,6

CD3+ CD71+ 3,9 3,2 – 4,3

CD3+ CD25+ 11,2 9,1 – 12,3

CD3+ HLA-DR+ 13,4 10,8 – 14,5

136

∂ÈÎfiÓ· 42. ∫·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ·ÛıÂ-ÓÒÓ ÌÂ NIA Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25 Î·ÈHLA-DR ÛÂ ÂÓÂÚÁfi Ê¿ÛË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ Î·È ÚÈÓ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ıÂÚ·Â›·˜. (∏ ÔÚÈ˙fiÓÙÈ·ÁÚ·ÌÌ‹ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÈ ÙË ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹).

25

20

15

10

5

0

MF

I

CD69 CD71 CD25 HLA-DR

∂ÈÎfiÓ· 41. ∫·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ NIA Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25Î·È HLA-DR ÛÂ ÂÓÂÚÁfi Ê¿ÛË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ Î·È ÚÈÓ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ıÂÚ·Â›·˜. (∏ ÔÚÈ˙fi-ÓÙÈ· ÁÚ·ÌÌ‹ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÈ ÙË ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹).

30

25

20

15

10

5

CD69 CD71 CD25 HLA-DR

MF

I

137

∂ÈÎfiÓ· 43. ∫·Ù·ÓÔÌ‹ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ NIA Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ (·) CD69, (‚) CD71,(Á) CD25 Î·È (‰) HLA-DR ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÌÂ ƒ∏∞ (5Ìg/mL) ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜,ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ıÂÚ·Â›·˜. (∏ ÔÚÈ˙fiÓÙÈ· ÁÚ·ÌÌ‹ ÚÔÛ‰ÈÔÚ›˙ÂÈ ÙË ‰È¿ÌÂÛËÙÈÌ‹).

¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

CD69

RM

FI

10

8

6

4

2

0¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

CD71

RM

FI

10

8

6

4

2

0

¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

CD25

RM

FI

20

15

10

45

0¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

HLA-DR

RM

FI

30

25

20

15

10

0

5

· ‚

Á ‰


ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ Î·È ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67, ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·

T· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÁÈ· ÙÔÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ ÙËÓ ¤Ó·Ú-

ÍË ıÂÚ·Â›·˜ Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 26.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙˆÓ ÌÂÙÚ‹ÛÂˆÓ ·fi ÙËÓ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÙËÓ Â-

Ú·ÈÙ¤Úˆ ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ÚˆÙÔÁÂÓÒÓ ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ (Raw Data) ÌÂ ÙÔ ÂÈ‰È-

Îfi ÏÔÁÈÛÌÈÎfi M-Cycle, ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·Ó

·fi ÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· Î·È ÌÂÙ¿ ·fi

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ÁÈ· 72 ˆÚÒÓ ·ÚÔ˘Û›· PHA ÔÛÔÛÙfi 13,5% CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 7,07% ¤ˆ˜ 25,9%. ∂›-

ÛË˜ ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ, ÌÂÙ¿ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË BrdU ÙÈ˜ ÙÂÏÂ˘Ù·›Â˜ ÙÚÂÈ˜ ÒÚÂ˜ ÙË˜

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU

Î·È ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ‹Ù·Ó 19,3% ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 9,9% ¤ˆ˜

22,4%.

°È· ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ÌÂÙ¿

ÙÔ ¤Ú·˜ 72 ˆÚÒÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÚÔ˘Û›· ƒ∏∞ ÙÔ 49% ÙˆÓ

CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‹Ù·Ó ıÂÙÈÎ¿ ÁÈ· ÙÔ ∫i-67 ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 23% ¤ˆ˜

55,6%.

138

¶›Ó·Î·˜ 26. CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÌÂÙ¿ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ PHA (5Ìg/mL) ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜, ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓÙË ıÂÚ·Â›· (n=24)

% ¶ÔÛÔÛÙfi CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ¢Â›ÎÙÂ˜ ÛÂ Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ(Median) Range (min – max)

S - Ê¿ÛË ÌÂ ƒπ 13,5 7,07 – 25,9

S - Ê¿ÛË ÌÂ BrdU 19,3 9,9 – 22,4

Ki-67 49 23 – 55,6


ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ Î·È ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67, 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·

T· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÁÈ· ÙÔÓ Î·ıÔÚÈÛÌfi ÙË˜ Ê¿ÛË˜ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÙˆÓ

ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂ-

Ù¿ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜ ÌÂ ÌË ÛÙÂÚÔÂÈ‰‹ ·ÓÙÈÊÏÂÁÌÔÓÒ‰Ë Î·È

·ÓÔÛÔÙÚÔÔÔÈËÙÈÎ¿ Ê¿ÚÌ·Î· Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 27.

Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙˆÓ ÌÂÙÚ‹ÛÂˆÓ ·fi ÙËÓ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË Î·È ÙËÓ Â-

Ú·ÈÙ¤Úˆ ÂÂÍÂÚÁ·Û›· ÙˆÓ ÚˆÙÔÁÂÓÒÓ ‰Â‰ÔÌ¤ÓˆÓ (Raw Data) ÌÂ ÙÔ M-

Cycle, ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÌÂ PHA ·fi ÙÔ Â-

ÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÌÂÙ¿ 6ÌËÓË ıÂÚ·Â›· ÔÛÔÛÙfi 17,7%

CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 11,2%

¤ˆ˜ 35,8%. ∂›ÛË˜ ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ, ÌÂÙ¿ ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË BrdU ÛÙËÓ Î·ÏÏÈ¤Ú-

ÁÂÈ· ÙÔ ÔÛÔÛÙfi CD3+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU Î·È ‚Ú›ÛÎÔ-

ÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ‹Ù·Ó 25,6% ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 12,8% ¤ˆ˜ 38,2%.

°È· ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ Ki-67 ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ÌÂÙ¿ ÙÔ ¤Ú·˜ 72 ˆÚÒÓ

Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÚÔ˘Û›· ƒ∏∞ 58% ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

‹Ù·Ó ıÂÙÈÎ¿ ÁÈ· ÙÔ ∫i-67 ÌÂ Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ ·fi 25,8% ¤ˆ˜ 77%.

™ÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 44 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ÔÈ ÙÈÌ¤˜ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘

‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÂ Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·fi ÙËÓ

¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜.

139

¶›Ó·Î·˜ 27. CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ Ê¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ÌÂÙ¿ÙËÓ ÚÔÛı‹ÎË ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ PHA (5Ìg/mL) ÁÈ· 72 ÒÚÂ˜, ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞ ÌÂÙ¿ÙË ıÂÚ·Â›· (n=24)

¢Â›ÎÙÂ˜% ¶ÔÛÔÛÙfi CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡¢È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ ∂‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ

(Median) Range (min – max)

S - Ê¿ÛË ÌÂ ƒπ 17,7 11,2 – 35,8

S - Ê¿ÛË ÌÂ BrdU 25,6 12,8 – 38,2

Ki-67 58 25,8 – 77

140

∂ÈÎfiÓ· 44. ªÂÙ·‚ÔÏ‹ ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÂÊ¿ÛË ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ (S-Ê¿ÛË, ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ∫i-67) ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂ-ÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜.

% C

D3 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

% C

D3 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

% C

D3 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

40

50

100

80

60

40

20

0

40

30

20

10

0

30

20

10

0¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

S-Ê¿ÛË (¯ÚÒÛË ÌÂ PI)

S-Ê¿ÛË (ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË BrdU)

Ki-67

Á1) ∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿ÁÔ˘Ó

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·


ÓÒÓ IL-2, IFN-Á Î·È IL-4 ·fi Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+CD69+ Δ Î‡ÙÙ·-

Ú· Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 28.

μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ 10,8% ÙˆÓ CD3+CD69+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2

Î·È 12% ·Ú¿ÁÔ˘Ó IFN-Á (Ù‡Ô˘ Δ1 Î‡ÙÙ·Ú·) ÂÓÒ 1,2% ÙˆÓ

CD3+CD69+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-4 (Ù‡Ô˘ Δ2 Î‡ÙÙ·Ú·). Δ· Â˘Ú‹-

Ì·Ù· ·˘Ù¿ ‰Â›¯ÓÔ˘Ó fiÙÈ, fiˆ˜ Î·È ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿, ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì·

ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ Ô˘ ¿Û¯Ô˘Ó ·fi ¡π∞ ˘ÂÚÈÛ¯‡ÂÈ Ë Ù‡Ô˘ Δ1 ·ÓÔÛÈ·Î‹ ·¿-

ÓÙËÛË.

141

¶›Ó·Î·˜ 28. ∂ÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+CD69+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2 ‹ IFN-Á ‹ IL-4 ÛÂ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA (n=24) ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·




IL-2 10,8 7,2 – 18,2

IFN-Á 12 4,1 – 29

IL-4 1,2 0,16 – 2,2

Á2) ∂ÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ó· ·Ú¿ÁÔ˘Ó

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ ÌÂ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· Ì¤ÙÚËÛ‹ ÙÔ˘˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·


ÓÒÓ IL-2, IFN-Á Î·È IL-4 ·fi Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+CD69+ Δ Î‡ÙÙ·-

Ú· Û˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·È ÛÙÔÓ ›Ó·Î· 29.

μÚ¤ıËÎÂ fiÙÈ 14,7% ÙˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2

Î·È 18,9% ·Ú¿ÁÔ˘Ó IFN-Á (Ù‡Ô˘ Δ1 Î‡ÙÙ·Ú·) ÂÓÒ 1,6% ÙˆÓ

CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-4 (Ù‡Ô˘ Δ2 Î‡ÙÙ·Ú·). Δ· Â˘Ú‹-

Ì·Ù· ·˘Ù¿ ‰Â›¯ÓÔ˘Ó fiÙÈ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞ ·Ú·ÙËÚÂ›Ù·È ÌÈ· ·‡ÍËÛË

ÛÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó Ù‡Ô˘ Δ1

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ (IL-2, IFN-Á) ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·, ÂÓÒ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó Ù‡Ô˘ Δ2 Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ (IL-4) ·Ú·Ì¤ÓÂÈ ›‰ÈÔ.

™ÙËÓ ÂÈÎfiÓ· 45 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È ÔÈ ÌÂÙ·‚ÔÏ¤˜ ÛÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚ-

ÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ÙˆÓ

·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2 ‹ IFN-Á ‹ IL-4 ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂ-

Ú·Â›·.

142

¶›Ó·Î·˜ 29. ∂ÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+CD69+ Δ Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2 ‹ IFN-Á ‹ IL-4 ÛÂ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA (n=24) ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·




IL-2 14,7 8 – 19,4

IFN-Á 18,9 11,5 – 34

IL-4 1,6 0,4 – 2,7

143

∂ÈÎfiÓ· 45. ªÂÙ·‚ÔÏ‹ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ ÙˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡·›Ì·ÙÔ˜ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ NIA Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-2, πFN-Á Î·È IL-4, ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹-ÓÂ˜ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜.

% C

D3 +

CD

69 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

% C

D3 +

CD

69 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

% C

D3 +

CD

69 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

25

20

15

10

5

0¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

πL-2

40

30

20

10

0 ¶ÚÈÓ ªÂÙ¿IFN-Á

3

2.5

2

1.5

1

0.5

0 ¶ÚÈÓ ªÂÙ¿

IL-4

3. ™‡ÁÎÚÈÛË ÙˆÓ Â˘ÚËÌ¿ÙˆÓ ˆ˜ ÚÔ˜ ÙË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ Î·È ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜

Δ· Â˘Ú‹Ì·Ù· Ô˘ ÚÔ¤Î˘„·Ó ·fi ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÁÈ·

ÙË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ·ÛıÂÓÒÓ

ÌÂ NIA ÙfiÛÔ ÚÈÓ fiÛÔ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜ ÛÂ

Û¯¤ÛË ÌÂ ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ (ÔÌ¿‰· Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ) ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ:

·) fiÛÔÓ ·ÊÔÚ¿ ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈ-

ÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜:

– ∏ RMFI ÙˆÓ CD69+ Î·È CD71+CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‹Ù·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈ-

ÌË ÌÂÙ·Í‡ ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ Î·È ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÙfiÛÔ ÚÈÓ fiÛÔ Î·È ÌÂÙ¿

ÙË ıÂÚ·Â›· (p= 0.261 Î·È p= 0.197 ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·)

– H RMFI ÙˆÓ CD25+ Î·È HLA-DR+ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ‚Ú¤ıËÎÂ

ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ·˘ÍËÌ¤ÓË ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ

Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ):

14,8(12,2-16) vs 9,7(8,2-11,7) Î·È 18,3(16,5-26,7) vs 11,4(10,3-13,6)

·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01]

– 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· ÔÈ ‰‡Ô ·˘ÙÔ› Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ› ÏËı˘ÛÌÔ› ÂÏ·Ù-

ÙÒıËÎ·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÛÂ Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ ÙÈ˜ ·Ú¯ÈÎ¤˜ ÙÈÌ¤˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹

(Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 11,2(9,1-12,3) vs 9,7(8,2-11,7) Î·È 13,4(10,8-14,5) vs

11,4(10,3-13,6) ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01] Ô˘ ¤ÁÈÓ·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌÂ˜ ÌÂ ÙÈ˜ ÙÈ-

Ì¤˜ ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ

‚) fiÛÔÓ ·ÊÔÚ¿ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÂ Ê¿ÛË

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡:

– ΔÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË

ÌÂÙ¿ ·fi ¯ÚÒÛË ÌÂ ƒπ ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜

ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 13,5(7,07-

25,9) vs 29(19,3-49,1), p<0.05] Î·È ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂ-

ÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 17,7(11,2-

35,8) vs 29(19,3-49,1), p<0.05]

– ΔÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU

‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿Ú-

Ù˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 19,3(9,9-22,4) vs 38(23,4-49,3),

p<0.05] Î·È ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂ-

Ú·Â›· [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 25,6(12,8-38,2) vs 38(23,4-49,3),

p<0.05]

144

– ΔÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ıÂÙÈÎÒÓ ÁÈ· ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi

·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ

ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈ-

ÌÒÓ): 49(23-55,6) vs 72,7(67,1-85,8), p<0.05] Î·È ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈ-

Î¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈ-

ÌÒÓ): 58(25,8-77) vs 72,7(67,1-85,8), p<0.05]

Á) fiÛÔÓ ·ÊÔÚ¿ ÙËÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·Ú·ÁˆÁ‹ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ·fi Ù· ÂÓÂÚ-

ÁÔÔÈËÌ¤Ó· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú·:

– ΔÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2 Î·È IFN-Á ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ‹Ù·Ó ÛË-

Ì·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ

Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ ˘ÁÈÂ›˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ):

10,8(7,2-18,2) vs 18,3(13,3-22,8) Î·È 12(4,1-29) vs 24,2(16,4-32,14)

·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01] Î·È ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜

ÌÂÙ¿ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 14,7(8-

19,4) vs 18,3(13,3-22,8) Î·È 18,9(11,5-34) vs 24,2(16,4-32,14) ·ÓÙ›-

ÛÙÔÈ¯·, p<0.01]

– ΔÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-4 ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛÙ· ›‰È· Â›Â‰· ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ

NIA ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· Î·È ‹Ù·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌÔ ÌÂ ÙÔ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ-

¯Ô ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ (ÛÙ·ÙÈÛÙÈÎ¿ ÌË ÛËÌ·ÓÙÈÎ‹ ‰È·ÊÔ-

Ú¿, p=0.132)

™˘ÓÔÙÈÎ¿, ·fi ÙË Û‡ÁÎÚÈÛË ÙˆÓ Â˘ÚËÌ¿ÙˆÓ ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ

·È‰ÈÒÓ Î·È ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·fi

ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜ ÚÔÎ‡ÙÂÈ fiÙÈ:

¶ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ÛÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ NIA Â›Ó·È ·˘ÍËÌ¤ÓÔ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ

ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ ÂÓÒ Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·˘ÙÒÓ ÛÙÔ

ÌÈÙÔÁfiÓÔ ƒ∏∞ Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË (fiˆ˜ ‹Ù·Ó ·Ó·ÌÂÓfiÌÂÓÔ Î·È ·fi Ù· ‚È-

‚ÏÈÔÁÚ·ÊÈÎ¿ ‰Â‰ÔÌ¤Ó·). ªÂÙ¿ 6ÌËÓË ·ÓÙÈÚÂ˘Ì·ÙÈÎ‹ ·ÁˆÁ‹ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ

ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â·Ó¤Ú¯ÂÙ·È ÛÂ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ fiÚÈ· ÂÓÒ Ë ‚Ï·-

ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ·Ú¿ ÙÔ ÁÂÁÔÓfi˜ fiÙÈ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ ‚ÂÏÙ›ˆÛË ·Ú·Ì¤-

ÓÂÈ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚË ÛÂ Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜. ΔÔ ›‰ÈÔ ÈÛ¯‡ÂÈ

Î·È ÁÈ· ÙËÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·Ú·ÁˆÁ‹ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ IL-2 Î·È IFN-Á.

™ÙÈ˜ ÂÈÎfiÓÂ˜ 46, 47, 48 Î·È 49 ·ÂÈÎÔÓ›˙ÔÓÙ·È Û¯ËÌ·ÙÈÎ¿ ÔÈ ‰È·ÊÔÚ¤˜

Ô˘ ˘¿Ú¯Ô˘Ó ÌÂÙ·Í‡ ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ Ô˘ ¿Û¯Ô˘Ó ·fi ¡π∞ ÚÈÓ

Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ.

145

146

∂ÈÎfiÓ· 47. ¶ÔÛÔÛÙ¿ % ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË (ÌÂ¯ÚÒÛË ƒπ Î·È Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU) ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25) Î·È ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ÌÂ NIA (n=24) ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·. (∞ÂÈÎÔÓ›˙ÂÙ·È Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ Î·È ÌÂÙÈ˜ Î¿ıÂÙÂ˜ ÁÚ·ÌÌ¤˜ Î·ıÔÚ›˙ÂÙ·È ÙÔ Â‡ÚÔ˜ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ).

p<0.05 p<0.05

60

50

40

30

20

10

0

% C

D3+

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

∞ÛıÂÓÂ› ÌÂ NIA ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›·

∞ÛıÂÓÂ› ÌÂ NIA ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·

ÀÁÈ‹ ·È‰È¿ - Ì¿ÚÙ˘ÚÂ

PI BrdUS-Ê¿ÛË

∂ÈÎfiÓ· 46. ŒÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙÔ ÂÚÈÊÂ-ÚÈÎfi ·›Ì· ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ (n=25) Î·È ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA (n=24) ÚÈÓ Î·ÈÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·. (∞ÂÈÎÔÓ›˙ÂÙ·È Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ Î·È ÌÂ ÙÈ˜ Î¿ıÂÙÂ˜ ÁÚ·ÌÌ¤˜ Î·-ıÔÚ›˙ÂÙ·È ÙÔ Â‡ÚÔ˜ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ).

p<0.01

p<0.01

NSNS

30

25

20

15

10

5

0CD69 CD71 CD25 HLA-DR

CD

3+

T Î

‡ÙÙ

·Ú·

(R

MF

I)



ÀÁÈ‹ ·È‰È¿ - Ì¿ÚÙ˘ÚÂ

147

∂ÈÎfiÓ· 49. ¶ÔÛÔÛÙ¿ % ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·-Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2, IFN-Á Î·È IL-4 ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25) Î·È ÛÙÔ˘˜·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA (n=24) ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·. (∞ÂÈÎÔÓ›˙ÂÙ·È Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹Î·È ÌÂ ÙÈ˜ Î¿ıÂÙÂ˜ ÁÚ·ÌÌ¤˜ Î·ıÔÚ›˙ÂÙ·È ÙÔ Â‡ÚÔ˜ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ).

p<0.01

p<0.01

NS

IL-2 IL-4IFN-Á

40

35

30

25

20

15

10

5

0

%C

D3 +

C69 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·



ÀÁÈ‹ ·È‰È¿

∂ÈÎfiÓ· 48. ¶ÔÛÔÛÙ¿ % ÙˆÓ ıÂÙÈÎÒÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÁÈ· ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ ∫i-67 ÛÙ· ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ (n=25) Î·È ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA(n=24) ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·. (∞ÂÈÎÔÓ›˙ÂÙ·È Ë ‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ Î·È ÌÂ ÙÈ˜ Î¿ıÂ-ÙÂ˜ ÁÚ·ÌÌ¤˜ Î·ıÔÚ›˙ÂÙ·È ÙÔ Â‡ÚÔ˜ ÙˆÓ ÙÈÌÒÓ).

p<0.05

Ki-67

100

80

60

40

30

0

% C

D3 +

T Î

‡ÙÙ

·Ú·



ÀÁÈ‹ ·È‰È¿

™ À ∑ ∏ Δ ∏ ™ ∏

H ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfi-

ÓˆÓ Â›Ó·È ÂÓ‰ÂÈÎÙÈÎ‹ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎ‹˜ ÈÎ·ÓfiÙËÙ¿˜ ÙÔ˘˜ Ó· ÔÏÏ·Ï·ÛÈ¿˙Ô-

ÓÙ·È. ∏ Ì¤ÙÚËÛË ÙË˜ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ ÛÙÔ ÓÂÔÛ˘-

ÓÙÈı¤ÌÂÓÔ DNA ·ÔÙÂÏÂ› ÙËÓ ÎÏ·ÛÛÈÎ‹ ÈÛÔÙÔÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ-

Â›Ù·È ÁÈ· ÙÔÓ ¤ÏÂÁ¯Ô ·˘Ù‹˜ ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜.189 ∏ Û˘Ì‚·ÙÈ-

Î‹ ·˘Ù‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ¤¯ÂÈ ·ÚÎÂÙ¿ ÌÂÈÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù·: Â›Ó·È ¯ÚÔÓÔ‚fiÚ·, Ë ÚÔÙ˘-

ÔÔ›ËÛ‹ ÙË˜ ·ÚÔ˘ÛÈ¿˙ÂÈ ‰˘ÛÎÔÏ›Â˜ Î·È Ë ÂÎÙ¤ÏÂÛ‹ ÙË˜ ÚÔ¸Ôı¤ÙÂÈ Î·-

Ù¿ÏÏËÏË ÂÚÁ·ÛÙËÚÈ·Î‹ ˘Ô‰ÔÌ‹ ÁÈ· ÙË ¯Ú‹ÛË Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙfiˆÓ Î·ıÒ˜ Î·È

Î·Ù¿ÏÏËÏÔ ÂÍÔÏÈÛÌfi ÁÈ· ÙË Ì¤ÙÚËÛË ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ·ÎÙÈÓÔ‚ÔÏ›·˜ Î·È

Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤Ó· Á-Î¿ÌÂÚ·. ∂›ÛË˜, ÌÂÈÔÓ¤ÎÙËÌ· ·ÔÙÂÏÂ› Î·È ÙÔ ÁÂÁÔÓfi˜ fiÙÈ

Ë Ì¤ıÔ‰Ô˜ ‰ÂÓ ·Ú¤¯ÂÈ ÏËÚÔÊÔÚ›Â˜ ÁÈ· Î¿ÔÈÔ Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ ˘ÔÏËı˘-

ÛÌfi ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÏÏ¿ Û˘ÓÔÏÈÎ¿ ÁÈ· fiÏ· Ù· Î‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È

ÛÙËÓ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·.

∏ ·Ó¿ÁÎË ·ÓÙÈÎ·Ù¿ÛÙ·ÛË˜ ÙË˜ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹˜ ·˘Ù‹˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÌÂ

ÌÈ· ÈÔ ÚÔÛÈÙ‹ ÛÂ ¤Ó· ∞ÓÔÛÔÏÔÁÈÎfi ∂ÚÁ·ÛÙ‹ÚÈÔ Ì¤ıÔ‰Ô ‹Ù·Ó ÙÔ ¤Ó·˘ÛÌ·

ÒÛÙÂ ÛÙËÓ ·ÚÔ‡Û· ÌÂÏ¤ÙË Ó· ·Ó·Ù˘¯ıÂ› ÌÈ· Ì¤ıÔ‰Ô˜ Ô˘ ÂÎÙÈÌ¿ ÙË ÏÂÈ-

ÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÙËÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂ-

ÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ –‚·ÛÈÎfi fiÚÁ·ÓÔ ÛÙÔÓ ÂÍÔÏÈÛÌfi ÂÓfi˜ ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎÔ‡ ÂÚÁ·ÛÙË-

Ú›Ô˘– Î·È ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË˜. ªÂ ÙÈ˜ ÙÂ¯ÓÈÎ¤˜ ·˘Ù¤˜ ÂÏ¤Á¯Â-

Ù·È Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· ÌÂ ‚¿ÛË

ÙË ÁÓÒÛË fiÙÈ Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Δ Î‡ÙÙ·Ú· ¯·Ú·ÎÙËÚ›˙ÔÓÙ·È ·fi ÙËÓ ÂÌ-Ê¿ÓÈÛË ÂÈ‰ÈÎÒÓ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ (Ô˘ Ù·˘ÙÔÔÈÔ‡ÓÙ·È ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË

Î·Ù¿ÏÏËÏˆÓ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ), ÔÏÏ·Ï·ÛÈ¿˙ÔÓÙ·È (Ô˘ ÚÔÛ-

‰ÈÔÚ›˙ÂÙ·È ¤ÌÌÂÛ· ÌÂ ÙÔÓ ˘ÔÏÔÁÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙË

Ê¿ÛË S ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘) Î·È ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ (Ô˘ ÂÓÙÔ›-

˙ÔÓÙ·È ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ·ÚÈÎ¿ ÌÂ ·ÓÙÈÎ˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜).

O˘ÛÈ·ÛÙÈÎ¿ ÌÂ ÙË Ì¤ıÔ‰Ô ·˘Ù‹ ¯ÚËÛÈÌÔÔÈÂ›Ù·È ¤Ó· fiÚÁ·ÓÔ Ô˘ ‹‰Ë

˘¿Ú¯ÂÈ ÛÂ ¤Ó· ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎfi ÂÚÁ·ÛÙ‹ÚÈÔ Î·È ÂÈÏ¤ÔÓ ·ÍÈÔÔÈÔ‡ÓÙ·È Ù·

149

ÏÂÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù· Ô˘ ‰È·ı¤ÙÂÈ ˆ˜ ÙÂ¯ÓÈÎ‹ Ë Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ fiˆ˜ Ù·¯‡-

ÙËÙ·, Â·Ó·ÏË„ÈÌfiÙËÙ· Î·È ·ÎÚ›‚ÂÈ· Î·ıÒ˜ Î·È Ë ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ¿ ÙË˜ ÁÈ· Ô-

Ï˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹ ·Ó¿Ï˘ÛË ÒÛÙÂ ÙÂÏÈÎ¿ Ó· ·Ú¤¯ÔÓÙ·È ÛÂ ÈÎ·ÓÔÔÈËÙÈÎfi

¯ÚfiÓÔ ÏËÚÔÊÔÚ›Â˜ ÁÈ· Û˘ÁÎÂÎÚÈÌ¤ÓÔ Î¿ıÂ ÊÔÚ¿ ˘ÔÏËı˘ÛÌfi ÙˆÓ ÏÂÌ-

ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ.

◊‰Ë Ô Fried Î·È Û˘Ó190 ·fi ÙÔ 1976 ÛÂ ÌÈ· ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘˜ Ô˘ ¤ÁÈÓÂ ÛÙË

ÛÂÈÚ¿ SK-L7 ·ÓıÚÒÈÓˆÓ ·ÈÌÔÔÈËÙÈÎÒÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¤‰ÂÈÍ·Ó fiÙÈ ˘‹Ú¯Â Î¿-

ÔÈ· ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯›· ÛÙ· ÔÛÔÛÙ¿ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÂ ‰È¿ÊÔÚÂ˜

Ê¿ÛÂÈ˜ ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂÙ¿ ·fi ¯ÚÒÛË ÌÂ Èˆ‰ÈÔ‡¯Ô ÚÔ›‰ÈÔ ÌÂ

·˘Ù¿ Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ·˘ÙÔÚ·‰ÈÔÁÚ·Ê›· ÌÂÙ¿ ·fi Û‹Ì·ÓÛË ÌÂ Ú·‰ÈÂ-

ÓÂÚÁfi ı˘ÌÈ‰›ÓË. OÈ ÚÒÙÂ˜ ÚÔÛ¿ıÂÈÂ˜ fiÌˆ˜ ÁÈ· ÙËÓ ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛË ÙË˜

Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·˜ ÚÔ‹˜ ˆ˜ ÂÓ·ÏÏ·ÎÙÈÎ‹˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÁÈ· ÙÔÓ ¤ÏÂÁ¯Ô ÙË˜ ÏÂÈ-

ÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¿Ú¯ÈÛ·Ó fiˆ˜ Ê·›ÓÂÙ·È ·fi ‰È¿ÊÔÚÂ˜

‰ËÌÔÛÈÂ‡ÛÂÈ˜ ·fi Ù· Ì¤Û· ÙË˜ ‰ÂÎ·ÂÙ›·˜ ÙÔ˘ ’90.

O Maino Î·È Û˘Ó191 ÛÂ ÌÈ· ‰ËÌÔÛ›Â˘Û‹ ÙÔ˘˜ ÙÔ 1995 ÂÚÈ¤ÁÚ·„·Ó ÌÈ·

ÁÚ‹ÁÔÚË Ì¤ıÔ‰Ô ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂ ÙËÓ Ì¤-

ÙÚËÛË ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙÔ˘ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡ ‰Â›ÎÙË CD69 ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›·

ÚÔ‹˜. OÈ ÂÚÂ˘ÓËÙ¤˜ ·˘ÙÔ› ÁÓÒÚÈ˙·Ó fiÙÈ ÙÔ CD69 Â›Ó·È ¤Ó· ·fi Ù· ÚÒÙ·

·ÓÙÈÁfiÓ· Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ÛÙË ÂÈÊ¿ÓÂÈ· ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ Û·Ó ·ÔÙ¤ÏÂÛÌ· ÙË˜ in vitro ‰È¤ÁÂÚÛ‹˜ ÙÔ˘˜ ·fi ‰È¿ÊÔÚ· ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹

ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ·. £¤ÏÔÓÙ·˜ Ó· ·ÔÊ‡ÁÔ˘Ó Ù· ÌÂÈÔÓÂÎÙ‹Ì·Ù· Ô˘ ¯·Ú·ÎÙ‹-

ÚÈ˙·Ó ÙÈ˜ Ì¤¯ÚÈ ÙfiÙÂ ÌÂıfi‰Ô˘˜ ÂÏ¤Á¯Ô˘ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔ-

Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚·Û›˙ÔÓÙ·Ó Â›ÙÂ ÛÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓ-

ÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó Ú·‰ÈÂÓÂÚÁfi ı˘ÌÈ‰›ÓË (ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ÌÂÙ·ÌfiÚ-

ÊˆÛË˜) Â›ÙÂ ÛÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ Ô˘ ÂÎÎÚ›ÓÔÓÙ·È ·fi Ù·

ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙÔ ˘ÂÚÎÂ›ÌÂÓÔ Î·ÏÏÈÂÚÁÂÈÒÓ ÌÂÙ¿ ·fi ÙËÓ Â›-

‰Ú·ÛË Î¿ÔÈÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ‹ ÂÈ‰ÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘, ¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛ·Ó ÙË Î˘ÙÙ·-

ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Î·È ÙË ‰˘Ó·ÙfiÙËÙ· ÙË˜ ÔÏ˘·Ú·ÌÂÙÚÈÎ‹˜ ·Ó¿Ï˘ÛË˜ Ô˘

‰È·ı¤ÙÂÈ. ¢È·›ÛÙˆÛ·Ó ÏÔÈfiÓ fiÙÈ Ù· ÔÛÔÛÙ¿ ÙˆÓ Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿-

˙Ô˘Ó ÙÔ CD69 ÌÂÙ¿ ·fi Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ· ·ÚÔ˘Û›· Î¿ÔÈÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ‹ ÂÈ‰È-

ÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ (ÛÂ ÔÏÈÎfi ·›Ì· ‹ ·ÔÌÔÓˆÌ¤Ó· ÌÔÓÔÎ‡ÙÙ·Ú·) ‹Ù·Ó Û˘ÁÎÚ›-

ÛÈÌ· ÌÂ Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙË˜ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹˜ ÌÂıfi‰Ô˘. ∏ ÌÂÏ¤ÙË ·˘Ù‹

‹Ù·Ó Ë ÚÒÙË Ô˘ ¤‰ÂÈÍÂ fiÙÈ Ô ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi˜ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ,

Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ÂÏ¿¯ÈÛÙ· ‹ Î·ıfiÏÔ˘ ÛÙ· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· fiÙ·Ó ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È

ÛÂ Ê¿ÛË ËÚÂÌ›·˜ ·ÏÏ¿ ÂÎÊÚ¿˙ÔÓÙ·È ÛÂ ÌÂÁ¿ÏÔ ÔÛÔÛÙfi ÛÙ· ÂÓÂÚÁÔÔÈË-

Ì¤Ó· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÌÂÙ¿ ÙË ‰È¤ÁÂÚÛ‹ ÙÔ˘˜ ·fi ‰È¿ÊÔÚ· ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹ ÂÈ‰ÈÎ¿

·ÓÙÈÁfiÓ·, ÌÔÚÂ› Ó· ¯ÚËÛÈÌÔÔÈËıÂ› ÁÈ· ÙË ·ÍÈÔÏfiÁËÛË ÙË˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜

Î·È Î·Ù’ Â¤ÎÙ·ÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙÔ˘˜.

150

OÈ Mardiney Î·È Û˘Ó38 ¤Ó· ¯ÚfiÓÔ ÌÂÙ¿ ÙÔ 1996 ÂÈ‚Â‚·›ˆÛ·Ó ÙÈ˜ ·-

Ú·ÙËÚ‹ÛÂÈ˜ ÙˆÓ Maino Î·È Û˘Ó Î·È Î·Ù¤ÏËÍ·Ó ÛÙÔ Û˘Ì¤Ú·ÛÌ· fiÙÈ Ë Ì¤-

ÙÚËÛË ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙÔ˘ ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡ ‰Â›ÎÙË ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69 ÌÔ-

ÚÂ› Ó· ·Ô‚Â› ¯Ú‹ÛÈÌË ÛÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ·¿ÓÙËÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÛÙ· ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹ ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· ÛÂ ˘ÁÈ‹ ¿ÙÔÌ· ·ÏÏ¿ Î·È ÛÂ ÂÚÈÙÒÛÂÈ˜

‰È·Ù·Ú·¯‹˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁ›·˜ ÙÔ˘ ·ÓÔÛÈ·ÎÔ‡ Û˘ÛÙ‹Ì·ÙÔ˜ fiˆ˜ ÛÂ ·ÓÔÛÔ·-

ÓÂ¿ÚÎÂÈÂ˜ Î.¿.

OÈ Caruso Î·È Û˘Ó3 ÌÂÏÂÙÒÓÙ·˜ ÂÚÈÛÛfiÙÂÚÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›Ë-

ÛË˜ fiˆ˜ ÙÔ˘˜ CD25, CD69, CD71, HLA-DR ÌÂ ·ÓÔÛÔÊıÔÚÈÛÌfi Î·È Î˘Ù-

Ù·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Î·È Û˘ÁÎÚ›ÓÔÓÙ·˜ Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÌÂ ·˘Ù¿ Ô˘ ÚÔÎ‡ÙÔ˘Ó

·fi ÙËÓ ÎÏ·ÛÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜ ‰È·›-

ÛÙˆÛ·Ó fiÙÈ ˘‹Ú¯Â Û˘ÌÊˆÓ›· ÙˆÓ Â˘ÚËÌ¿ÙˆÓ ˆ˜ ÚÔ˜ ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ‰ÂÈ-

ÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ Î·È ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ·¿ÓÙËÛË˜ fiˆ˜ ÂÎÙÈÌ‹ıËÎÂ ÌÂ

ÙËÓ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜. ∂ÈÛ‹Ì·Ó·Ó fiÌˆ˜ fiÙÈ ÌÈÎÚ¤˜ ‰fi-

ÛÂÈ˜ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ‹ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ·ÚÎÔ‡Ó ÁÈ· ÙËÓ ‰È¤ÁÂÚÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÒÛÙÂ Ó· ÂÎÊÚ·ÛÙÔ‡Ó ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ ·ÏÏ¿ fi¯È ÁÈ· Ó· Â¿ÁÔ˘Ó ÙÔÓ

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌfi ÙÔ˘˜. £ÂÒÚËÛ·Ó ÏÔÈfiÓ ··Ú·›ÙËÙÔ Ó· ‰›ÓÂÙ·È È‰È·›ÙÂÚË

ÛËÌ·Û›· ÛÙÈ˜ Û˘Óı‹ÎÂ˜ ˘fi ÙÈ˜ ÔÔ›Â˜ ‰ÈÂÍ¿ÁÂÙ·È Ë ÌÂÏ¤ÙË Î·È ‰ÈÂ˘ÎÚ›ÓÈ-

Û·Ó fiÙÈ ÔÈ Ì¤ıÔ‰ÔÈ ‰ÂÓ Â›Ó·È ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Â˜ ·ÏÏ¿ Û˘ÌÏËÚˆÌ·ÙÈÎ¤˜.

OÈ Nielsen Î·È Û˘Ó192 ÂÊ¿ÚÌÔÛ·Ó ÛÂ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ HIV Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù·

ÙˆÓ ÚÔÁÂÓ¤ÛÙÂÚÒÓ ÙÔ˘˜ Î·È Î·Ù¤ÏËÍ·Ó ÛÙÔ Û˘Ì¤Ú·ÛÌ· fiÙÈ Ô ÚÔÛ‰ÈÔÚÈ-

ÛÌfi˜ ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69 Î·È CD25 ÌÔÚÂ› Ó·

¯ÚËÛÈÌÔÔÈËıÂ› ÁÈ· ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ·˘ÙÒÓ ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ. øÛÙfiÛÔ, ÔÈ Hutchinson Î·È Û˘Ó193 ÂÏ¤Á¯ÔÓÙ·˜

·ÛıÂÓÂ›˜ Ô˘ ¤·Û¯·Ó ·fi Î¿ÔÈ· ·ÓÔÛÔ·ÓÂ¿ÚÎÂÈ· Î·È Â›¯·Ó Î¿ÔÈ·

ÏÔ›ÌˆÍË ÙËÓ ÛÙÈÁÌ‹ ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ ‰È·›ÛÙˆÛ·Ó fiÙÈ ·Ú¿ ÙÔ ÁÂÁÔÓfi˜ fiÙÈ ÔÚÈ-

ÛÌ¤ÓÔÈ ÂÚÂ˘ÓËÙ¤˜ ‚Ú‹Î·Ó ·ÓÙÈÛÙÔÈ¯›· ÙË˜ ¤ÎÊÚ·ÛË˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔ-

Ô›ËÛË˜ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ÌÂ Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÙË˜ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹˜ ÌÂ-

ıfi‰Ô˘, ˘‹Ú¯Â ÂÚ›ÙˆÛË, ÛÂ ÔÚÈÛÌ¤ÓÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ (fiˆ˜ .¯. ÛÙË ‰ÈÎ‹

ÙÔ˘˜ ÛÂÈÚ¿) Ó· ÌËÓ Û˘Ì›ÙÔ˘Ó Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙˆÓ ‰‡Ô ÌÂıfi‰ˆÓ. °È·

ÙÔÓ ÏfiÁÔ ·˘ÙfiÓ ‰È·Ù‡ˆÛ·Ó ÙËÓ ¿Ô„Ë fiÙÈ ÙÔ CD69 ‰ÂÓ ·ÔÙÂÏÂ› ·fi Ìfi-

ÓÔ ÙÔ˘ Î·Ù¿ÏÏËÏÔ ‰Â›ÎÙË ÁÈ· ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌ-

ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ·ÊÔ‡ Â›Ó·È ÚÒÈÌÔ˜ ‰Â›ÎÙË˜ Î·È Ë ¤ÎÊÚ·Û‹ ÙÔ˘ ÌÔÚÂ› Ó· ÌËÓ

ÚÔ‰ÈÎ¿˙ÂÈ ··Ú·›ÙËÙ· ÙÔ ÙÂÏÈÎfi ÛÙ¿‰ÈÔ ÙÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡.

O Larsen2 ÌÂÙ¿ ÙËÓ ÂÎÙÂÓ‹ ÌÂÏ¤ÙË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔ-

ÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Î·È ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË˜ Î·ıÒ˜ Î·È ÔÈ Kohler

Î·È Û˘Ó1, ÌÂÙ¿ ·fi ‰È·‰Ô¯ÈÎ¤˜ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â-

ÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ Î·Ù¿ ÙËÓ ‰È¿ÚÎÂÈ· ÙË˜ Î·ÏÏÈ¤ÚÁÂÈ·˜ ÙÔ˘˜ ·ÚÔ˘Û›· ÌÈ-

151

ÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞ Î·È ÂÈ‰ÈÎÒÓ ·ÓÙÈÁfiÓˆÓ, Î·Ù¤ÏËÍ·Ó ÛÙÔ Û˘Ì¤Ú·ÛÌ· fiÙÈ Ë

·ÔÙ›ÌËÛË ÙÔ˘ ÔÛÔÛÙÔ‡ ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ Â›Ó·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ·ÔÙÂÏÂ›

·ÍÈfiÈÛÙÔ ‰Â›ÎÙË ÁÈ· ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜.

Œ¯ÔÓÙ·˜ ˘fi„Ë ÙÈ˜ ÚÔÛ¿ıÂÈÂ˜ ÙˆÓ ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓˆÓ ÂÚÂ˘ÓËÙÒÓ ÁÈ·

ÙË ‰ËÌÈÔ˘ÚÁ›· ÌÈ·˜ Ó¤·˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌ-

ÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚·Û›˙ÂÙ·È ÛÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜, ·Ó·Ù‡¯ıËÎÂ ÛÙËÓ

·ÚÔ‡Û· ÌÂÏ¤ÙË Ë ÂÚÈÁÚ·ÊÂ›Û· Ì¤ıÔ‰Ô˜ Î·È ÂÊ·ÚÌfiÛıËÎÂ ÛÂ ‰‡Ô ÔÌ¿-

‰Â˜ ·È‰ÈÒÓ. ∞Ú¯ÈÎ¿ ÂÊ·ÚÌfiÛıËÎÂ ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ ·È‰ÈÒÓ Ô˘

¯ÚËÛ›ÌÂ˘Û·Ó ˆ˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ Î·È ÛÙË Û˘Ó¤¯ÂÈ· ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ Ô˘

¤·Û¯·Ó ·fi ÓÂ·ÓÈÎ‹ È‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞). ∏ ÂÈÏÔÁ‹ ÙË˜ NIA ·fi

Ù· ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ¤ÁÈÓÂ ·ÊÂÓfi˜ ÁÈ·Ù› Â›Ó·È Ë Û˘¯ÓfiÙÂÚË

ÚÂ˘Ì·ÙÔ¿ıÂÈ· ÙË˜ ·È‰ÈÎ‹˜ ËÏÈÎ›·˜ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÁÈ·Ù› ˘‹Ú¯Â Ë ÁÓÒÛË

·fi ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓÂ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ fiÙÈ ÛÙË ƒÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· (ƒ∞) ÙˆÓ ÂÓË-

Ï›ÎˆÓ, Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›-

Ì·ÙÔ˜ Î·È ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ ÛÂ ‰È¿ÊÔÚ· ÌÈÙÔÁfiÓ· ‹ ÂÈ‰ÈÎ¿ ·ÓÙÈÁfiÓ· Â›Ó·È

ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ ˘ÁÈÂ›˜ ÂÓ‹ÏÈÎÂ˜.150-162 ™ÙÈ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ ·˘Ù¤˜

¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎÂ Ë Ú·‰ÈÔ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÌÂ [3H]-TdR.

™Â ¿ÏÏË ÌÂÏ¤ÙË ÔÈ Gerli Î·È Û˘Ó194 ÛÙÔ Î‡ÚÈÔ ¿ÚıÚÔ Û‡ÓÙ·ÍË˜ ÙÔ˘

“Rheumatology” ÙÔ 2002 ·Ó·Ê¤ÚÔ˘Ó ÂÎÙfi˜ ÙˆÓ ¿ÏÏˆÓ fiÙÈ Â›Ó·È ÁÂÓÈÎ¿

·Ô‰ÂÎÙfi fiÙÈ Ë ÚÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹˜ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· Â›Ó·È TH1 ÓfiÛÔ˜ ‰ÈfiÙÈ ˘ÂÚÙÂÚÔ‡Ó

Ù· Δ∏1 Ù‡Ô˘ Î‡ÙÙ·Ú· ÛÙÔ ·ÚıÚÈÎfi ˘ÁÚfi ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó Î˘-

Ú›ˆ˜ IL-2, IFN-Á Î·È IL-12. ¶ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓÂ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ ÙˆÓ Seitz M Î·È Û˘Ó195,

McKenna RM Î·È Û˘Ó196 Î·È ÙˆÓ Sadouk M Î·È Û˘Ó197 ¤‰ÂÈÍ·Ó ÂÏ·ÙÙˆÌ¤-

ÓË ¤ÎÎÚÈÛË Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ·fi Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜

·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÌÂÙ¿ ·fi Â›‰Ú·ÛË ÙÔ˘ ÌÈÙÔÁfiÓÔ˘ ƒ∏∞

ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ˘ÁÈ‹ ¿ÙÔÌ· Ô˘ ˘Ô‰ËÏÒÓÂÈ ÙË ÌÂÈˆÌ¤ÓË ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ· ÙˆÓ

Δ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ. ŸÏÂ˜ ÔÈ ÌÂÙÚ‹ÛÂÈ˜ ÛÙÈ˜ ÌÂÏ¤ÙÂ˜ ÙÔ˘˜ ¤ÁÈÓ·Ó ÛÙÔ Ï¿ÛÌ· ‹ ÛÙ·

˘ÂÚÎÂ›ÌÂÓ· Î·ÏÏÈÂÚÁÂÈÒÓ Ô˘ fiˆ˜ Î·È ÛÙËÓ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ‰ÂÓ

¤‰ÈÓ·Ó ÏËÚÔÊÔÚ›Â˜ ÁÈ· ÙÔÓ ÏËı˘ÛÌfi ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜

Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜.

°È· Ù· ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ Î·È È‰È·›ÙÂÚ· ÁÈ· ÙËÓ ·ÓÙ›-

ÛÙÔÈ¯Ë ÚÔ˜ ÙË ƒ∞ ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ ÓÂ·ÓÈÎ‹ È‰ÈÔ·ı‹ ·ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞), Ù·

‰Â‰ÔÌ¤Ó· Â›Ó·È ÔÏ‡ ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤Ó·.151,156,162 Δ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙË˜ ·ÚÔ‡-

Û·˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ ÂÈ‚Â‚·ÈÒÓÔ˘Ó fiÙÈ Î·È ÛÙË ¡π∞ Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· Â›Ó·È ·Ó¿ÏÔÁ·

ÌÂ ·˘Ù¿ ÙË˜ ƒ∞.

™˘ÓÔ„›˙ÔÓÙ·˜, Ù· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· ÙË˜ ·ÚÔ‡Û·˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ ÁÈ· ÙÔÓ ¤ÏÂÁ-

¯Ô ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÌÂÙ¿ ·fi ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚÈÎ‹

152

·Ó¿Ï˘ÛË ¤‰ÂÈÍ·Ó Ù· ÂÍ‹˜: ∏ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69

Î·È CD71 ÛÙ· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ‹Ù·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌË ÌÂÙ·Í‡ ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ

¡π∞ (ÔÌ¿‰· μ) ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ·fi 6ÌËÓË ıÂÚ·Â›· Î·È ÙË˜ ÔÌ¿‰·˜ ÙˆÓ

˘ÁÈÒÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ (ÔÌ¿‰· ∞). ∏ ¤ÎÊÚ·ÛË fiÌˆ˜ ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜

CD25 Î·È HLA-DR ÛÙ· CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ·˘-

ÍËÌ¤ÓË ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ

ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ ÂÓÒ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜ ÔÈ

‰‡Ô ·˘ÙÔ› ÏËı˘ÛÌÔ› ÂÏ·ÙÙÒıËÎ·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÈ˜ ·Ú¯ÈÎ¤˜ ÙÈ-

Ì¤˜ Î·È ÔÈ ÙÈÌ¤˜ ÙÔ˘˜ ¤ÁÈÓ·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌÂ˜ ÌÂ ·˘Ù¤˜ ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ. ∂›ÛË˜,

ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·Ó ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË fiˆ˜ Î·È

ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ

ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜

·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ ˘ÁÈÂ›˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ Î·È

·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ Î·È ÌÂÙ¿ ·fi 6 Ì‹ÓÂ˜ ıÂÚ·Â›·˜ ·Ú¿

ÙÔ ÁÂÁÔÓfi˜ fiÙÈ ·Ú·ÙËÚ‹ıËÎÂ ÌÈÎÚ‹ ·‡ÍËÛË. ŸÛÔÓ ·ÊÔÚ¿ ÙËÓ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË

ÙË˜ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ·˜ ·Ú·ÁˆÁ‹˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ ÌÂ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ ‚Ú¤-

ıËÎÂ fiÙÈ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘

·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-2 Î·È IFN-Á ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ

ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ ˘ÁÈÂ›˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜

Î·È ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ıÂÚ·Â›·˜ ÂÓÒ ÙÔ

ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó

IL-4 ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛÙ· ›‰È· Â›Â‰· ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË

ıÂÚ·Â›· Î·È ‹Ù·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌÔ ÌÂ ÙÔ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ô ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ Ì·ÚÙ‡-

ÚˆÓ.

∞fi Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· ·˘Ù¿ ÚÔÎ‡ÙÂÈ fiÙÈ ÌÂÙ¿ ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ,

Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ

NIA ÛÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ ‹ ÙË˜ ˘ÔÙÚÔ‹˜ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÛÂ ÌÂÁ¿ÏÔ ÔÛÔ-

ÛÙfi ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ Ô˘ ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ıÂÚ·Â›·˜

·ÔÎ·ı›ÛÙ·ÓÙ·È ÛÂ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ Â›Â‰·. ∏ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË

fiÌˆ˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· fiˆ˜ Ê·›ÓÂÙ·È ·fi ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂ-

ÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ Î·È ‰ÂÓ ‚ÂÏÙÈÒÓÂÙ·È ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÛÙÔ

¯ÚÔÓÈÎfi ‰È¿ÛÙËÌ· ÙˆÓ 6 ÌËÓÒÓ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜. ΔÔ ›‰ÈÔ ·-

Ú·ÙËÚÂ›Ù·È Î·È ·fi ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·-

ÛÌÔ‡ Ki-67. E›ÛË˜, Ë ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·Ú·ÁˆÁ‹ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ IL-2 Î·È

IFN-Á Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘-

ÚÂ˜ Î·È ‰ÂÓ ‚ÂÏÙÈÒÓÂÙ·È ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÛÙÔ ¯ÚÔÓÈÎfi ‰È¿ÛÙËÌ· ÙˆÓ 6 ÌËÓÒÓ ·fi

ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜.

153

ΔÔ ÁÂÁÔÓfi˜ fiÙÈ Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÙË˜ ·ÚÔ‡Û·˜ ÌÂÏ¤ÙË˜, Ô˘ ¯ÚËÛÈÌÔÔ›Ë-

ÛÂ Ì¤ıÔ‰Ô ÌÂ ‚¿ÛË ÙËÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚ›· ÚÔ‹˜ Î·È ÙËÓ DNA ·Ó¿Ï˘ÛË ÛÂ

·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA Û˘ÌÊˆÓÔ‡Ó ÌÂ Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÚÔËÁÔ‡ÌÂÓˆÓ ÌÂÏÂÙÒÓ Ô˘

¯ÚËÛÈÌÔÔ›ËÛ·Ó Ú·‰ÈÔ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ÛÂ ÂÓ‹ÏÈÎÂ˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ƒ∞

Î·È ÛÂ ÂÚÈÔÚÈÛÌ¤ÓÔ ·ÚÈıÌfi ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ NIA, ‰Â›¯ÓÔ˘Ó fiÙÈ Ë ÂÊ·ÚÌÔÁ‹

ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ·˘Ù‹˜ ÁÈ· ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ·¿ÓÙËÛË˜ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ

ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· ‰›ÓÂÈ ·ÍÈfiÈÛÙ· ·ÔÙÂÏ¤ÛÌ·Ù· Î·È ÌÔÚÂ› Ó· ·ÓÙÈÎ·Ù·ÛÙ‹ÛÂÈ

ÙËÓ Û˘Ì‚·ÙÈÎ‹ Ú·‰ÈÔ˚ÛÔÙÔÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ÁÈ· ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙË-

Ù·˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ¯ˆÚ›˜ ÙË ¯Ú‹ÛË Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡.

154

¶ ∂ ƒ π § ∏ æ ∏

∂π™∞°ø°∏. ªÈ· ¿ÌÂÛË Ì¤ıÔ‰Ô˜ ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ÏÂÈÙÔ˘ÚÁÈÎfiÙËÙ·˜

ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â›Ó·È Ë ÂÎÙ›ÌËÛË ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ÌÂÙ·ÌfiÚÊˆÛË˜

ÙÔ˘˜ ÌÂ ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛË˜ ÙË˜ Ú·‰ÈÂÓÂÚÁÔ‡ ı˘ÌÈ‰›ÓË˜

[3H]-TdR ÌÂÙ¿ ·fi ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË (in vitro) ÔÚÈÛÌ¤ÓˆÓ Ô˘ÛÈÒÓ ÁÓˆÛÙÒÓ ˆ˜

ÌÈÙÔÁfiÓ· Ô˘ Â¿ÁÔ˘Ó ÙË ÌË ÂÈ‰ÈÎ‹ ‰È·ÊÔÚÔÔ›ËÛË ÚÔÎ·ÏÒÓÙ·˜ DNA

Û‡ÓıÂÛË Î·È ‚Ï·ÛÙÔÁ¤ÓÂÛË.

™∫O¶O™. ™ÎÔfi˜ ÙË˜ ÌÂÏ¤ÙË˜ ‹Ù·Ó Ó· ·ÓÙÈÎ·Ù·ÛÙ‹ÛÔ˘ÌÂ ÙË Û˘Ì‚·-

ÙÈÎ‹ Ú·‰ÈÔ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎ‹ Ì¤ıÔ‰Ô ÂÎÙ›ÌËÛË˜ ÙË˜ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹˜ ÌÂÙ·ÌfiÚ-

ÊˆÛË˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ˘fi ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ ·fi ÌÈ· Ì¤ıÔ‰Ô,

Ë ÔÔ›· ‚·Û›˙ÂÙ·È ÛÙË ¯Ú‹ÛË ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÔÌÂÙÚËÙ‹ ÚÔ‹˜ (‚·ÛÈÎfi fiÚÁ·ÓÔ

ÛÙÔÓ ÂÍÔÏÈÛÌfi ÂÓfi˜ ·ÓÔÛÔÏÔÁÈÎÔ‡ ÂÚÁ·ÛÙËÚ›Ô˘) Î·È ÙËÓ ÂÊ·ÚÌÔÁ‹ ÙË˜

DNA ·Ó¿Ï˘ÛË˜.

À§π∫O – ª∂£O¢O™. ø˜ ˘ÏÈÎfi ÂÊ·ÚÌÔÁ‹˜ ÙË˜ ÌÂıfi‰Ô˘ ÂÈÏ¤ÁËÛ·Ó

25 ˘ÁÈ‹ ·È‰È¿ ËÏÈÎ›·˜ 2-16 ÂÙÒÓ (Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜) Î·È 24 ·È‰È¿ ÌÂ ¡Â·ÓÈÎ‹

π‰ÈÔ·ı‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· (¡π∞) ËÏÈÎ›·˜ 2,5-16 ÂÙÒÓ. ∏ ÂÈÏÔÁ‹ ÙË˜ NIA ·fi Ù·

ÚÂ˘Ì·ÙÈÎ¿ ÓÔÛ‹Ì·Ù· ÙˆÓ ·È‰ÈÒÓ ¤ÁÈÓÂ ·ÊÂÓfi˜ ÁÈ·Ù› Â›Ó·È Ë Û˘¯ÓfiÙÂÚË

ÚÂ˘Ì·ÙÔ¿ıÂÈ· ÙË˜ ·È‰ÈÎ‹˜ ËÏÈÎ›·˜ Î·È ·ÊÂÙ¤ÚÔ˘ ÁÈ·Ù› ˘‹Ú¯Â Ë ÁÓÒÛË

fiÙÈ ÛÙË ƒÂ˘Ì·ÙÔÂÈ‰‹ ∞ÚıÚ›ÙÈ‰· (ƒ∞) ÙˆÓ ÂÓËÏ›ÎˆÓ (ÛÙË NIA ÔÏ‡ ÂÚÈÔ-

ÚÈÛÌ¤Ó· ‰Â‰ÔÌ¤Ó·) Ë ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈ-

ÙÔÁfiÓ· Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË. ŸÏÔÈ ÔÈ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ ¡π∞ ÌÂÏÂÙ‹ıËÎ·Ó ÛÂ ÂÓÂÚ-

Áfi Ê¿ÛË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ·ÓÙÈÚÂ˘Ì·ÙÈÎ‹˜ ·ÁˆÁ‹˜. ¶ÚÔÛ-

‰ÈÔÚ›ÛıËÎÂ Ë ¤ÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69, CD71, CD25,

HLA-DR Î·È ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ÛÙ·

CD3+ T Î‡ÙÙ·Ú· ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ

ÌÂ PE Î·È FITC. ∏ ÊıÔÚ›˙Ô˘Û· ¯ÚˆÛÙÈÎ‹ PI Î·È ÙÔ ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎfi ·ÓÙ›Ûˆ-

Ì· ·ÓÙÈ- BrdU FITC ¯ÚËÛÈÌÔÔÈ‹ıËÎ·Ó ÁÈ· ÙÔÓ ÚÔÛ‰ÈÔÚÈÛÌfi ÙË˜ S-Ê¿ÛË˜

ÙÔ˘ Î˘ÙÙ·ÚÈÎÔ‡ Î‡ÎÏÔ˘. ∏ ·Ó›¯ÓÂ˘ÛË ÙË˜ ·Ú·ÁˆÁ‹˜ ÙˆÓ ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈˆÓ

Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ IL-2, IFN-Á Î·È πL-4 ·fi Ù· ÂÓÂÚÁÔÔÈËÌ¤Ó· CD3+CD69+

155

T Î‡ÙÙ·Ú· ¤ÁÈÓÂ ÌÂ ÙË ¯Ú‹ÛË ÌÔÓÔÎÏˆÓÈÎÒÓ ·ÓÙÈÛˆÌ¿ÙˆÓ ÛÂÛËÌ·ÛÌ¤ÓˆÓ

ÌÂ PE-Cy5, FITC Î·È PE.

∞¶OΔ∂§∂™ª∞Δ∞. ∏ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙˆÓ ‰ÂÈÎÙÒÓ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ CD69

Î·È CD71 (Relative Mean Fluorescence Intensity, RMFI) ÛÙ· CD3+ T

Î‡ÙÙ·Ú· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜ ‹Ù·Ó Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌË ÌÂÙ·Í‡ ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ

Î·È ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÙfiÛÔ ÚÈÓ fiÛÔ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· (p= 0.261 Î·È p=

0.197 ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·). H RMFI ÙˆÓ CD25+ Î·È HLA-DR+ CD3+ T Î˘ÙÙ¿-

ÚˆÓ ‚Ú¤ıËÎÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ·˘ÍËÌ¤ÓË ÛÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ ¡π∞ ÚÈÓ

ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ ÙËÓ ÔÌ¿‰· ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡-

ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 14,8(12,2-16) vs 9,7(8,2-11,7) Î·È 18,3(16,5-26,7) vs 11,4(10,3-

13,6) ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01] Î·È 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· ÔÈ ‰‡Ô ·˘ÙÔ› Î˘Ù-

Ù·ÚÈÎÔ› ÏËı˘ÛÌÔ› ÂÏ·ÙÙÒıËÎ·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÛÂ Û‡ÁÎÚÈÛË ÌÂ ÙÈ˜ ·Ú¯ÈÎ¤˜ ÙÈ-

Ì¤˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 11,2(9,1-12,3) vs 9,7(8,2-11,7) Î·È

13,4(10,8-14,5) vs 11,4(10,3-13,6) ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01] Ô˘ ¤ÁÈÓ·Ó Û˘ÁÎÚ›-

ÛÈÌÂ˜ ÌÂ ÙÈ˜ ÙÈÌ¤˜ ÙˆÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ. ∂›ÛË˜ ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ÙÔ % ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ

CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË ÌÂÙ¿ ·fi ¯ÚÒÛË ÌÂ ƒπ

‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿Ú-

Ù˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 13,5(7,07-25,9) vs 29(19,3-49,1),

p<0.05] Î·È ·Ú¿ ÙË ÌÈÎÚ‹ ·‡ÍËÛË Ô˘ ÛËÌÂÈÒıËÎÂ ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿

¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ):

17,7(11,2-35,8) vs 29(19,3-49,1), p<0.05]. ΔÔ % ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ CD3+ T Î˘Ù-

Ù¿ÚˆÓ Ô˘ ÂÓÛˆÌ¿ÙˆÛ·Ó BrdU ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂ-

ÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ):

19,3(9,9-22,4) vs 38(23,4-49,3), p<0.05] Î·È ·Ú¿ ÙË ÌÈÎÚ‹ ·‡ÍËÛË Ô˘ ÛË-

ÌÂÈÒıËÎÂ ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›·

[‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 25,6(12,8-38,2) vs 38(23,4-49,3), p<0.05]. ΔÔ

ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ ıÂÙÈÎÒÓ ÁÈ· ÙÔ ˘ÚËÓÈÎfi ·ÓÙÈÁfiÓÔ ÔÏ-

Ï·Ï·ÛÈ·ÛÌÔ‡ Ki-67 ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÛÂ Û¯¤ÛË

ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 49(23-55,6) vs 72,7(67,1-

85,8), p<0.05] Î·È ·Ú¿ ÙË ÌÈÎÚ‹ ·‡ÍËÛË Ô˘ ÛËÌÂÈÒıËÎÂ ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛË-

Ì·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈ-

ÌÒÓ): 58(25,8-77) vs 72,7(67,1-85,8), p<0.05]. ΔÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔ-

ÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó ÙÈ˜ Î˘ÙÙ·ÚÔÎ›ÓÂ˜ IL-

2 Î·È IFN-Á ‚Ú¤ıËÎÂ fiÙÈ ‹Ù·Ó ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ

NIA ÚÈÓ ÙË ıÂÚ·Â›· ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ ˘ÁÈÂ›˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ [‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡-

ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 10,8(7,2-18,2) vs 18,3(13,3-22,8) Î·È 12(4,1-29) vs 24,2(16,4-

32,14) ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01] Î·È ·Ú¿ ÙË ÌÈÎÚ‹ ·‡ÍËÛË Ô˘ ÛËÌÂÈÒıËÎÂ

156

·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ¯·ÌËÏfiÙÂÚÔ 6 Ì‹ÓÂ˜ ÌÂÙ¿ ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜

[‰È¿ÌÂÛË ÙÈÌ‹ (Â‡ÚÔ˜ ÙÈÌÒÓ): 14,7(8-19,4) vs 18,3(13,3-22,8) Î·È 18,9(11,5-

34) vs 24,2(16,4-32,14) ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯·, p<0.01] ÂÓÒ ÙÔ ÔÛÔÛÙfi % ÙˆÓ ÂÓÂÚÁÔ-

ÔÈËÌ¤ÓˆÓ CD3+CD69+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ·Ú¿ÁÔ˘Ó IL-4 ·Ú¤ÌÂÈÓÂ ÛÙ·

›‰È· Â›Â‰· ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÚÈÓ Î·È ÌÂÙ¿ ÙË ıÂÚ·Â›· Î·È ‹Ù·Ó

Û˘ÁÎÚ›ÛÈÌÔ ÌÂ ÙÔ ·ÓÙ›ÛÙÔÈ¯Ô ÔÛÔÛÙfi ÙˆÓ ˘ÁÈÒÓ Ì·ÚÙ‡ÚˆÓ (p= 0.132).

Δ· Â˘Ú‹Ì·Ù· ÙÔ˘ ·ÚıÚÈÎÔ‡ ˘ÁÚÔ‡ fiÛÔÓ ·ÊÔÚ¿ ÙÔ˘˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔ-

Ô›ËÛË˜ ÙˆÓ CD3+ T Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Â›¯·Ó Î·Ï‹ Û˘Û¯¤ÙÈÛË (r=0,83) ÌÂ Ù· Â˘-

Ú‹Ì·Ù· ÙÔ˘ ÂÚÈÊÂÚÈÎÔ‡ ·›Ì·ÙÔ˜.

∞fi Ù· Â˘Ú‹Ì·Ù· ·˘Ù¿ ÚÔÎ‡ÙÂÈ fiÙÈ ÌÂÙ¿ ÙËÓ Â›‰Ú·ÛË ÌÈÙÔÁfiÓˆÓ,

Ù· ÏÂÌÊÔÎ‡ÙÙ·Ú· Ô˘ ÚÔ¤Ú¯ÔÓÙ·È ·fi ÙÔ ÂÚÈÊÂÚÈÎfi ·›Ì· ·ÛıÂÓÒÓ ÌÂ

NIA ÛÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ÓfiÛÔ˘ ‹ ÙË˜ ˘ÔÙÚÔ‹˜ ÂÎÊÚ¿˙Ô˘Ó ÛÂ ÌÂÁ¿ÏÔ ÔÛÔ-

ÛÙfi ÂÈÊ·ÓÂÈ·ÎÔ‡˜ ‰Â›ÎÙÂ˜ ÂÓÂÚÁÔÔ›ËÛË˜ Ô˘ ÌÂÙ¿ 6 Ì‹ÓÂ˜ ıÂÚ·Â›·˜

·ÔÎ·ı›ÛÙ·ÓÙ·È ÛÂ Ê˘ÛÈÔÏÔÁÈÎ¿ Â›Â‰·. ∏ ‚Ï·ÛÙÔÁÂÓÂÙÈÎ‹ ·¿ÓÙËÛË

fiÌˆ˜ ÙˆÓ ÏÂÌÊÔÎ˘ÙÙ¿ÚˆÓ ÛÂ ÌÈÙÔÁfiÓ· fiˆ˜ Ê·›ÓÂÙ·È ·fi ÙËÓ ÂÎÙ›ÌËÛË

ÙˆÓ Î˘ÙÙ¿ÚˆÓ Ô˘ ‚Ú›ÛÎÔÓÙ·È ÛÙËÓ S-Ê¿ÛË Â›Ó·È ÂÏ·ÙÙˆÌ¤ÓË ÛÙÔ˘˜ ·ÛıÂ-

ÓÂ›˜ ÌÂ NIA ÛÂ Û¯¤ÛË ÌÂ ÙÔ˘˜ Ì¿ÚÙ˘ÚÂ˜ Î·È ‰ÂÓ ‚ÂÏÙÈÒÓÂÙ·È ÛËÌ·ÓÙÈÎ¿ ÛÙÔ

¯ÚÔÓÈÎfi ‰È¿ÛÙËÌ· ÙˆÓ 6 ÌËÓÒÓ ·fi ÙËÓ ¤Ó·ÚÍË ÙË˜ ıÂÚ·Â›·˜. ΔÔ ›‰ÈÔ ·-

Ú·ÙËÚÂ›Ù·È Î·È ·fi ÙËÓ ¤ÎÊÚ·ÛË ÙÔ˘ ˘ÚËÓÈÎÔ‡ ·ÓÙÈÁfiÓÔ˘ ÔÏÏ·Ï·ÛÈ·-

ÛÌÔ‡ Ki-67. E›ÛË˜, Ë ÂÓ‰ÔÎ˘ÙÙ¿ÚÈ· ·Ú·ÁˆÁ‹ ÙˆÓ Î˘ÙÙ·ÚÔÎÈÓÒÓ IL-2 Î·È

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ÓÂÚÁÔ‡ ˘ÏÈÎÔ‡.

157

A B S T R A C T

INTRODUCTION. Lymphocyte proliferation can be induced in vitro

by mitogens or specific antigens and is usually measured using isotopic

methods involving tritiated thymidine. This method of tritiate thymidine in-

corporation evaluates the lymphocyte activation and proliferation response

and estimates the cell function.

AIM OF THE STUDY. The aim of this study was to set up a method

using flow cytometry and DNA analysis which could replace the conven-

tional radioimmunoassay.

MATERIALS AND METHODS. 25 healthy children aged 2-16 yrs

and 24 JIA patients aged 2.5-16 yrs were studied. The healthy children

served as controls. JIA was selected because it is the commonest rheumatic

disease of children and because there are data that there is poor response

to mitogens in patients with RA. Data on JIA pts are still limited. All JIA

patients were investigated during the active phase of the disease and before

initiation of any treatment as well as 6- months thereafter. The activation

markers CD69, CD71, CD25, HLA-DR and the proliferation nuclear anti-

gen Ki-67 were determined on CD3+ T cells using the relevant monoclonal

antibodies conjugated with PE and FITC. The fluorescent dye PI and anti-

BrdU FITC were used to assess the S-phase of the cell cycle. Detection of

intracellular IL-2, IFN-Á and IL-4 cytokine production was measured by the

peripheral blood CD3+ T cells expressing the CD69 antigen using the rele-

vant monoclonal antibodies conjugated with PE-Cy5, FITC and PE.

RESULTS. The Relative Mean Fluorescence Intensity (RMFI) of

CD69+ and CD71+ CD3+ T cells was comparable between controls and

patients before and after treatment (p=0.261 and p=0.197 respectively).

The Relative Mean Fluorescence Intensity (RMFI) of CD25+ and HLA-

DR+ CD3+ T cells were found to be significantly increased in the patient

group compared to the controls [median (min-max):14,8(12,2-16) vs 9,7(8,2-

159

11,7) and 18,3(16,5-26,7) vs 11,4(10,3-13,6) respectively, p<0.01] pre-treat-

ment. Six months post-treatment, these two cell populations were signifi-

cantly reduced in comparison to the baseline values [11,2(9,1-12,3) vs

9,7(8,2-11,7) and 13,4(10,8-14,5) vs 11,4(10,3-13,6) respectively, p<0.01]

and were comparable to the control values. The percentage of CD3+ T cells

after PHA stimulation in S phase stained with propidium iodide (PI) or in-

corporate BrdU were found to be significantly decreased in JIA patients

than in controls pre-treatment [13,5(7,07-25,9) vs 29(19,3-49,1) p<0.05 and

19,3(9,9-22,4) vs 38(23,4-49,3) p<0.05, respectively] and remained signifi-

cantly decreased 6 months post-treatment [17,7(11,2-35,8) vs 29(19,3-49,1)

p<0.05 and 25,6(12,8-38,2) vs 38(23,4-49,3) p<0.05, respectively]. The per-

centage of CD3+ T cells expressing Ki-67 was found to be significantly low-

er in JIA patients than in controls pre-treatment [49(23-55,6) vs 72,7(67,1-

85,8), p<0.05] and maintained significantly decreased 6 months post-treat-

ment [58(25,8-77) vs 72,7(67,1-85,8), p<0.05].

The percentage of CD3+CD69+ T cells producing IL-2 Î·È IFN-Á

were found to be significantly decreased in JIA patients than in controls

pre-treatment [10,8(7,2-18,2) vs 18,3(13,3-22,8) and 12(4,1-29) vs 24,2(16,4-

32,14) respectively, p<0.01] and maintained significantly decreased 6

months post-treatment [14,7(8-19,4) vs 18,3(13,3-22,8) and 18,9(11,5-34) vs

24,2(16,4-32,14) respectively, p<0.01]. The percentage of CD3+CD69+ T

cells producing IL-4 was comparable between controls and patients before

and after treatment (p=0.132). The activation markers in CD3+ T cells of

the synovial fluid were well correlated (r=0.83) with those of circulating T

cells.

These findings indicate that T cells of JIA patients under mitogen sti-

mulation express surface activation markers in a great percentage at the

time of the disease onset or relapse and they restore to normal values six

months post-treatment. T cell blastogenic response to mitogen, as observed

during the evaluation of T cells in S phase was found to be decreased in JIA

patients compared to the controls and did not significantly improved 6

months post-treatment. The same observation was recorded regarding the

expression of the proliferation nuclear antigen Ki-67. The intracellular IL-2

and IFN-Á production was found to be decreased in JIA patients compared

to the controls and did not significantly improved 6 months post-treatment.

CONCLUSIONS. The findings of this study involving the assessment

of a method using flow cytometry and DNA analysis in JIA are in agree-

160

ment with findings of previous studies using radioimmunoassay. These indi-

cate that the application of this method leads to reliable results and can re-

place the conventional radioimmunoassay for the evaluation of T cell acti-

vation and proliferation response.

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